Untersuchung des Katabolismus alpha-methylverzweigter Carbonsäuren:
Gespeichert in:
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| Sprache: | German |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
SEITE
1
2.
METHODEN
UND
MATERIALIEN
7
2,1,
SYNTHESEN
7
2.1.1.
VORBEMERKUNGEN
7
2.1.2.
WITTIG-REAKTIONEN
ZUR
DARSTELLUNG
A,FI-UNGE
SAETTIGTER,
GERADKETTIGER
FETTSAEUREMETHYLESTER
8
2.1.3.
TRITIIERUNG
VON
2-HEXADECENSAEUREMETHYLESTER
UND
2-HEXACOSENSAEUREMETHYLESTER
8
2.1.4.
HYDROLYSE
VON
CARBONSAEUREESTERN
9
2.1.5.
OZONOLYSE
VON
PHYTOL
9
2.1.6.
DARSTELLUNG
VON
2,6,10,14-TETRAMETHYL-L
PENTADECEN
9
2.1.7.
HYDROBORIERUNG
VON
2,6,10,
14-TETRAMETHYL-L
PENTADECEN
10
2.1.8.
OXIDATION
VON
GESAETTIGTEN
ALKOHOLEN
ZU
CAR
BONSAEUREN
10
2.1.9.
DARSTELLUNG
VON
4,8,
12-TRIMETHYLTRIDECANOYL
NITRIL
11
2.1.10.
REDUKTION
VON
4,8,12
-TRIMETHYLTRIDECANOYLNI
-
TRIL
11
2.1.11.
SCHUTZ
VON
OH-GRUPPEN
ALS
TETRAHYDROPYRAN
OXY-ETHER
11
2.1.12.
REDUKTION
VON
5SS-(3A,7A,12A-TRISTETRAHYDRO
-2-PYRANOXY)-24-CHOLANSAEURE
12
2.1.13.
OXIDATION
VON
58
(3A,7A,12A-TRISTETRAHYDRO
-2-PYRANOXY)-24-CHOLANOL
12
2.1.14.
WITTIG-REAKTIONEN
ZUR
DARSTELLUNG
A-METHYL
VERZWEIGTER
CARBONSAEUREETHYLESTER
12
2.1.15.
ENTFERNUNG
DER
SCHUTZGRUPPEN
VON
5SS
(3A,7A,12A-TRISTETRAHYDRO-2-PYRANOXY)
-24
CHOLESTEN-2
6
-SAEUREETHYLESTER
13
2.1.16.
TRITIIERUNG
VON
5SS-(3A,7A,12A-TRIHYDROXY)
-
24
-CHOLESTEN-26-SAEUREETHYLESTER
13
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
2.1.17.
HYDROLYSE
VON
[24,
25
3
H]
5B-(3A,7A,
12A-TRIHY
DROXY)-26-CHOLESTANSAEUREETHYLESTER
14
2.1.18.
DARSTELLUNG
VON
ACYL-COA-THIOESTERN
14
2.1.19.
HYDRIERUNG
VON
DOPPELBINDUNGEN
14
2.1.20.
DARSTELLUNG
VON
(R)
-
UND
(S)
-2
-METHYLMY
RISTOL
15
2.1.21.
DARSTELLUNG
VON
ACYL-1'
-
(R)-ETHYLPHENYL
AMIDEN
15
2.1.22.
DARSTELLUNG
VON
CHAPS
15
2.1.23.
DARSTELLUNG
VON
FERRICENIUMHEXAFLUOROPHOSPHAT
16
2.1.24.
DARSTELLUNG
VON
PYRIDINCHLOROCHROMAT
16
2.2.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNGEN
17
2.2.1.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
MITTELS
SACCHA
ROSE-GRADIENTEN
17
2.2.2.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
MITTELS
GEGEN
LAEUFIGEM
NYCODENZ-SACCHAROSE-GRADIENTEN
17
2,3.
RNZVMAT
ISCHE
MESSUNGEN
18
2.3.1.
VORBEMERKUNGEN
18
2.3.2.
BILDUNG
VON
[
3
H]H
2
O
AUS
CARBONSAEURE-DERIVATEN
18
2.3.3.
PALMITOYL-COA-OXIDASE
18
2.3.4.
ACYL-COA-SYNTHETASEN
18
2.3.5.
RACEMISIERUNG
VON
A-METHYLCARBONSAEURE-DERIVA
TEN
19
2.3.6.
BESTIMMUNG
DER
REAKTIONSPRODUKTE
DER
ACYL
COA-OXIDASE/DEHYDROGENASE
19
2.3.7.
DIACYLGLYCEROL-PHOSPHORYLCHOLIN-ACYLTRANS
FERASE
20
2.3.8.
SUCCINAT-DEHYDROGENASE
20
2.3.9.
GLUTAMAT-DEHYDROGENASE
20
2.3.10.
FUMARASE
21
2.3.11.
KATALASE
21
2.3.12.
DIHYDROXYACETONPHOSPHAT-ACYL-TRANSFERASE
21
2.3.13.
GLYOXYLAT-LEUCIN-TRANSAMINASE
22
2.3.14.
B-HEXOSAMINIDASEN
22
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
2.3.15.
GLUKOSE
6
PHOSPHATASE
22
2.3.16.
DDPASE
22
2.3.17.
5'
-NUCLEOTIDASE
22
2.3.18.
PHOSPHATBESTIMMUNG
23
2.3.19.
PROTEINBESTIMMUNG
23
2.4.
RNZVM-REINIGUNG
24
2.4.1.
