Ein- und zweidimensionale Elektrophorese von Gersten- und Weizenproteinen zur Sortendifferenzierung, Bestimmung der Brauqualität von Gersten und Identifizierung von Weizenmehlallergenen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 228 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
I
2
HEUTIGER
WISSENSSTAND
(LITERATURUEBERSICHT)
4
2.1
HOCHAUFLOESENDE
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNTECHNIKEN
4
2.1.1
GRUNDLAGEN
2.1.2
UEBERSICHT
UEBER
DIE
ELEKTROPHORETISCHEN TRENNTECHNIKEN
2.1.2.1
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE)
2.1.2.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORCSE
(SDS-PAGE)
2.1.2.3
ISOELEKTNSCHE
FOKUSSIERUNG
(IEF)
2.1.2.4
HOCHAUFLOESENDE
ZWEIDIMENSIONALE
ELEKTROPHORESE
2.1.3
PROTEINNACHWEISVERFAHREN
2.1.3.1
UNSPCZIFISCHE
PROTEINDETEKTIONSVERFAHREN
2.1.3.2
SPEZIFISCHE
PROTEINDETEKTIONSVERFAHREN
2.1.3.3
BLOTTING-TECHNIKEN
2.1.4
AUSWERTUNG
DER
ELEKTROPHORESEGELE
(DENSITOMETRIE)
2.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
KORNPROTEINE
VON
GERSTE
UND
WEIZEN
13
2.2.1
ALLGEMEINES
2.2.2
KLASSIFIZIERUNG
DER
KOMPROTEINE
NACH
OSBORNE
AM
BEISPIEL
DES
WEIZENS
2.2.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
KOMPROTEINE
VON
WEIZEN
UND
GERSTE
2.2.3.1
DIE
RCSERVCPROTEINE
DES
WEIZENS
2.2
3.1.1
LAGE
DER
STRUKTURGENC
AUF
DEN
WEIZENCHROMOSOMEN
2.2
3.1.2
RELATIVE
MOLMASSEN
DER
RESERVEPROTEINE
DES
WEIZENS
2.2.3.1.3
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG
DER
RESERVEPROTEINC
DES
WEIZENS
2.2.3.1
4
AUFBAU
DER
RESERVEPROTCINE
DES
WEIZENS
2.2
3.1.5
IMMUNCHEMIE
DER
RCSERVCPROTEINE
DES
WEIZENS
2.2.3.2
DIE
RESERVEPROTEINE
DER
GERSTE
2.2.3
2.1
LAGE
DER
STRUKTURGENE
AUF
DEN
GCRSTENCHROMOSOMCN
2.2.3.2
2
RELATIVE
MOLMASSCN
DER
HORDCINC
2
2
3.2
3
POLYMORPHISMUS
DER
HORDCINC
2.2
3.2.4
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG
DER
HORDEINE
2.2.3.2
5
AMINOSAEURESEQUENZEN
UND
STRUKTURELLE
VERWANDTSCHAFT
EINZELNER
HORDEINGRUPPCN
2.2.3
2
6
STRUKTURHOMOLOGIEN
ZWISCHEN
EINZELNEN
HORDEINCN
SOWIE
DEN
PROLAMINEN
VERWANDTER
SPECICS
2.2.3.3
SALZLOESLICHE
WEIZEN
UND
GERSTENPROTEINE
2.2.3
3
1
ENZYME
2.2.3
3
2
ENZYMINHIBITOREN
2.2.3.3
3
NIEDERMOLEKULARE
PROTEINE
(CM-LOESHCHE
PROTEINE
UND
LMW-PROLAMINE)
2
2.3
3
4
PHYTOHAEMAGGLUTIMNE
2.3
PROTEINPOLYMORPHISMUS
UND
MOLEKULARE
MARKER
40
2.3.1
GRUNDLAGEN
2
3.2
VORTEILE
UND
EINSATZMOEGHCHKEITEN
MOLEKULARER
MARKER
2.4
SORTENDIFLERENZIERUNG
BEI
GERSTE
44
2.5
BIOCHEMISCHE
MARKER
FUER
BRAUQUALITAET
BEI
GERSTE
48
2.6 ALLERGIEAUSLOESENDE
PROTEINE
IN
WEIZENMEHL
SO
2.6.1
GRUNDLAGEN
2.6.2
ALLERGIEDIAGNOSTIK
UND
ALLERGENCHARAKTERISIERUNG
