Lokalisation, Transport und Akkumulation von Rosmarinsäure in Zellkulturen von Coleus blumei:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
5
1.1
ROSMARINSAEURE
-
VORKOMMEN,
BEDEUTUNG
UND
BIOSYNTHESE
.
5
1.2
COLEUS
BLUMEI
.
8
1.3
DIE
VAKUOLE
-
FUNKTION,
INHALTSSTOFFE
UND
ISOLIERUNGSMETHODEN
.
10
14
TRANSPORT
UND
AKKUMULATION
.
12
1.5
PROBLEMSTELLUNG
.
14
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
2.1
VERSUCHSOBJEKTE
UND
KULTURBEDINGUNGEN
.
16
2.1.1
COLEUS
BLUMEI
BENTH
.
16
2
12
BLECHNUM
BRASILIENSE
.
18
2.2
CHARAKTERISIERUNG
EINER
SUSPENSIONSKULTUR
VON
C.
BLUMEI
.
19
2.2.1
WACHSTUMSPARAMETER
.
19
22
11
BESTIMMUNG
DES
FRISCHGEWICHTES
.
19
2.2
1
2
BESTIMMUNG
DES
TROCKENGEWICHTES
.
20
2.2.1.3
PH-WERT
.
20
2.2.1.4
LEITFAEHIGKEIT
.
20
2.2.1
5
ZUCKERGEHALT
.
20
2
2
1.6
OSMOLALITAET
.
20
2.2.2
ROSMARINSAEUREEXTRAKTION
.
20
2
2.3
GLYCOSIDBESTIMMUNG
.
21
2.2.4
PRAEPARATION
EINES
ENZYMROHEXTRAKTES
.
21
2.2.5
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
.
22
2
2
5.1
PHENYLALANIN
AMMONIUM-LYASE
(PAL)
.
22
2.2
5.2
ROSMARINSAEURE
SYNTHASE
(RAS)
.
22
2.2.6
PROTEINBESTIMMUNG
.
22
2.3
ANALYTIK
DER
ROSMARINSAEURE
.
23
2.3.1
BESTIMMUNG
MIT
HPLC
.
23
2.3.2
ANALYSE
MIT
DIODEN-ARRAY-HPLC
.
23
2
3
3
ANALYSE
DURCH
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
.
23
2
4
PROTOPLASTENISOLIERUNG
.
24
2.4.1
OPTIMIERUNG
DER
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
SUSPENSIONEN
VON
C.
BLUMEI
.
24
2.4.2
STANDARDMETHODE
.
24
2.4.3
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
IN
V/FRO-PFLANZEN
VON
C.
BLUMEI
.
25
2
4
4
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
IN
V/FRO-PROTHALLIEN
VON
BLECHNUM
BRASILIENSE
.26
2
2.4.5
BESTIMMUNG
VON
ZAHL
UND
VITALITAET
DER
PROTOPLASTEN
.
26
2.4.6
NACHWEIS
VON
ZELLWANDRESTEN
.
26
2.5
VAKUOLENISOLIERUNG
.
27
2.5.1
VAKUOLENISOLIERUNG
NACH
AMALOU
(1990)
.
27
2.5.2
VAKUOLENISOLIERUNG
NACH
BUSER-SUTER
ET
AL.
(1982)
.
27
2.5
3
VAKUOLENISOLIERUNG
MIT
DEAE-DEXTRAN
UND
DEXTRANSULFAT
.
27
2.5.4
KOMBINIERTE
METHODE
AUS
"CHEMISCHER"
ISOLIERUNG
UND
ZENTRIFUGATION
.
28
2.5.5
VAKUOLENISOLIERUNG
DURCH
OSMOTISCHEN
SCHOCK
NACH
KREIS
UND
REINHARD
(1985)
.
28
2.5.6
STANDARDMETHODE
ZUR
VAKUOLENISOLIERUNG
.
28
2.6
GROESSENBESTIMMUNG
DER
VAKUOLEN
.
29
2.7
MARKERENZYME
.
29
2.7.1
GLUCOSE-6-PHOSPHAT
DEHYDROGENASE
.
29
2.7.2
HYDROLYTISCHE
ENZYME
.
30
2.8
ROSMARINSAEUREGEHALTE
VON
ZELLEN,
PROTOPLASTEN
UND
VAKUOLEN
VON
COLEUS
OE/UME/-SUSPENSIONSKULTUREN
.
30
2.9
AUFNAHMESTUDIEN
.
31
2.9.1
VERTEILUNGSEXPERIMENT
MIT
ROSMARINSAEURE
.
31
2.9.2
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
ZELLEN
VON
C.
BLUMEI.
.
31
2.9.3
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
PROTOPLASTEN
.
32
2.9.4
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
ISOLIERTEN
VAKUOLEN
.
32
2.9.5
STABILITAET
DER
ROSMARINSAEURE
IN
VERSCHIEDENEN
MEDIEN
.
33
2.9.6
ABTRENNEN
DES
TONOPIASTEN
VOM
ZELLSAFT
.
33
2.9.7
STANDARDAUFNAHMESTUDIEN
MIT
ISOLIERTEN
VAKUOLEN
.
34
2.10
SILIKONOELMETHODE
.
34
2.10.1
SEDIMENTATION
.
34
2.10.2
FLOTATION
.
34
2.11
BESTIMMUNG
DES
PH-WERTES
IN
VAKUOLEN
.
35
2.11.1
BESTIMMUNG
DES
PH-WERTES
DES
ZELLPRESSSAFTES
.
35
2.11.2
PH-BESTIMMUNG
MIT
NEUTRALROT
.
35
2.11.3
PH-BESTIMMUNG
MIT
31
P-NMR
.
