Molekularbiologische Untersuchungen zur Alkaloid-Biosynthese und zur beta-Untereinheit der H-+-ATP-Synthase von Lupinus albus:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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| adam_text | 7- INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE DER
NATURWISSENSCHAFTLICH-MATHEMATISCHEN GESAMTFAKULTAET DER RUPRECHT - KARLS
- UNIVERSITAET HEIDELBERG VORGELEGT VON DIPLOM-BIOLOGE MICHAEL HANKE AUS
HEIDELBERG TAG DER MUENDLICHEN PRUEFUNG: 22.02.95 INHALTSVERZEICHNIS
EINLEITUNG 1.1 AMINOSAEUREN-DECARBOXYLASEN UND
CHINOLIZIDIN-ALKALOID-BIOSYNTHESE 1 1.1.1 AMINOSAEUREN-DECARBOXYLASEN 1
.1.2 AMINOSAEUREN-DECARBOXYLASEN BEI PROKARYONTEN UND BEI PFLANZEN 2 .1.3
DIE BEDEUTUNG DER CHINOLIZIDIN-ALKALOIDE FUER DIE GATTUNG LUPINUS 3 .1.4
DIE BIOSYNTHESE DER CHINOLIZIDIN-ALKALOIDE BEI LUPINUS 4 .2 MOLEKULARE
EVOLUTION UND MOLEKULARBIOLOGIE DER ATPASEN 5 .2.1 MOLEKULARE EVOLUTION
S .2.2 THEORIEN ZUR KLASSIFIZIERUNG VON ORGANISMEN 6 .2.3
ENDOSYMBIONTEN-HYPOTHESE 8 .2.4 DIE CHEMIOSMOTISCHE HYPOTHESE 9 .2.5
ATP-PHOSPHOHYDROLASEN (ATPASEN) 9 .2.5.1 FT ATP-SYNTHASEN (F-TYP
ATPASEN) 10 .2.5.2 VAKUOLAERE ATPASEN (V-TYP ATPASEN) 10 .2.5.3 ATPASEN
DER ARCHAEBAKTERIEN (A-TYP ATPASEN) 12 .2.6 GENORGANISATION DER F-TYP
ATPASEN 12 .2.7 INTRON-SEQUENZEN IN ORGANELLEN 14 .2.8 TRANSKRIPTION DER
CHLOROPLASTEN-GENE ATPB UND RBCL 15 1.3 PROBLEMSTELLUNG 17 2. MATERIAL
UND METHODEN 18 2.1 MATERIAL 18 CHEMIKALIEN, ENZYME UND KITS 18 .1
FEINCHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 18 .2 RADIOCHEMIKALIEN 18 .3 ENZYME 18 .4
KITS FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE ANWENDUNGEN 19 .2 BAKTERIENSTAEMME,
PLASMID- UND PHAGEN-DNA, OLIGONUKLEOTIDE 19 .2.1 BAKTERIENSTAEMME 19 .2.2
PLASMID-DNA, OLIGONUKLEOTIDE, MARKER 19 .3 TECHNISCHE HILFSMITTEL 20
.3.1 GERAETE 20 .3.2 SONSTIGES 20 .3.3 SOFTWARE FUER DIE AUSWERTUNG VON
NUKLEIN-UND AMINOSAEURE-DATEN 20 .3.4 SEQUENZDATEN AUS DATENBAENKEN 20 .4
ZUSAMMENSETZUNG HAEUFIG VERWENDETER PUFFER UND MEDIEN 22 2.2 HAEUFIG
VERWENDETE METHODEN 23 2.2.1 PRAEZIPITATION VON NUKLEINSAEUREN 23 2.2.2
ENTFERNUNG VON ENZYMEN AUS WAESSRIGEN LOESUNGEN 23 2.2.3 PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN UND DNA-OLIGOMEREN 23 2.2.3
DNA-GELELEKTROPHORESE 24 2.2.5 ISOLIERUNG VON PLASMIDEN AUS
BAKTERIENKULTUREN 24 2.2.6 AUFREINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN
(PCR-PRIMER) 24 2.3 RNA-ISOLIERUNG 25 2.3.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA 25
2.3.2 ISOLIERUNG VON POLY(A) + RNA AUS PFLANZENGEWEBE 25 2.4 SYNTHESE
VON CDNA 28 2.4.1 ERST- UND ZWEITSTRANG-SYNTHESE 28 2.5 UEBERPRUEFUNG DER
CDNA-QUALITAET MIT HILFE EINES AGAROSEGELS 29 2.6 MODIFIKATION DER CDNA
ZUR LIGATION IN EINEN VEKTOR 29 2.7 PRAEPARATION EINES PLASMID-VETORS FUER
DIE LIGATION DER CDNA 30 2.8 LIGATION VON CDNA IN EINEN PLASMID-VEKTOR .
