Isolierung, Reinigung und Charakterisierung der Urease (Urea Amidohydrolase EC 3.5.1.5) aus den Cyanophyceen Synechocystis PCC 6803, Spirulina maxima SAG B 84.79 und Anabaena variabilis ATCC 29413:
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1995
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SAETE
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
A.
EINLEITUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
.
1
1.
DIE
ORGANISMEN
.
1
2.
DAS
ENZYM
UREASE
.
10
3.
PROBLEMSTELLUNG
.
15
B.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
.
16
1.
ANZUCHT
UND
WACHSTUM
DER
MIKROORGANISMEN
.
16
1.1
WACHSTUMSKURVEN
VON
SYNECHOCYSTIS
PCC
6803
.
17
1.2
WACHSTUMSKURVEN
VON
SPIRULINA
MAXIMA
SAG
B
84.79
.
20
1.3
WACHSTUMSKURVEN
VON
ANABAENA
VARIABILIS
ATCC
29413
.
21
2.
DIE
WIRKUNG
VON
UREASE-INHIBITOREN
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
SPIRULINA
MAXIMA
.
23
2.1
UEBERBLICK
UEBER
DIE
VERSCHIEDENEN
KLASSEN
AN
UREASE-INHIBITOREN
.
23
2.1.1
SUBSTRATANALOGA
.
23
2.1.2
METALLIONEN
UND
METALLORGANISCHE
VERBINDUNGEN
.
24
2.1.3
HYDROXAMSAEUREN
.
24
2.1.4
N-ACYLPHOSPHORTRIAMIDE
UND
DIAMIDOPHOSPHORSAEUREARYLESTER
.
25
2.1.5
WEITERE
UREASE-INHIBITOREN
.
25
2.2
WIRKUNG
DER
HYDROXAMSAEUREN
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
SPIRULINA
MAXIMA
.
26
2.3
WIRKUNG
VON
PPDA
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
SPIRULINA
MAXIMA
.
29
3.
GEWINNUNG
UND
AUSBEUTE
DER
DREI
CYANOBAKTERIEN
.
31
SEITE
4.
ISOLIERUNG
DER
UREASE
AUS
DEN
DREI
CYANOPHYCEEN
.
32
4.1
AUFSCHLUSS
DER
ORGANISMEN
.
34
4.2
PROTEINAUFAERBEITUNGSSCHRITTE
.
35
4.3
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
36
4.3.1
GELFILTRATION
.
36
4.3.2
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
37
4.3.3
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
38
4.4
VERGLEICH
DER
REINIGUNGSSCHRITTE
DER
UREASEN
AUS
DEN
DREI
CYANOPHYCEEN
.
44
5.
CHARAKTERISIERUNG
DER
GEREINIGTEN
UREASE
AUS
SYNECHOCYSTIS,
SPIRUIINA
MAXIMA
UND
ANABAENA
VARIABILIS
.
49
5.1
GELELEKTROPHORETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
49
5.2
STABILITAET
UND
HALTBARKEIT
DER
ENZYME
.
53
5.3
TEMPERATUR-OPTIMA
DER
ENZYME
.
54
5.4
PH-OPTIMA
DER
ENZYME
.
56
5.5
KINETIKEN
.
58
5.6
ZELLULAERE
LOKALISATION
DER
UREASE
.
63
5.7
INHIBITOREN
.
65
5.8
AMINOSAEURENZUSAMMENSETZUNG
DER
UREASEN
AUS
DEN
DREI
CYANOPHYCEEN
.
67
5.9
BESTIMMUNG
DES
C-TENNINALEN
ENDES
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
70
5.10
BESTIMMUNG
DES
N-TERMINALEN
ENDES
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
74
5.11
ANSEQUENZIERUNG
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
MIT
EINEM
GASPHASEN
PROTEIN/PEPTID-SEQUENZER
.
76
5.12
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTS
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
78
5.13
BESTIMMUNG
DES
NICKEL-GEHALTS
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
80
C.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
82
1.
HERKUNFT
DER
MIKROORGANISMEN
.
82
2.
CHEMIKALIEN
.
82
SAETE
3.
ANZUCHT
UND
GEWINNUNG
DER
CYANOPHYCEEN
.
83
3.1
SYNECHOCYSTIS
PCC
6803
.
84
3.2
SPIRULINA
MAXIMA
SAG
B
84.79
.
85
3.3
ANABAENA
VARIABILIS
AICC
29413
.
86
4.
ISOLIERUNG
DES
ROHENZYMS
AUS
DEN
DREI
CYANOPHYCEEN
.
88
4.1
SYNECHOCYSTIS
PCC
6803
.
88
4.2
SPIRULINA
MAXIMA
SAG
B
84.79
.
89
4.3
ANABAENA
VARIABILIS
ATCC
29413
.
89
S.
CHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
DER
ENZYME
.
90
5.1
GELFILTRATION
.
90
5.2
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
90
5.3
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
90
6.
SYNTHESEN
.
91
6.1
SYNTHESE
DER
AFFINITAETSSAEULEN
.
91
6.2
SYNTHESE
VON
E-AMINOCAPRONHYDROXAMSAEURE
.
93
6.3
SYNTHESE
VON
P-AMINOETHYLPHOSPHORSAEUREDIAMIDAT
.
94
7.
QUANTITATIVE
PHOTOMETRISCHE
TESTS
.
97
7.1
AKTIVITAETSTEST
NACH
BERTHELOT
.
97
7.2
PROTEINTEST
.
98
7.3
HAMSTOFFBESTIMMUNG
.
99
7.4
HYDROXAMSAEUREN
.
99
7.5
HYDROXYHAMSTOFF
.
99
7.6
PHENYLPHOSPHORDIAMIDAT
.
100
8.
ANALYTISCHE
METHODEN
.101
8.1
AMINOSAEURENZUSAMMENSETZUNG
DER
UREASEN
DER
DREI
CYANOPHYCEEN
.
101
8.2
BESTIMMUNG
DES
C-TERMINALEN
ENDES
DER
ENZYME
.
102
8.2.1
BESTIMMUNG
MIT
HILFE
VON
CARBOXYPEPTIDASEN
.
102
8.2.2
BESTIMMUNG
MITTELS
HYDRAZINOLYSE.
102
8.3
BESTIMMUNG
DES
N-TERMINALEN
ENDES
DER
ENZYME
.103
SEITE
8.3.1
BESTIMMUNG
MIT
DANSYLCHLORID
.
103
8.3.2
BESTIMMUNG
MIT
DEM
NACH
CHANG
MODIFIZIERTEN
EDMAN-ABBAU
.
104
8.3.3
ANSEQUENZIERUNG
MIT
EINEM
GASPHASEN-PROTEIN/PEPTID-SEQUENZER
.
105
8.4
POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESEN
.
107
8.4.1
SDS-ELEKTROPHORESE
FUER
HORIZONTALE
GELE
.
107
8.4.2
DISKONTINUIERLICHE
POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
7,5%
VERNETZT
.
109
8.5
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
.
110
8.6
NICKEL-BESTIMMUNG
AM
ICP
.
112
D.
ZUSAMMENFASSUNG
.
113
E.
LITERATURVERZEICHNIS
.
116 |
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