2.6.3
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
ALLERGIEAUSLOESENDER
PROTEINE
IN
WEIZENMEHL
3
MATERIAL
UND
METHODEN
54
3.1
UNTERSUCHUNGSMATERIAL,
GERAETE
UND
CHEMIKALIEN
54
3.1
1
VERWENDETE
GERSTEN
UND
WEIZENSORTEN
3.1.2
SEREN
3.1.3
GERAETE,
VERBRAUCHSMATERIALIEN
UND
CHEMIKALIEN
3.2
PROTEINEXTRAKTION
UND
PROBENAUFBEREITUNG
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
55
3.2.1
KEIMUNG
UND
MAELZUNG
VON
GERSTENKOERNERN
3.2.2
PROTEINFRAKTIONIERUNG
NACH
OSBORNE
(MODIFIZIERT)
3.2.2.1
SEQUENTIELLE
PROTEINEXTRAKTION
AUS
GERSTEN(MALZ)MEHL
3.2.2.2
SEQUENTIELLE
PROTEINEXTRAKTION
AUS
WEIZENMEHL
3.2.2.3
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DIE
SDS
UND
2D-ELEKTROPHORESE
3
2.3
PROTEINEXTRAKTION
UND
PROBENAUFBEREITUNG
FUER
SPEZIELLE
UNTERSUCHUNGSVERFAHREN
3.2.3.1
EXTRAKTION
ALKOHOLLOESLICHER
GERSTENPROTEINE
FUER
DIE
1EF
UND
SDS-PAGE
3.2.3.2
EXTRAKTION
HARNSTOFILOESLICHER
GERSTENPROTEINE
FUER
DIE
IEF
3.2.3.3
VEREINFACHTE
EXTRAKTION
DER
D-HORDCINE
AUS
GERSTEN(MALZ)MEHL
FUER
DIE
SDS-PAGE
3.2.3.4
EXTRAKTION
SALZLOESHCHER
GERSTENPROTEINE
FUER
DEN
GLYCOPROTEINNACHWEIS
NACH
SDS-PAGE
UND
BLOTTING
3
2
3.5
EXTRAKTION
VON
AMYLASEN
AUS
ANGEKEIMTER
GERSTE
UND/ODER
GERSTENMALZ
3.2.3.OE
GESAMTPROTEINEXTRAKTE
VON
GERSTE
UND
WEIZEN
FUER
DIE
2D-ELEKTROPHORESE
3.3
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNTECHNIKEN
66
3.3.1
GELHERSTELLUNG
3.3
1.1
AUFBAU
DER
GIESSKASSETTE
3.3.1.2
LEF-GELE
MIT
IMMOBILISIERTEN
PH-GRADIENTEN
(IPG)
FUER
DIE
EINDIMENSIONALE
IEF
SOWIE
DIE
ERSTE
DIMENSION
DER
2D-ELEKTROPHORESE
3
3.1.3
POLYACRYLAMID-TROCKENGELE
FUER
DIE
IEF
MIT
TRAEGERAMPHOLYTEN
SOWIE
ALS
SUBSTRATGELE
FUER
DEN
AMYLASE-NACHWEIS
3.3
1.4
SDS-PORENGRADIENTENGELE
FUER
DIE
EINDIMENSIONALE
SDS-PAGE
UND
DIE
ZWEITE
DIMEN
SION
DER
2D-ELEKTROPHORESE
3.3.2
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORETISCHEN
TRENNUNGEN
3.3.2.1
EINDIMENSIONALE
IEF
VON
HORDEINEN
UND
AMYLASEN
3.3.2
2
EINDIMENSIONALE
HORIZONTALE
SDS-PAGE
VON
GERSTEN
UND
WEIZENPROTEINEN
3
3.2.3
HOCHAUFLOESENDE
HORIZONTALE
ZWEIDIMENSIONALE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
MIT
IMMOBILISIERTEN
PH-GRADIENTEN
IN
DER
ERSTEN
DTMENSION
(IPG-DALT)
3.3.2
3.1
IPG-DALT
MIT
SELBSTGEGOSSENEN
GELEN
3
3.2.3.2
IPG-DALT
MIT
FERTIGGELEN
3.3.2.3.3
MULTIPLER
IPG-DALT
3.4
PROTEINDETEKTIONSVERFAHREN
IN
ELEKTROPHORESEGELEN
89
3
4.1
KOLLOIDALE
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
IPG-GELEN NACH
NEUHOFJ
ET
AL
3
4.2
SILBERFAERBETECHNIKEN
3
4.2.1
SILBERFAERBEMETHODE
NACH
MERNL
ET
AL
(MODIFIZIERT)
3
4.2
2
SILBERFAERBEMETHODE
NACH
BLUM
ET
AL.
