Wirkungen des Lungen Surfactant Proteins A (SP-A) auf die Funktionen von Ratten-Alveolarmacrophagen:
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EINLEITUNG UND PROBLEMSTELLUNG
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DIE FUNKTION UND DER AUFBAU DES RESPIRATIONSSYSTEMS.
DER GASAUSTAUSCH ALS HAUPTFUNKTION DES ALVEOLARSYSTEMS
DER AUFBAU DER ZUFUEHRENDEN ATEMWEGE UND DER TERMINALEN RESP.RA-
TORISCHEN EINHEITEN.
DER IMMUNOLOGISCHE SCHUTZ DES RESPIRATIONSSYSTEMS
DIE INFEKTIONSERREGER DES RESPIRATIONSSYSTEMS.
ALLGEMEINE BAKTERIOLOGIE.
ESCHERICHIA COLI, PSEUDOMONAS AERUGINOSA UND STAPHYLOCOCCUS
AUREUS
DIE ALVEOLARMACROPHAGEN.-.
HERKUNFT, MORPHOLOGIE UND LOKALISIERUNG DER ALVEOLARMACROPHAGEN
IMMUNOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN VON ALVEOLARMACROPHAGEN
OBERFLAECHENERKENNUNG DURCH ALVEOLARMACROPHAGEN.
DAS SURFACTANT SYSTEM DER LUNGE.
STRUKTUR, SYNTHESE UND FUNKTION DES LUNGENSURFACTANTS
DIE SURFACTANT PROTEINE B UND C (SP-B, SP-C)
DAS SURFACTANT PROTEIN D (SP-D).
DAS SURFACTANT PROTEIN A (SP-A).
ZIELSETZUNGEN DER ARBEIT.
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ERGEBNISSE.
20
ISOLIENJNG VON ALVEOLARMACROPHAGEN DURCH BRONCHOALVEOLARLAVAGE .20
SP-A STIMULIERT DIE SERUMUNABHAENGIGE PHAGOCYTOSE VON BAKTERIEN
DURCH ALVEOLARMACROPHAGEN.
SP-AP
ROT.
STIMULIERT DIE PHAGOCYTOSE DURCH MACROPHAGEN IN
SP-APROT. STIMULIERT KONZENTRATIONSABHAENGIG DIE SERUMUNABHAENGIGE
PHAGOCYTOSE DURCH MACROPHAGEN.""T.
SP-A STIMULIERT DIE SERUMUNABHAENGIGE PHAGOCYTOSE DURCH ADHARENTE
MACROPHAGEN.
21
.21
23
.
24
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/943694116
VLLL
2.2.4. UNTERSCHEIDUNG ZWISCHEN AN DER OBERFLAECHE DER MACROPHAGEN GE
BUNDENEN UND PHAGOCYTIERTEN BAKTERIEN.25
2.2.5. KINETIK DER AUFNAHME VON AN DER OBERFLAECHE DER MACROPHAGEN
GEBUNDENEN BAKTERIEN.28
2.3. SP-A STIMULIERT DIE PHAGOCYTOSE VON BAKTERIEN DURCH INTERAKTION
MIT DEN ALVEOLARMACROPHAGEN.30
2.3.1. DIE INTERAKTION VON SP-A MIT DEN MACROPHAGEN IST VORAUSSETZUNG
FUER
DIE STIMULIERUNG DER PHAGOCYTOSE.30
2.3.2. SP-A WIRKT NICHT ALS OPSONIN BEI DER PHAGOCYTOSE VON ESCHERICHIA
COLI,
PSEUDOMONAS AERUGINOSA UND STAPHYLOCOCCUS AUREUS.32
2.4. SP-A STIMULIERT ALVEOLARMACROPHAGEN ZUR ERHOEHUNG VON INTRA
ZELLULAEREM CALCIUM.34
