Mikrobieller Abbau von Acetonitril und Vinylacetat und Charakterisierung von Vinylacetatesterase:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | Undetermined |
| Veröffentlicht: |
1995
|
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| Beschreibung: | Bayreuth, Univ., Diss., 1995 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
1
1.1
MIKROBIELLER
ABBAU
VON
ACETONITRIL
3
1.2
MIKROBIELLE
HYDROLYSE
VON
VINYLACETAT
UND
CHARAKTERI
SIERUNG
VON
VINYLACETATESTERASE
AUS
BAKTERIUM
V8
8
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
12
2.1
ORGANISMEN
UND
ZELLANZUCHT
12
2.1.1
ORGANISMEN
12
2.1.2
NAEHRMEDIUM
12
2.1.3
ZELLANZUCHT
VON
CORYNEBACTERIUM
UEBT
9
(DSM
4803)
UND
BAKTERIUM
V2
13
2.1.4
WACHSTUMSMESSUNGEN
13
2.15
ERNTE
UND
AUFBEWAHRUNG
DER
BAKTERIEN
13
2.1.6
BESTIMMUNG
VON
BAKTERIENTROCKENGEWICHTEN
13
2.1.7
REINHEITSKONTROLLEN
14
2.1.8
STAMMKULTUREN
14
2.1.8.1
STAMMHALTUNG
AUF
AGARPLATTEN
14
2.1.8.2
STAMMHALTUNG
IN
FLUESSIGSTICKSTOFF
14
22
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
14
23
HERSTELLUNG
VON
CYTOPLASMA
UND
MEMBRAN
FRAKTIONEN
15
2.4
PROTEINBESTIMMUNG
15
2.4.1
PROTEINBESTIMMUNG
AN
ZELLFREIEN
EXTRAKTEN
15
2.4.2
PROTEINBESTIMMUNG
AN
GANZEN
ZELLEN
16
2.5
ANALYTISCHE
METHODEN
16
2.5.1
NACHWEIS
VON
NITRILEN,
AMIDEN
UND
ACETAT
16
2.5.2
GASCHROMATOGRAPISCHE
BESTIMMUNG
VON
VINYL
ACETAT,
ETHANOL
ACETALDEHYD
UND
ACETAT
17
253
NACHWEIS
VON
AMMONIUM
17
25.4
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
VON
^4CET-NITRIL-HYDRATASE
UND
ACET-AMIDASE
IN
GANZEN
ZELLEN
18
2.55
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
18
2.55.1
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
VON VINYLACETATESTERASE
IN
GANZEN
ZELLEN
18
25.5.2
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
VON
VINYLACETATESTERASE
IN
ZELLFREIEN
EXTRAKTEN
2.55.3
KOPPLUNG
DER
AKTIVITAET
DER
VINYLACETATESTERASE
AN
EINE
NAD
+
-ABHAENGIGE
ALDEHYD-DEHYDROGENASE
2.55.4
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
MIT
INDOXYLACETAT
2.5.6
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
ANDERER
ENZYMAKTIVITAETEN
25.6.1
ALDEHYD-DEHYDROGENASE
25.6.2
REDUKTASEAKTIVITAET
DER
ALKOHOL-DEHYDROGENASE
25.6.3
OXIDASEAKTIVITAET
DER
ALKOHOL-DEHYDROGENASE
2.6
ABBAU
VON
ACETONITRIL
2.7
ISOLIERUNG
UND
ANREICHERUNG
VON
VINYLACETATESTERASE
2.7.1
AMMONIUMSULFAT-FRAKTIONIERUNG
2.7.2
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
2.7.3
KONZENTRIERUNG
VON
PROTEINLOESUNGEN
2.7.4
DIALYSE
VON
PROTEINLOESUNGEN
2.7.5
CHROMATOGRAPHIE
AN
HYDROXYLAPATIT
2.7.6
FARBLIGAND-CHROMATOGRAPHIE
2.7.7
CHROMATOGRAPHIE
AN
METALL-CHELATING