(MODIFIZIERT)
3.4.2
3
SILBERFAERBEMETHODE
NACH
HEUKESHOVEN
UND
DERNICK
(MODIFIZIERT)
3.4.2.4
SILBERFAERBEMETHODE
NACH
OAKELY
ET
AL.
(MODIFIZIERT)
3.4.3
NACHWEIS
VON
AMYLASEN
NACH
IEF
3.5
PROTEINDETEKTIONSVERFAHREN
NACH
BLOTTING
95
3.5.1
ELEKTROPHORETISCHER
TRANSFER
DER
AUFGETRENNTEN
PROTEINE
AUF
EINE
IMMOBILISIERENDE
MATRIX
3.5.2
UNSPEZIFISCHE
PROTEINNACHWEISMETHODEN
NACH BLOTTING
3
5.2.1
PROTEINNACHWEIS
MIT
AMIDO
SCHWARZ
10B
3.5.2.2
PROTEINNACHWEIS
MIT
INDIA-INK
3.5.3
NACHWEISREAKTIONEN
FUER
GLYCOPROTEINE
NACH
BLOTTING
3.5.3
1
GLYCOPROTEINNACHWEIS
MIT
PEIJODAT
UND
DANSYLHYDRAZIN
3.5.3.2
DETEKTION
VON
GLYCOPROTEINEN
MIT
CONCANAVALIN
A/PEROXIDASE
(CON
A/HRP)
3.5.4
IMMUNCHEMISCHER
ANTIGEN
UND
ALLERGENNACHWEIS
NACH
BLOTTING
3.5.4.1
NACHWEIS
VON
GLIADIN-EPITOPEN
DURCH
PEROXIDASEKONJUGIERTE
ANTI-GLIADIN
ANTIKOERPER
AUS
KANINCHEN
3.S.4.2
NACHWEIS
VON
ALLERGENEN
IN
WEIZENMEHL
3.6
N-TERMINALE
AMINOSAEURESEQUENZANALYSE
DER
AUF
EINE
PVDF-MEMBRAN
106
GEBLOTTETEN
POLYPEPTIDE
3.7
DENSITOMETRIE
107
3.8
RADIOALLERGOSORBENT-TEST (RAST)
ZUR
BESTIMMUNG
ALLERGENSPEZIFISCHER
107
IGE-ANTIKOERPER
IM
SERUM
ERKRANKTER
PERSONEN
4.