2.4.1. SP-A MOBILISIERT CALCIUM IN ALVEOLARMACROPHAGEN.34
2.4.2. SP-A ERHOEHT KONZENTRATIONSABHAENGIG DEN PROZENTSATZ DER MIT
[CA++]J-
ANSTIEG REAGIERENDEN MACROPHAGEN.42
2.5. SP-A STIMULIERT ALVEOLARMACROPHAGEN ZUR INSPSS-BILDUNG.44
2.5.1. KINETIK DER INSPSS-BILDUNG.44
2.5.2. KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DER LNSP
3
-BILDUNG.45
2.5.3. DIE VORINKUBATION DER MACROPHAGEN MIT THAPSIGARGIN UNTERDRUECKT
DEN
STIMULIERENDEN EFFEKT VON SP-A AUF DIE PHAGOCYTOSE.46
2.6. SP-A BEWIRKT KEINE VERMEHRTE EXPRESSION DES MANNOSE-REZEPTORS .49
2.6.1. QUANTIFIZIERUNG DES MANNOSE-REZEPTORS MITTELS FACS-ANALYSE 49
2.6.2. QUANTIFIZIERUNG DES MANNOSE-REZEPTORS MITTELS ELISA 51
2.7. DER SP-A-REZEPTOR DER ALVEOLARMACROPHAGEN.54
2.7.1. ANALYSE DES SP-A-REZEPTORS MITTELS ELISA.54
2.7.2. CHARAKTERISIERUNG DES SP-A-BINDUNGSMECHANISMUS.58
2.7.3. ISOLIERUNG EINES SP-A-BINDENDEN PROTEINS AUS DER ZELLMEMBRAN DER
ALVEOLARMACROPHAGEN.61
2.8. BETEILIGUNG VON C1Q ODER DEM C1Q-REZEPTOR AN DER SP-A-INDUZIERTEN
STEIGERUNG DER SERUMUNABHAENGIGEN PHAGOCYTOSE.64
2.8.1. C1 Q HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE SERUMUNABHAENGIGE PHAGOCYTOSE 64
2.9. KONTROLLVERSUCHE ZUR KOMPLEXITAET UND REINHEIT DER SP-A
PRAEPARATIONEN.66
IX
2.9.1. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON SP-A.66
2.9.2. SP-APROT IST NICHT NACHWEISBAR MIT LPS KONTAMINIERT.68
2.9.3. LPS HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE PHAGOCYTOSE VON BAKTERIEN DURCH
ALVEOLARMACROPHAGEN.69
2.9.4. SURFACTANT LIPIDE HABEN KEINEN EFFEKT AUF DIE PHAGOCYTOSE VON
BAKTERIEN DURCH ALVEOLARMACROPHAGEN.70
3. DISKUSSION.71
3.1. VALIDITAET UND EIGNUNG DER VERWENDETEN METHODIK.71
3.1.1. BRONCHOALVEOLARLAVAGE UND LICHTMIKROSKOPISCHER
PHAGOCYTOSEASSAY.71
3.1.2. [CA++]J-MESSUNGEN.71
3.1.3. ELISA .72
3.1.4. FACS-ANALYSE.72
3.1.5. ISOLIERUNG EINES SP-A-BINDENDEN PROTEINS.72
3.2. AUSSCHLUSS DER MOEGLICHKEIT VON KONTAMINATIONEN IN DEN VERWENDETEN
SP-A-CHARGEN.73
3.3. SP-A ERHOEHT DIE SERUMUNABHAENGIGE PHAGOCYTOSE VON BAKTERIEN
DURCH ALVEOLARMACROPHAGEN.74
3.3.1. DIE STIMULIERUNG DER BAKTERIENPHAGOCYTOSE DURCH
ALVEOLARMACROPHAGEN.74
3.3.2. SP-A STIMULIERT DIE SERUMUNABHAENGIGE PHAGOCYTOSE DURCH
AKTIVIERUNG DER MACROPHAGEN.75
3.4. SP-A AKTIVIERT ALVEOLARMACROPHAGEN UEBER DEN LNSP3/CALCIUM-