SEPHAROSE
2.8
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
2.8.1
GEL-HERSTELLUNG
2.8.2
PROBEAUFGABE
2.8.3
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
2.8.4
AUFBEWAHRUNG
2.9
PROTEINFAERBUNGEN
2.9.1
UNSPEZIFISCHE
PROTEINFAERBUNG
2.9.2
AKTIVITAETSFAERBUNG
FUER
ESTERASE
2.10
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
2.10.1
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
DURCH
GELFILTRATION
2.10.2
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
DURCH
GELELEKTROPHORESE
2.11
LYOPHILISIERUNG
NITRIL-ABBAUENDER
BAKTERIEN
2.11.1
METHODE
A
2.11.2
METHODE
B
2.12
IMMOBILISIERUNG
NITRIL-ABBAUENDER
BAKTERIEN
DURCH
EINSCHLUSS
IN
ORGANISCHE
POLYMERE
2.12.1
AGAR-VERFAHREN
2.12.2
K-KARRAGENAN-VERFAHREN
19
19
20
29
29
31
32
32
33
33
33
33
2.123
ALGINAT-VERFAHREN
33
2.12.4
CHITOSAN-VERFAHREN
34
2.13
GASE
UND
CHEMIKALIEN
34
3.
EXPERIMENTE
UND
ERGEBNISSE
35
3.1
MIKROBIELLER
ABBAU
VON
ACETONITRIL
35
3.1.1
UEBERPRUEFUNG
VERSCHIEDENER BAKTERIENISOLATE
AUF
VERWERTUNG
VON
ACETONITRIL
35
3.1.2
WACHSTUM
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
MIT
ACETONITRIL
37
3.1.3.
ABBAU
VON
ACETONITRIL
DURCH
ACETONITRIL-INDUZIERTE
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
39
3.13.1
ABBAU
VON
ACETONITRIL
DURCH
LYOPHILISIERTE
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
39
3.13.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ABBAUREAKTION
42
3.13.2.1
STOECHIOMETRIE
DES
ACETONITRILABBAUS
42
3.13.2.2
EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
AUF
DIE
ABBAUAKTIVITAET
44
3.13.2.3
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
AUF
DIE
ABBAUAKTIVITAET
45
3.13.2.4
EINFLUSS
DER
ACETONITRIL-KONZENTRATION
AUF
DIE
ABBAUAKTIVITAET
46
3.1.4
INDUKTION
DER
ACET-NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
ACET-AMIDASE
IN
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
47
3.1.4.1
ACET-NITRIL-HYDRATASE
IST
INDUZIERBAR
UND
ACET-AMIDASE
KONSTITUTIV
47
3.1.4.2
EINFLUSS
DER
ACETONITRIL-KONZENTRATION
AUF
DAS
WACHSTUM
UND
DIE
BIOSYNTHESE
DER
ACET-NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
ACET-AMIDASE
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
49
3.1.43
EINFLUSS
VON
INTERMEDIAEREN
DER
ACETONITRILUMSETZUNG
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
ACET-NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
ACET
AMIDASE
BEI
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
51
3.1.4.4
EINFLUSS
DER
ALIPHATISCHEN
NITRILE
AUF
DIE
AKTIVITAET
VON
ACET-NITRIL-HYDRATASE
UND
ACET-AMIDASE
IN
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
52