30 2.9 KOMPETENTE ZELLEN FUER DIE ELEKTROPORATION 30 2.10 TRANSFORMATION
VON K »//-ZEILEN MITTELS ELEKTROPORATION 30 2.11 POLYMERASE
KETTENREAKTION (PCR) 31 2.11.1 DURCHFUEHRUNG DER PCR 33 2.11.2
ISOLIERUNG VON DNA AUS PFLANZENGEWEBE FUER DIE PCR 33 2.11.3 ISOLIERUNG
VON BAKTERIELLER DNA FUER DIE PCR 34 2.12 SPEZIELLE ANWENDUNGEN DER PCR
34 2.12.1 CHARAKTERISIERUNG MONIERTER DNA MITTELS PCR (INSERT-ANALYSE)
34 2.12.1.1 UNIVERSELLE INSERT-ANALYSE MITTELS PCR 34 2.12.1.2
SPEZIFISCHE INSERT-ANALYSE MITTELS PCR 36 2.12.1.3
ORIENTIERUNGSSPEZIFISCHE INSERT-ANALYSE MITTELS PCR 36 2.12.1.4
DURCHFUEHRUNG DER INSERT-PCR 36 2.12.2 REAMPLIFIZIERUNG VON DNA AUS EINEM
AGAROSEGEL 38 2.12.3 MARKIERUNG VON DNA MIT HILFE DER PCR 38 2.13
REINIGUNG VON PCR-PRODUKTEN 39 2.14 LIGATION VON PCR-PRODUKTEN IN EINEN
PLASMID-VEKTOR 39 2.14.1 T/A KLONIERUNG 39 2.15 HYBRIDISIERUNGSANALYSE
40 2.15.1 KAPILLAR-TRANSFER VON DNA (SOUTHERN BLOT) 40 2.15.2
HYBRIDISIERUNG MIT DIG-MARKIERTER DNA-SONDE 41 2.15.3 DETEKTION VON
DIG-MARKIERTEN SONDEN 41 2.16 SEQUENZIERUNG VON DNA (METHODE NACH
SANGER) 42 2.16.1 SEQUENZIERUNG VON PLASMIDEN 42 2.16.2
DNAPOLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 43 2.16.3 DIREKTE DNA-SEQUENZIERUNG
VON PCR-PRODUKTEN 44 2.17 EXPRESSION DER LDC VON B. SUBTILIS IN EINEM
PROKARYONTISCHEN SYSTEM 45 2.17.1 KLONIERUNG DES LDC-GENS IN EINEN
EXPESSIONSVEKTOR 45 2.17.2 EXPRESSIONSKULTUR UND AUFREINIGUNG DER LDC 45
2.18 NACHWEIS VON PROTEINEN 47 2.18.1 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 47
2.18.2 SDS-POLYACRYLGELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE). 47 2.19 NACHWEIS DER
LDC-ENZYMAKTIVITAET 47 2.20 METHODEN ZUR ERSTELLUNG VON PHYLOGENETISCHEN
BAEUMEN 49 2.20.1 MEGA 49 2.20.2 PAUP 50 3. ERGEBNISSE 51 3.1 ERSTELLUNG
DER CDNA-BANK VON LUPINUS ALBUS 51 3.1.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA UND
POLY(A) + RNA AUS BLATTGEWEBE 51 3.1.2 SYNTHESE DER CDNA 52 3.1.3
KLONIERUNG DER CDNA VON LUPINUS ALBUS IN E. COLI 52 3.2 SEQUENZIERUNG
VON REKOMBINANTEN PLASMIDEN AUS DER CDNA-BANK VON LUPINUS ALBUS 53 3.2.1
ANALYSE DER DNA-SEQUENZ VON KLONEN AUS DER CDNA-BANK VON LUPINUS ALBUS 5