SIGNALWEG.77
3.4.1. SP-A INDUZIERT DIE BILDUNG VON LNSP
3
.77
3.4.2. SP-A BEWIRKT EINEN ANSTIEG VON [CA++]J.77
3.4.3. AKTIVIERUNG DES CALCIUMSIGNALWEGS, STIMULIERUNG DER PHAGOCYTOSE
UND WEITERER IMMUNOLOGISCHEN FUNKTIONEN VON MACROPHAGEN.80
3.4.4. KONSEQUENZEN DER AKTIVIERUNG DES LNSP
3
/CALCIUM-SIGNALWEGES.81
3.5. UND DER TATSAECHLICHE EFFEKTORMECHANISMUS, DER ZU VERSTAERKTER
PHAGOCYTOSE FUEHRT?.84
3.5.1. POTENTIELLE MECHANISMEN.84
3.5.2. DER SP-A-INDUZIERTE [CA++]J-ANSTIEG ERHOEHT NICHT DIE ANZAHL DES
MANNOSE-REZEPTORS.85
X
3.6. DER SP-A-REZEPTOR DER ALVEOLARMACROPHAGEN.87
3.6.1. WIEVIELE SP-A-REZEPTOREN HAT EIN ALVEOLARMACROPHAGE?.87
3.6.2. WELCHE DOMAENE DES SP-A-MOLEKUELS BINDET AN
ALVEOLARMACROPHAGEN?.88
3.6.3. * UND DER C1Q- (COLLECTIN-) REZEPTOR?.89
3.6.4. DIE ISOLIERUNG EINES SP-A-BINDENDEN PROTEINS.90
3.7. SCHLUSSFOLGERUNG UND AUSBLICK.92
3.7.1. DIE SITUATION IN DER LUNGE.92
3.7.2. METHODISCHER AUSBLICK.93
4. METHODEN UND MATERIALIEN.95
4.1. METHODEN.95
4.1.1. ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON ALVEOLARMACROPHAGEN.95
4.1.2. ANZUCHTBEDINGUNGEN DER BAKTERIEN.97
4.1.3. BESTIMMUNG UND NACHWEIS VON PROTEINEN.98
4.1.4. FLUORESCEIN-5-LSOTHIOCYANAT (FITC)-MARKIERUNG.103
4.1.5. PHAGOCYTOSEVERSUCHE.105
4.1.6. FLUORESZENZMIKROSKOPISCHER NACHWEIS VON OBERFLAECHENREZEPTOREN
AUF ALVEOLARMACROPHAGEN.107
4.1.7. NACHWEIS VON OBERFLAECHENREZEPTOREN DER ALVEOLARMACROPHAGEN MIT
"ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY" (ELISA).108
4.1.8. ISOLIERUNG DES SP-A-REZEPTORS VON ALVEOLARMACROPHAGEN.110
4.1.9. TRANSMISSIONS ELEKTRONENMIKROSKOPIE.112
4.1.10. NACHWEIS UND QUANTIFIZIERUNG DES MANNOSE-REZEPTORS MIT DEM
"FLUORESCENCE ASSOCIATED CELL SORTER" (FACS).115
4.1.11. [CA++]J-BESTIMMUNG.117
4.1.12. LNSP
3
-BESTIMMUNG.119
4.1.13. INDIREKTER NACHWEIS VON LPS-KONTAMINATION.121
4.1.14. ANMERKUNG ZUR STATISTISCHEN AUSWERTUNG.121
4.2. MATERIALIEN.122
4.2.1. VERSUCHSTIERE.122
4.2.2. BAKTERIEN .122
4.2.3. ZUSAMMENSETZUNG DER HAEUFIG VERWENDETEN PUFFER.122
4.2.4. SUBSTANZEN UND CHEMIKALIEN.123
4.2.5. SONSTIGE MATERIALIEN.125
XI
4.2.6.
5.
6
.
7.
GERAETE .
ZUSAMMENFASSUNG.
LITERATURVERZEICHNIS
ANHANG.
.125
126
.128
.146 |
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