VORBEMERKUNGEN
24
2.4.2.
REINIGUNG
DER A-METHYLACYL-COA-RACEMASE
AUS
RATTENLEBER
25
2.4.3.
REINIGUNG
DER
A-METHYLACYL-COA-RACEMASE
AUS
HUMANLEBER
26
2.4.4.
TRENNUNG
VON
A-METHYLACYL-COA-RACEMASE UND
-DEHYDROGENASE
27
2.5,
ANTIKOERPER
28
2.5.1.
HERSTELLUNG
VON
KANINCHEN-ANTI-RATTENLEBER
RACEMASE-ANTIKOERPEM
28
2.5.2.
WESTERN-BLOT
28
2.5.3.
IMMUNPRAEZIPITATION
VON
A-METHYLACYL-COA
RACEMASE
29
2.6,
DIAGNOSEN
30
2.7.
MATE
R
IALIEN
31
2.7.1.
GERAETE
31
2.7.2.
CHEMIKALIEN
32
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
3_
L
.
ERGEBNISSE
33
3.1.
VORARBEITEN
33
3.1.1.
SYNTHESEN
33
3.1.1.1.
SYNTHESE
VON
[A,
SS
3
H]-MARKIERTEN
CARBONSAEUREN
33
3.1.1.2.
SYNTHESE
VON
[2
3
H]
PRISTANSAEURE
34
3.1.1.3.
SYNTHESE
VON
[24,25
-
3
H]
THCA
36
3.1.1.4.
SYNTHESE
VON
ACYL-COA-THIOESTEM
38
3.1.1.5.
SYNTHESE
VON
2
-METHYLMYRISTINSAEURE
39
3.1.1.6.
SYNTHESE
VON
2-PRISTENSAEUREMETHYLESTER
40
3.1.2.
DIAGNOSEN
43
3.1.3.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNGEN
45
3.1.3.1.
LEITENZYME
45
3.1.3.2.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
VON
RATTENLEBER
49
3.1.3.3.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
MENSCHLICHER
GEWEBE
50
J
F
F
G-METHVLACVL-COA-SVNTHETASEN
51
3.2.1.
MESSMETHODEN
51
3.2.2.
SUBZELLULAERE LOKALISATION DER
ACYL-COA-SYN
TBETASEN
55
3
1
3
1
-METHYLACVL-COA
-RAR-MNAAEN
59
3.3.1.
NACHWEIS
DER
A-METHYLACYL-COA-RACEMASE-AKTI
VITAET
59
3.3.1.1.
RACEMISIERUNG VON A-METHYLACYL-COA-ESTERN
59
3.3.1.2.
RADIOMETRISCHE
MESSUNG
DER
A-METHYLACYL-COA
RACEMASE
60
3.3.2.
REINIGUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG DER
RACEMA
SEN
62
3.3.2.1.
REINIGUNG
DER
RACEMASE
AUS
RATTENLEBER
62
3.3.2.2
.
CHARAKTERISIERUNG
70
3.3.2.2.1.
BESTIMMUNG
ALLGEMEINER
PARAMETER
70
3.3.2.2.2
.
MOLEKUELARGEWI
CHT
SBE
S
T
IMMUNG
71
3.3.2.2.3
.
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
71
3.3.2.2.4.
ENZYMKINETIKEN
72
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
3.3.2.2.5.
INHIBITIONS-STUDIEN
74
3.3.2.2.5.1.
IDENTITAET
VON
PRISTANOYL
UND
THCA-COA-RACE
MASE
74
3.3.2.2.5.2.
SUBSTRAT-SPEZIFITAET
75
3.3.2.2.6.
PROTEINCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
79
3.3.2.2.7.
AMINOSAEURE-SEQUENZEN
81
3.3.3.
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DER
RACEMASEN
82
3.3.4.
IMMUNCHEMIACHE
UNTERSUCHUNGEN
85
3.3.4.1.
HERSTELLUNG
DES
ANTISERUMS
85
3.3.4.2.
PRAEZIPITATION
DER A-METHYLACYL-COA-RACEMASE
IN
EXTRAKTEN
MENSCHLICHER
LEBER UND
IN
RAT
TENLEBEREXTRAKTEN
86
3.3.5.
REINIGUNG
DER
RACEMASE
AUS
BUMANGEWEBE
90
3.3.5.1.
FAELLUNGSMETHODEN
90
3.3.5.2.
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
91
3.3.6.
CHARAKTERISIERUNG
DER
RACEMASE
AUS
HUMAN
1
EHER
97
3.3.7.
GEWEBE-SPEZIFITAET
DER
RACEMASE
100
3.4.
-METHVLACVL-COA-OXIDASEN
/
-DEHYDROGENASEN
103
3.4.1.
MESSMETHODEN
104
3.4.2.
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DER
A-METHYLACYL
COA-OXIDASE/-DEHYDROGENASE
106
3.4.3.
STEREOSPEZIFITAET
DER
A-METHYLACYL-COA-OXIDASE
UND
-DEHYDROGENASE
107
3.4.4.
TRENNUNG
VON
A-METHYLACYL-COA-RACEMASE
UND
-DEHYDROGENASE
AUS
RATTENLEBER
110
3.4.5.
UNTERSUCHUNG
DER
STEREOSPEZIFITAET
DER
A-ME
THYLACYL-COA-SYNTHETASEN
113
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
4_S.
DISKUSSION
117
5.
LITERATURVERZEICHNIS
137
6.
ANHANG
149
L.
ZUSAMMENFASSUNG
153
LEBENSLAUF
157 |
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