3 3.2.2 ANALYSE DES KLONS 18 (18S RRNA) 53 3.2.3 ANALYSE DES KLONS 4 55
3.2.3.1 ANALYSE DES INTRON-BEREICHES AM 3 ENDE VON ATPB MITTELS DER PCR
55 3.2.3.2 KOMPLETTIERUNG DES GENS ATPB MITTEL S DER PCR 56 3.2.3.3
CHARAKTERISIERUNG DER DNA-SEQUENZ VON ATPB UND DEM INTERGENBEREICH
ZWISCHEN ATPB UND RBCL VON LUPINUS ALBUS 57 3.3 CHARAKTERISIERUNG DER
DNA-SEQUENZ ZWISCHEN DEN GENEN ATPB UND ATPE BEI VERSCHIEDENEN
PFLANZENSPEZIES 62 3.3.1 AMPLIFIKATION DES BEREICHES ZWISCHEN DEN GENEN
ATPB UND ATPE MITTELS PCR 62 3.3.2 DIREKTE SEQUENZIERUNG DES
UEBERGANGBEREICHES ZWISCHEN ATPB UND ATPE 65 3.4 PHYLOGENETISCHE
UNTERSUCHUNGEN MITTELS DNA-SEQUENZEN VON ATPB UND ATPE 65 3.5
CHARAKTERISIERUNG UNTERSCHIEDLICHER H* ATPASE-TYPEN 69 3.5.1 PHYLOGENIE
DER F-TYP, V-TYP UND A-TYP H* ATPASE 69 3.5.2 CHARAKTERISIERUNG VON
ATPASEN-UNTEREINHEITEN ANHAND IHRER AMINOSAEUREN 80 3.6 UNTEREINHEIT SS
DER H* ATP-SYNTHASE ALS PHYLOGENETISCHER MARKER 80 3.7 AMPLIFIKATION DER
TRYPTHOPHAN-DC MITTELS ABGELEITETER PRIMER VON CATHARANTHUS ROSEUS 95
3.8 ABGELEITETE PCR-PRIMER VON DER ARGININ-DC UND TRYPTOPHAN-DC 95 3.9
AMPLIFIKATION DES GENS FUER DIE LDC BEI PROKARYONTEN 96 3.9.1
AMPLIFIKATION EINES 340 BP. LANGEN DNA-ABSCHNITTS DER LDC 96 3.9.2
DIG-MARKIERTE DNA-SONDE MITTELS PCR 96 3.9.3 PCR MITTELS ABGELEITETER
PRIMER VON B. SUBUELIS 97 3.9.4 AMPLIFIZIERUNG EINES 808 BP. LANGEN
DNA-ABSCHNITTS DER LDC VON B. SUBTILIS * 97 3.9.5 AMPLIFIKATION DES GENS
FUER DIE LDC MITTELS AM 3 ENDE LOKALISIERTEN PRIMERN 99 3 9.6 MOLEKULARE
CHARAKTERISIERUNG DER GENS FUER DIE LDC VON B. SUBTILIS 102 3.10
EXPRESSION DER LDC VON B. SUBTILIS 105 4. DISKUSSION 107 4.1 ISOLIERUNG
DER RNA, SYNTHESE DER CDNA UND ERSTELLUNG DER CDNA-BANK 107 4.2 ANALYSE
VON REKOMBINANTEN PLASMIDEN 107 4.2.1 DNA-SEQUENZEN MIT NICHT
DETERMINIERBARER ZUORDNUNG 107 4.2.2 SSRKNA ON LUPINUS ALBUS 108 4.2.3
ANALYSE DES KLONS 4 108 4.3 DAS RBCL-ATPB-ATPE GEN-CLUSTER VON LUPINUS
ALBUS 109 4.3.1 PROMOTOR-BEREICHE DER GENE ATPB UND RBCL 109 4.4
CHARAKTERISIERUNG DES BEREICHES ZWISCHEN ATPB UND ATPE 11 1 4.4.1
DNA-SEQUENZVERGLEICH DES UEBERGANGBEREICHES ZWISCHEN ATPB UND ATPE 111