ERGEBNISSE
MIT
DISKUSSION
TOS
4.1
ERSTELLUNG
VON
GETREIDEPROTEINDATENBANKEN
108
4.1.1
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIT
IPG-DALT
AUFGETRENNTEN
WEIZENPROTEINE
4.1.1.1
FRAKTIONIERTE
EXTRAKTION
DER
KOMPROTEINE
DES
WEIZENS
4.1.1.2
REINHEITSKONTROLLE
DER
PROTEINFRAKTIONEN
DURCH
SDS-PAGE
4.1.1.3
IPG-DALT
UND
SILBERFAERBUNG
DER
ALBUMIN/GLOBULIN-,
GLIADIN
UND
GLUTENINFFAKTIONEN
4.1.1.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIT
IPG-DALT
AUFGETRENNTEN
POLYPEPTIDE
DURCH
SPEZIFISCHE
NACHWEISREAKTIONEN
NACH
BLOTTING
4.1.1.4.1
NACHWEIS
VON
GLUCOSE
UND/ODER
MANNOSE
ENTHALTENDEN
GLYCOPROTEINEN
4.1.1.4.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
GLIADINE
MIT
GEGEN
GLIADIN(EPITOP)E
GERICHTETEN
ANTIKOERPERN
4.1.1.4.3
IDENTIFIZIERUNG
EINZELNER
POLYPEPTIDSPOTS
DURCH
N-TERMINALE
AMINOSAEURESEQUENZ
ANALYSE
4.1.1.5
VORZUEGE
DER
IPG-DALT-TECHNIK
IM
VERGLEICH
ZU
"KLASSISCHEN"
2D-ELEKTROPHORESETECHNIKEN
4.1.2
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIT
IPG-DALT
AUFGETRENNTEN
GERSTENPROTEINE
4.1.2.1
REINHEITSKONTROLLE
DER
GERSTENPROTEINFRAKTIONEN
DURCH
SDS-PAGE
4.1.2.2
IPG-DALT
DER
ALBUMINE/GLOBULINE,
HORDEINE
UND
GLYCOPROTEINE
4.1.3
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
4.2
SORTENDIFFERENZIERUNG BEI
GERSTE
124
4.2.1
IEF-IPG
UND
SDS-PAGE
DER
RESERVEPROTEINE
4.2.1.1
OPTIMIERUNG
DER
IEF-IPG
METHODIK
4.2.1.1
1
LOESUNGSMITTEL
FUER
DIE
HORDEINEXTRAKTION
4.2.1.1.2
EXTRAKTIONSDAUER
UND
-TEMPERATUR
4.2
1.1.3
OPTIMALER
PH-GRADIENT
4
2.1.1.4
VERWENDUNG
VON
HAMSTOFF/DTT-EXTRAKTEN
4.2.1.2
SORTENDIFFERENZIERUNG
DURCH
IEF-IPG
DER
HORDEINE
4.2.1.3
SORTENDIFFERENZIERUNG
DURCH
SDS-PAGE
DER
HORDEINE
4.2.1.4
FAZIT
4.2.2
IEF-IPG
VON
AMYLASEN
4.2.2.1
SORTENDIFFERENZIERUNG
DURCH
IEF-IPG
DER
AMYLASEN
4.2.2.2
FAZIT
4.2.3
SDS-PAGE
UND
GLYCOPROTEINFARBUNG
DER
SALZLOESLICHEN
PROTEINE
4.2.3.1
OPTIMIERUNG
DER
CON
A/HRP
FAERBEMETHODIK
4.2.3.1.1
OPTIMIERUNG
DES
BLOCKIERSCHRITTS
4.2.3.1.2
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
CHROMOGENE
4.2.3.1.3
WICHTIGE
PARAMETER
DER
INKUBATIONS
UND
WASCHSCHRITTE
4.2.3.2
SORTENDIFFERENZIERUNG
MIT
HILFE
DER
PERJODAT/DANSYLHYDRAZIN-METHODE
4.2.3.3
SORTENDIFFERENZIERUNG
MITTELS
DER
CON
A/HRP-METHODE
4.2.3.4
KONTROLLEXPERIMENTE
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
SPEZIFITAET
DER
CONA/HRP-NACHWEISREAKTION
4.2.3
5
AUSWIRKUNG
VON
UMWELTEINFLUESSEN
AUF
DIE
AUSPRAEGUNG
DER
GLYCOPROTEINMUSTER
4.2.3
6
VERGLEICH
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