3.13
ACETONITRILABBAU
DURCH
2-PENTENSAEURENITRIL-INDUZIERTE
ZELLEN
57
3.13.1
ABHAENGIGKEIT
DES
ACETONITRILABBAUS
VON
DER
MENGE
DER
MIT
2-PENTENSAEURENITRIL-INDUZIERTEN
ZELLEN
57
3.133
EINFLUSS
VON
HEFEEXTRAKT
UND
PEPTON
AUF
DIE
ABBAUAKTIVITAET
60
3.1.53
EINFLUSS
VON
METALLIONEN
UND
ANDEREN
MOEGLICHEN
BESTANDTEILEN
VON
HPLC-ABWAESSEM
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
ACEF-NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
ACET
AMIDASE
61
3.1.5.4
EINFLUSS
VON
INTERMEDIAEREN
DER
ACETONITRILUMSETZUNG
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
ACET-NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
ACET-AMIDASE
IN
GANZEN
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
63
3.1.6
ACETONITRILABBAU
DURCH
IMMOBILISIERTE
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
65
3.1.6.1
IMMOBILISIERUNG
DER
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
DURCH
EINSCHLUSS
IN
ORGANISCHE
POLYMERE
65
3.1.6.2
ACETONITRILABBAU
DURCH
IN
K-KARRAGENAN
IMMOBILISIERTE
ZELLEN
67
3.1.6.3
EIGENSCHAFTEN
DER
IN
K-KARRAGENAN
IMMOBILISIERTEN
ZELLEN
69
3.1.6.3.1
PH-OPTIMUM
UND
PH-STABILITAET
70
3.1.6.3.2
TEMPERATUROPTIMUM
UND
THERMISCHE
STABILITAET
73
3.1.6.3.3
EINFLUSS
DER
ACETONITRIL-KONZENTRATION
AUF
DIE
ABBAUAKTIVITAET
DER
IN
K-KARRAGENAN
IMMOBILISIERTEN
ZELLEN
75
3.1.6.3.4
DIE
ENZYMSTABILITAET
DER
IN
K-KARRAGENAN
IMMOBILISIERTEN
ZELLEN
BEI
WIEDERHOLTEN
REAKTIONSANSAETZEN
77
3.1.7
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
NITRIL-HYDRATASE
UND
DER
AMIDASE
VON
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
79
32
ABBAU
VON
VINYLACETAT
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
AUS
BAKTERIUM
V2
80
3.2.1.
STOFFWECHSELPHYSIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
VON
BAKTERIUM
V2
80
3.2.1.1
DAS
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
AUF
VINYLACETAT
80
3.2.1.2
ABHAENGIGKEIT
DES
WACHSTUMS
VON
BAKTERIUM
V2
UND
DER
VINYLACETATESTERASE-AKTIVITAET
VON
DER
VINYLACETAT-KONZENTRATION
82
32.13
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
MIT
VINYLACETAT
UND
INTER
MEDIAEREN
DER
VINYLACETATUMSETZUNG
85
3.2.13.1
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
MIT
ACETALDEHYD
85
3.2.13.2
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
MIT
ETHANOL
86
3.2.1.3.3
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
MIT
ACETAT
87
3.2.1.4
WACHSTUM
VON
BAKTERIUM
V2
MIT
ANDEREN
ESTERN
ALS
VINYLACETAT
90
3.2.2
ENTWICKLUNG
EINER
MESSMETHODE
ZUR
BESTIMMUNG
DER
AKTIVITAET
VON
VINYLACETATESTERASE
95
3.23
VINYLACETATUMSETZUNG
DURCH
RUHENDE
ZELLEN
99
3.2.4.
CHARAKTERISIERUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
103
3.2.4.1
DIE
VINYLACETATESTERASE
IN
BAKTERIUM
V2
IST
KONSTITUTIV
103
32.4.2
DIE
VINYLACETATESTERASE
IST
IN
DER
CYTOPLASMATISCHEN
FRAKTION
VON
BAKTERIUM
V2
LOKALISIERT
104
32.4.3
KINETIK
DES
VINYLACETAT-ABBAUS
105
32.4.4
TEMPERATURABHAENGIGKEIT
DER
AKTIVITAET
VON
VINYLACETAT
ESTERASE
IN
DER CYTOPLASMATISCHEN
FRAKTION
UND
DIE
BESTIMMUNG
DER
APPARENTEN
AKTIVIERUNGSENERGIE
107
32.4.5
PH-OPTIMUM
DER
VINYLACETATESTERASE
109
32.4.6
SUBSTRATSPEKTRUM
VON
VINYLACETATESTERASE
110
32.4.7
EINFLUSS
VON
INHIBITOREN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
VINYLACETATESTERASE
112
32.4.8
EINFLUSS
VON
METALLIONEN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
VINYLACETAT
ESTERASE
IN
DER CYTOPLASMATISCHEN
FRAKTION
116
32.4.9
STABILITAET
DER
VINYLACETATESTERASE-AKTIVITAETEN
IN
GANZEN
ZELLEN
UND
IN
ZELLFREIEN
EXTRAKTEN
117
32.4.9.1
STABILITAET
IN
ZELLPELLET
118
32.4.92
STABILITAET
IN
ZELLFREIEN
EXTRAKTEN
118
32.4.10
AKTIVITAET
DER
VINYLACETATESTERASE
IN
DEN
CYTOPLASMATISCHEN
FRAKTIONEN
IN
GEGENWART
DER
INTERMEDIAEREN
VINYLACETAT-UMSETZUNGSPRODUKTE
119
3.25
ORIENTIERENDE
VERSUCHE
ZUR
AUFREINIGUNG
VON
VINYLACETAT
ESTERASE
AUS
BAKTERIUM
V2
121
325.1
AUFTRETEN
VON
ZWEI
VINYLACETATESTERASEN-AKTIVITAETS
PEAKS
NACH
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
121
3252
VERSUCHE
ZUR
AUFREINIGUNG
DER
NICHT-BINDENDEN
VINYLACETATESTERASE
123
325.3
VERSUCHE
ZUR
GROESSENBESTIMMUNG
DER
BINDENDEN
VINYLACETATESTERASE
126
325.4
AUFREINIGUNG
DER
BINDENDEN
VINYLACETATESTERASE
129
4.
DISKUSSION
135
4.1
MIKROBIELLER
ABBAU
VON
ACETONITRIL
135
4.1.1
AUSWAHL
DER
EINGESETZTEN
BAKTERIEN
ZUM
ACETONITRILABBAU
135
4.1.2
REGULATION
DER
SYNTHESE
VON
YLCET-NITRIL-HYDRATASE
UND
^4CET-AMIDASE
IN
CORYNEBACTERIUM
UBT
9
136
4.1.3
ABBAU
VON
ACETONITRIL
MIT
LYOPHILISIERTEN
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UEBT
9
141
4.1.4
IMMOBILISIERUNG
DER
ZELLEN
VON
CORYNEBACTERIUM
UEBT
9
DURCH
EINSCHLUSS
IN
ORGANISCHE
POLYMERE
145
4.1.5
MODELLVERSUCHE
ZUR
PRAKTISCHEN
ANWENDUNG
VON
CORYNEBACTERIUM
UEBT
9
ZUR
ENTGIFTUNG
ACETONITRIL-HALTIGER
HPLC-ABWAESSEM
149
4.2
MIKROBIELLER
ABBAU
VON
VINYLACETAT
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
VINYLACETATESTERASE
154
4.2.1
DER
ABBAU
VON
VINYLACETAT
DURCH
VINYLACETATESTERASE
VON
BAKTERIUM
V2
154
4.2.2
SUBSTRATSPEKTRUM
DER
VINYLACETATESTERASE
157
4.2.3
SENSITIVITAET
GEGENUEBER
INHIBITOREN
UND
METALLIONEN
158
4.2.4
VERGLEICH
DER
VINYLACETATESTERASE
AUS
BAKTERIUM
V2
MIT
DER
ARYLESTERASE
AUS
PSEUDOMONAS
FLUORESCENS
157
5.
ZUSAMMENFASSUNG
162
6.
LITERATURVERZEICHNIS
166 |
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| author | Sunarko, Bambang |
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