Proteintransport über die mitochondriale Aussenmembran:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Wiss. Verl. Korneli
1995
|
| Schriftenreihe: | Hochschulschriften-Reihe
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | V, 113 S. graph. Darst. |
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INHALT
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
FUNKTION
UND
STRUKTUR
DER
MITOCHONDRIEN
2
1.2.
IMPORT
UND
SORTIERUNGSWEGE
BEIM
MITOCHONDRIALEN
PROTEINIMPORT
3
1.3.
KOOPERATION
DER
IMPORTAPPARATE
7
1.4.
DER
UNGEWOEHNLICHE
WEG
DES
APOCYTOCHROM
C
8
1.5.
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
10
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1.
ANZUCHT
VON
NEUROSPORA
CRASSA
11
2.2.
ISOLIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
11
2.3.
PRAEPARATION
DER
MITOCHONDRIALEN
AUSSENMEMBRAN
12
2.4.
EINFUHREN
GEREINIGTER
PROTEINE
IN
DAS
LUMEN
ISOLIERTER
AUSSENMEMBRAN-VESIKEL
13
2.5.
REINIGUNG
DER
MATRIX-PROZESSIERUNGSPEPTIDASE
14
2.5.1.
REINIGUNG
DER
A-UNTEREINHEIT
14
2.5.2.
REINIGUNG
DER
B-UNTEREINHEIT
15
2.6.
SYNTHESE
RADIOAKTIV
MARKIERTER
VORSTUFENPROTEINE
16
2.6.1.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
16
2.6.2.
IN-VITRO
TRANSKRIPTION
17
2.6.3.
IN-VITRO
TRANSLATION
17
2.7.
IN-VITRO
IMPORTREAKTIONEN
18
2.7.1.
STANDARD-IMPORTANSATZ
18
2.7.2.
BLOCKIERUNG
DES
IMPORTS
VON
DHFR
FUSIONSPROTEINEN
MIT
METHOTREXAT
19
2.7.3.
DEPLETION
DES
IMPORTANSATZES
VON
ATP
19
2.7.4.
BLOCKIERUNG
VON
KOMPONENTEN
DES
IMPORTAPPARATES
MIT
GEREINIGTEN
IGG
19
2.7.5.
PROTEASEVORBEHANDLUNG
VON
MITOCHONDRIEN
UND
AUSSENMEMBRANVESIKELN
19
2.8.
FRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
UND
AUSSENMEMBRANEN
MITTELS
DIGITONIN,
BESCHALLUNG
ODER
ALKALISCHER
EXTRAKTION 20
2.9.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
21
2.9.1.
GEWINNUNG
POLYKLONALER
ANTISEREN
21
2.9.2.
PRAEPARATION
GEREINIGTER
IMMUNGLOBULINE
G
(IGG)
22
2.9.3.
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
EINE
NITROCELLULOSEMEMBRAN
22
2.9.4.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AUF
EINER
NITROCELLULOSEMEMBRAN
23
2.9.5.
IMMUNOADSORPTION
VON
PROTEINEN
23
2.10.
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
MIT
TRICHLORESSIGSAEURE
23
2.11.
GELE
24
2.11.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
24
2.11.2.
COOMASSIE
UND
SILBERFAERBUNG
25
2.11.3.
FLUOROGRAPHIE
25
2.12.
PROTEINBESTIMMUNG
26
2.13.
CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
26
2.13.1.
CHEMIKALIEN
26
2.13.2.
GERAETE
27
3.
ERGEBNISSE
28
3.1.
REINIGUNG
DER
MITOCHONDRIALEN
AUSSENMEMBRAN
28
3.2.
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
AUSSENMEMBRANEN
33
3.3.
PROTEINIMPORT
IN
AUSSENMEMBRANVESIKEL
35
3.3.1.
INSERTION
VON
AUSSENMEMBRANPROTEINEN
3
5
3.3.2.
TRANSLOKATION
EINES
INTERMEMBRANRAUM-PROTEINS
39
3.3.3.
DIE
TRANSLOKATION
HAENGT
VON
M0M19
AB
42
3.3.4.
ATP-ABHAENGIGKEIT
DES
IMPORTS
43
3.3.5.
BINDUNG
UND
IMPORT
MEMBRANPOTENTIAL-ABHAENGIGER
PROTEINE
46
3.4.
TEILWEISE
TRANSLOKATION
PRAESEQUENZ-TRAGENDER
VORSTUFEN
47
3.4.1.
ENTWICKLUNG
EINES
NACHWEISES
FUER
DIE
TEILWEISE
TRANSLOKATION
47
3.4.1.1.
EINSCHLUSS
DER
GEREINIGTEN
UNTEREINHEITEN
VON
MPP
IN
DIE
VESIKEL
47
3.4.1.2.
PROZESSIERUNG
VON
VORSTUFEN
DURCH
EINGESCHLOSSENES
MPP
50
3.4.I.3.
ABHAENGIGKEIT
DER
PROZESSIERUNG
VON
DER
INSERTION
IN
DEN IMPORTAPPARAT
52
3.4.2.
REVERSIBLE
WECHSELWIRKUNG
DES
REIFEN
TEILS
MIT
DEM
TRANSLOKATIONSAPPARAT
53
3.4.3.
STABILISIERUNG
HARNSTOFF-DENATURIERTER
VORSTUFEN
DURCH
DEN
TRANSLOKATIONSAPPARAT
57
3.4.4.
ENTFALTUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
INSERTION
IN
DEN
TRANSLOKATIONSAPPARAT
61
3.4.5.
STUFEN
DER
PRAESEQUENZBINDUNG
AN
DEN
IMPORTAPPARAT
64
3.4.6.
REVERSIBILITAET
DER
INSERTION
68
3.4.7.
ABHAENGIGKEIT
DER
INSERTION
VON
NUDEOSIDTRIPHOSPHATEN
69
IV
3.5.
IMPORT
VON
APOCYTOCHROM
C
71
3.5.1.
IMPORT
IN
MITOCHONDRIEN
71
3.5.2.
IMPORT
IN
GEREINIGTE
AUSSENMEMBRANVESIKEL
74
3.5.3.
EINSCHLUSS
VON
APOCYTOCHROM
C-SPEZIFISCHEN
IGG
IN
AUSSENMEMBRAN
VESIKEL
75
3.5.4.
IGG-STIMULIERTER
IMPORT
VON
APOCYTOCHROM
C
IN
VESIKEL
75
3.5.5.
REVERSIBILITAET
DER
TRANSLOKATION
78
3.5.6.
SALZABHAENGIGKEI
T
DES
IMPORTS
84
4.
DISKUSSION
85
4.1.
DIE
AKTIVITAET
DES
TRANSLOKATIONSAPPARATES
DER
MITOCHONDRIALEN
AUSSENMEMBRAN
85
4.2.
INITIATION
DES
IMPORTS
PRAESEQUENZ-TRAGENDER
VORSTUFEN
86
4.3.
CHAPERON-AEHNLICHE
FUNKTIONEN
DES
TRANSLOKATIONSAPPARATS
88
4.4.
MODELL
ZUR
WECHSELWIRKUNG
PRAESEQUENZ-TRAGENDER
VORSTUFEN
MIT
DEM
TRANSLOKATIONSAPPARAT
90
4.5.
IMPORT
VON
APOCYTOCHROM
C
95
5.
ZUSAMMENFASSUNG
99
6.
LITERATUR
101 |
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