METHODEN
ZUR
SORTENDIFFERENZIERUNG
4.2.3.7
FAZIT
4.2.4
IPG-DALT
DER
GESAMTPROTEINE
4.2.4.1
SORTENDIFIERENZIERUNG
DER
MIT
HAMSTOFITDTT/NP-40
EXTRAHIERBAREN
GERSTENKOMPROTEINE
MITTELS
IPG-DALT
4.2.4.2
REPRODUZIERBARKEIT
DER
2D-POLYPEPTIDMUSTER
IN
ABHAENGIGKEIT
OEKOLOGISCHER
FAKTOREN
(STANDORT,
JAHRGANG)
4.2.4.3
IPG-DALT
UND
ROUTINEANALYTIK
4.2.4.3.1
VERWENDUNG
VERKUERZTER
TRENNDISTANZEN
4.2.4.3.2
VERWENDUNG
INDUSTRIELL
HERGESTELLTER
GELE
4.2.4.4
FAZIT
4.3
NACHWEIS
BIOCHEMISCHER
MARKER
FUER
BRAUQUALITAET
BEI
GERSTE
1S2
4.3.1
SDS-PAGE
UNTERSCHIEDLICHER
LOESLICHKEITSFRAKTIONEN
4.3.1.1
VERAENDERUNGEN
IN
DEN
PROTEINMUSTEM
DER
EINZELNEN
LOESLICHKEITSFRAKTIONEN
WAEHREND
DER
MALZBEREITUNG
4.3.1
1.1
TRIS-HCL
EXTRAHIERBARE
LOESLICHKEITSFRAKTION
(SALZLOESLICHE
PROTEINE)
4.3.1.1.2
ALKOHOLLOESLICHE
PROTEINFRAKTION
(HORDEIN
I)
4.3.1.1.3
ALKOHOL/DTT-LOESLICHE
PROTEINFRAKTION
(HORDEIN
II)
4.3.1.1.4
HAMSTOFITDTT/NP-40
LOESLICHE
PROTEINFRAKTION
4.3.1.2
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DER
ABBAUGESCHWINDIGKEIT
DER
D-HORDEINE
UND
DEM
ENDVERGAERUNGSGRAD
4.3.1.3
FAZIT
4.3.2
IEF
DER
AMYLASEN
4.3.2.1
IEF
DER
AUS
GRUENMALZ
EXTRAHIERTEN
AMYLASEN
4.3.2.2
IEF
DER
AUS
KEIMENDEN
GERSTENKOERNERN
EXTRAHIERTEN
AMYLASEN
4.3.23
ROUTINEANALYTIK
4.3.2.4
NATUR
DER
AMYLASEBANDEN
"A
"
UND
"B"
4
3.2.5
FAZIT
4.3.3
IPG-DALT
DER
MIT
HAMSTOFFTDTT/NP-40
EXTRAHIERBAREN
PROTEINFRAKTION
4.3.3.1
IPG-DALT
DER
PROTEINE
DES
UNGEMAELZTEN
GERSTENKORNS
4
3.3.2
IPG-DALT
DER
WAEHREND
DES
MAELZUNGSPROZESSES
AUS
DEM
GERSTENKORN
EXTRAHIERTEN
PROTEINE
4.33.3
FAZIT
4
3.4
SCHLUSSFOLGERUNGEN
UND
AUSBLICK
4.4
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
ALLERGIEAUSLOESENDER
PROTEINE
178
UNTERSCHIEDLICHER
WEIZENSORTEN
4.4.1
SDS-PAGE
UND
IMMUNOBLOTTING
DER
ALBUMIN/GLOBULIN-,
GLIADIN
UND
GLUTENINFRAKTION
VON
SIEBEN
WEIZENSORTEN
MODELLUNTERSUCHUNGEN
MIT
ANTI-GLIADIN
SERUM
AUS
KANINCHEN
4.4.2
NACHWEIS
IGE-BINDENDER
PROTEINE
AUS
UNTERSCHIEDLICHEN
WEIZENSORTEN
DURCH
SDS-PAGE,
IPG-DALT
UND
IMMUNOBLOTTING
MIT
PATIENTENSERUM
4.4
2.1
IGE-BINDENDE
PROTEINE
DER
ALBUMIN/GLOBULIN-FRAKTION
4.4.2.2
IGE-BINDENDE
PROTEINE
DER
GLIADIN-
UND
GLUTENINFRAKTIONEN
4.4
3
KONTROLLEXPERIMENTE
4.4.4
FAZIT
4.4.5
ABSCHLIESSENDE
BEMERKUNGEN
5
ZUSAMMENFASSUNG
190
6
LITERATURVERZEICHNIS
194
7
ANHANG
7.1
CHEMIKALIEN
UND
SONSTIGE
VERBRAUCHSMATERIALIEN
7.2
FERTIGGELE
UND
TEST-KITS
7.3
APPARATE
7.4
COMPUTER
UND
SOFTWARE
225 |
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