Fusion und Regeneration von Protoplasten der Sonnenblume (Helianthus annuus): Entwicklung von Modellen zur Selektion binärer Heterokaryonten
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1994
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1994 (Nicht für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS. I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS . IV
1. EINLEITUNG . 1
1.1 DIE ZUECHTUNG DER SONNENBLUME 2
1.1.1 KLASSISCHE METHODEN . 2
1.1.2 IN VITRO-TECHNIKEN . 3
1.2 REGENERATION VON
HELIANTHUS 4
1.2.1 PFLANZENREGENERATION AUS GEWEBEN . 4
1.2.2 PFLANZENREGENERATION AUS PROTOPLASTEN . 5
1.3 SELEKTION UND ANREICHERUNG VON SOMATISCHEN HYBRIDEN . 5
1.4 ZIEL DER DISSERTATION . 7
2. MATERIAL UND METHODEN 8
2.1 MEDIEN UND PUFFER 8
2.1.1 PFLANZENANZUCHTMEDIUM . 8
2.1.2 ENZYMLOESUNGEN . 9
2.1.2.1 HYPOKOTYL-ENZYME . 9
2.1.2.2 KOTYLEDONEN-ENZYME . 9
2.1.2.3 MESOPHYLL-ENZYME . 9
2.1.2.4 PETIOLEN-ENZYME . 9
2.1.3 PUFFER FUER DIE PROTOPLASTENISOLATION 10
2.1.3.1 SALZPUFFER . 10
2.1.3.2 SACCHAROSE-LOESUNG . 10
2.1.4 MEDIUM ZUR MASSENFUSION . 10
2.1.4.1 MANNIT-LOESUNG 10
2.1.5 MEDIEN ZUR PROTOPLASTENTRENNUNG IM DICHTEGRADIENTEN 10
2.1.5.1 PERCOLL-MEDIEN 10
2.1.6 MEDIEN ZUR MAGNETISCHEN ZELLSORTIERUNG . 11
2.1.6.1 MARKIERUNGSLOESUNG . 11
2.1.6.2 BICIN-SALZPUFFER 11
2.1.6.3 FUSIONSLOESUNG 11
2.1.6.4 SAEULENPUFFER . 11
2.1.6.5 ELUTIONSPUFFER 12
2.1.7 FLUESSIGMEDIEN . 13
2.1.8 FESTMEDIEN 14
2.1.9 HORMONZUGABEN 14
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INLULTSVERZEICLUIIS
2.2 PFLANZENMATERIAL 15
2.2.1 KULTURSORTEN 15
2.2.2 SAMENSTERILISATION UND PFLANZENANZUCHT . 15
2.3 PROTOPLASTENISOLIERUNG . 16
2.3.1 PRAEPARATION DER DONORGEWEBE . 16
2.3.2 AUFREINIGUNG DER PROTOPLASTEN . 17
2.3.3 BESTIMMUNG DER PROTOPLASTENAUSBEUTE, -GROSSE UND
PLATTIERUNGSEFFIZIENZ 18
2.4 ELEKTROFUSION . 19
2.5 SELEKTION VON FUSIONSPRODUKTEN 20
2.5.1 PERCOLLGRADIENT 20
2.5.2 MAGNETISCHE ZELL SORTIERUNG . 23
2.6 REGENERATION . 25
2.6.1 AGAROSETROPFENKULTUR 25
2.6.1.1 IMMOBILISIERUNG 25
2.6.1.2 KULTIVIERUNG . 26
2.6.2 ORGANOGENESE . 27
2.6.2.1 KALLUSKULTUR 27
2.6.2.2 SPROSSKULTUR 27
2.6.2.3 PFROPFUNG . 28
2.6.3 EMBRYOGENESE . 28
2.7 IDENTIFIZIERUNG DER SOMATISCHEN HYBRIDE 28
3. ERGEBNISSE . 29
3.1 PFLANZENANZUCHT 29
3.2 PROTOPLASTENISOLATION 31
3.3 GROESSENVERTEILUNG DER PROTOPLASTEN . 32
3.4 ELEKTROFUSION . 33
3.5 SELEKTION VON FUSIONSPRODUKTEN 34
3.5.1 PERCOLLGRADIENT . 34
3.5.2 MAGNETISCHE ZELLSORTIERUNG . 38
3.5.2.1 VORVERSUCHE 38
3.5.2.2 FUSION . 47
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.6 REGENERATION . 49
3.6.1 AGAROSETROPFENKULTUR 49
3.6.2 KULTUR AUF FESTMEDIUM 52
3.6.2.1 KALLUSKULTUR . 52
3.6.2.2 INDIREKTE EMBRYOIDBILDUNG 54
3.6.2.3 ORGANOGENESE 56
3.6.2.4 FUSIONSEXPERIMENTE . 63
3.7 IDENTIFIKATION VON FUSIONSPRODUKTEN . 66
4. DISKUSSION . 68
4.1 ERSTELLUNG EINES REGENERATIONSPROTOKOLLES . 68
4.2 PROTOPLASTENQUELLE . 69
4.3 ELEKTROFUSION . 71
4.4 MODELLE ZUR SELEKTION SOMATISCHER HYBRIDE . 74
4.4.1 PERCOLLGRADIENT . 74
4.4.2 MAGNETISCHE ZELLSORTIERUNG . 75
4.5 REGENERATION . 78
4.5.1 AGAROSETROPFENKULTUR 78
4.5.2 SOMATISCHE EMBRYOGENESE . 82
4.5.3 ORGANOGENESE . 84
4.6 REGENERATION UND IDENTIFIKATION VON FUSIONSPRODUKTEN . 89
4.7 AUSBLICK . 90
5. ZUSAMMENFASSUNG . 91
6. LITERATURVERZEICHNIS . 93
7. ABBILDUNGSVERZEICHNIS . 107
8. TABELLENVERZEICHNIS . 110
III |
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