4.4.2 GENORGANISATION VON ATPB UND ATPE BEI DER FAMILIE APIACEAE 114
4.4.3 ERSTELLUNG EINES STAMMBAUMS AUFGRUND DES UEBERGANGBEREICHES
ZWISCHEN DEN GENEN ATPB UND ATPE 114 4.5 PHYLOGENIE VERSCHIEDENER H*
ATPASE-TYPEN 115 4.6 UNTEREINHEIT SS DER FTATP-SYNTHASE ALS
PHYLOGENETISCHER MARKER 116 4.6.1 DER HAUPTAST DER PIASTIDEN UND
CYANOBAKTERIEN 117 4.6.2 DER HAUPTAST DER EUBAKTERIEN UND MITOCHONDRIEN
119 4.6.3 DER HAUPTAST DER ARCHAEBAKTERIEN 120 4.7
AMINOSAEUREN-DECARBOXYLASEN 120 4.7.1 AMPLIFIZIERUNG DER LDC MITTELS PCR
120 4.7.2. EXPRESSION DER LDC VON B. SUBTILIS 123 5. ZUSAMMENFASSUNG 124
5.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE ERGEBNISSE ZU LUPINUS ALBUS UND ANDEREN
PFLANZENSPEZIES 124 5.2 MOLEKULARE PHYLOGENIE DER SS-UNTEREINHEIT DER
JTATP-SYNTHASE 125 5.3 KLONIERUNG UND EXPRESSION DER LYSIN-DECARBOXYLASE
126 6. LITERATURVERZEICHNIS 128
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| spelling | Hanke, Michael Verfasser aut Molekularbiologische Untersuchungen zur Alkaloid-Biosynthese und zur beta-Untereinheit der H-+-ATP-Synthase von Lupinus albus [vorgelegt von Michael Hanke] 1995 141 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Heidelberg, Univ., Diss., 1995 Weiße Lupine (DE-588)4226535-6 gnd rswk-swf Genklonierung (DE-588)4123275-6 gnd rswk-swf Biosynthese (DE-588)4006902-3 gnd rswk-swf Chinolizidinalkaloide (DE-588)4147705-4 gnd rswk-swf Wasserstoff-ATP-Synthase (DE-588)4165283-6 gnd rswk-swf Phylogenie (DE-588)4076110-1 gnd rswk-swf Decarboxylasen (DE-588)4148964-0 gnd rswk-swf Untereinheit (DE-588)4335882-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Weiße Lupine (DE-588)4226535-6 s Chinolizidinalkaloide (DE-588)4147705-4 s Biosynthese (DE-588)4006902-3 s Decarboxylasen (DE-588)4148964-0 s Genklonierung (DE-588)4123275-6 s DE-604 Wasserstoff-ATP-Synthase (DE-588)4165283-6 s Untereinheit (DE-588)4335882-2 s Phylogenie (DE-588)4076110-1 s GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=006757476&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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