36
2.11.4
PH-BESTIMMUNG
MIT
MIKROELEKTRODEN
.
36
2.12
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
AUFNAHMEN
VON
SUSPENSIONSZELLEN
VON
C.
BLUMEI
.
37
2.13
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
39
2.14
GERAETE
.
41
2.15
ABKUERZUNGEN
.
43
3
3
ERGEBNISSE
.
44
3.1
CHARAKTERISIERUNG
EINER
SUSPENSIONSKULTUR
VON
COLEUS
BLUMEI
.
44
3.1.1
WACHSTUM
UND
ROSMARINSAEUREAKKUMULATION
.
44
3.1.2
MEDIUMSPARAMETER
.
46
3.1.3
ENZYMAKTIVITAETEN
.
49
3.2
ROSMARINSAEUREGEHALTE
VON
IN
VITRO-PFLANZEN
VON
COLEUS
BLUMEI
.
51
3.3
ROSMARINSAEUREGEHALTE
VON
BLECHNUM
BRASILIENSE
.
51
3.4
LOKALISATION
DER
ROSMARINSAEURE
.
53
3.4.1
LOKALISATION
IN
SUSPENSIONSZELLEN
VON
C.
BLUMEI
.
53
3.4.2
LOKALISATION
IN
ZELLEN
VON
PFLANZEN
.
54
3.4.3
LOKALISATION
IN
PROTHALLIEN
VON
B.
BRASILIENSE
.
56
3.5
VORARBEITEN
ZU
AUFNAHMESTUDIEN
.
58
3.5.1
ISOLIERUNG
VON
PROTOPLASTEN
AUS
SUSPENSIONSZELLEN
VON
C.
BLUMEI
.
58
3.5.2
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
COLEUS
-PFLANZEN
.
65
3.5.3
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
PROTHALLIEN
VON
B.
BRASILIENSE
.
65
3.5.4
VAKUOLENISOLIERUNG
.
66
3.5.4.1
POLYKATIONEN-INDUZIERTE
LYSE
.
66
3.5.4.2
LYSE
DURCH
OSMOTISCHEN
SCHOCK
.
67
3.5.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
VAKUOLEN
.
68
3.6
VERTEILUNGSEXPERIMENT
MIT
ROSMARINSAEURE
.
73
3.7
ABSORPTIONSSPEKTREN
DER
ROSMARINSAEURE
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
PH-WERT
.74
3.8
AUFNAHME
VON
ROSMARINSAEURE
IN
ZELLEN,
PROTOPLASTEN
UND
VAKUOLEN
VON
C.
BLUMEI
(VORVERSUCHE)
.
75
3.8.1
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
ZELLEN
.
75
3.8.2
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
PROTOPLASTEN
.
77
3.8.3
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
VAKUOLEN
.
78
3.8.4
ROSMARINSAEUREADSORPTION
AM
TONOPIASTEN
.
79
3.9
TRANSPORTSTUDIEN
MIT
ISOLIERTEN
VAKUOLEN
.
80
3.9.1
ANALYTIK
DER
IN
DIE
VAKUOLEN
AUFGENOMMENEN
ROSMARINSAEURE
.
80
3.9.2
TRENNUNG
DER
VAKUOLEN
VOM
INKUBATIONSMEDIUM
MIT
HILFE
DER
SILIKONOELMETHODE
.
82
3.9.3
STABILITAET
DER
VAKUOLEN
.
83
3.9.4
CHARAKTERISIERUNG
DES
TRANSPORTES
VON
ROSMARINSAEURE
IN
ISOLIERTE
VAKUOLEN
VON
C.
BLUMEI
.
84
3.9.4.1
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ROSMARINSAEUREKONZENTRATION
.
84
3.9.4.2
INKUBATION
MIT
SYNTHETISCHER
ROSMARINSAEURE
.
85
3.9.4.3
EINFLUSS
VON
ATP
UND
ATPASE-EFFEKTOREN
.
87
4
3.9.4.4
EINFLUSS
VON
LONOPHOREN
UND
ENTKOPPLEM
.
89
3.9.4.5
EINFLUSS
VON
ANORGANISCHEN
IONEN
.
91
3.9.4.6
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
DES
INKUBATIONSMEDIUMS
.
93
3.9.4.7
EINFLUSS
VON
VORSTUFEN
AUS
DER
ROSMARINSAEUREBIOSYNTHESE
.
94
3.9.4.8
EINFLUSS
VON
NAD(P)H
.
95
3.9.4.9
EINFLUSS
DER
INKUBATIONSTEMPERATUR
.
97
3.9.4.10
VARIATION
DER
INKUBATIONSZEIT
.
97
3.9.4.11
AUFNAHME
VON
ROSMARINSAEURE
IN
VAKUOLEN
VON
LAVENDEL
.
98
3.10
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
99
3.11
BESTIMMUNG
DES
PH-WERTES
DER
VAKUOLEN
.
106
3.11.1
PH-BESTIMMUNG
MIT
NEUTRALROT
.
107
3.11.2
PH-BESTIMMUNG
DES
ZELLPRESSSAFTES
.
108
3.11.3
PH-BESTIMMUNG
MITTELS
'
1
P-NMR-SPEKTROSKOPIE
.
109
3.11.4
PH-BESTIMMUNG
UND
POTENTIALMESSUNGEN
MIT
MIKROELEKTRODEN
.
111
3.12
AKKUMULATION
DER
ROSMARINSAEURE
.
113
4
DISKUSSION
.
115
4.1
COLEUS
BLUMEI
.
115
4.1.1
CHARAKTERISIERUNG
EINER
SUSPENSIONSKULTUR
.
115
4.1.2
ISOLIERUNG
VON
PROTOPLASTEN
UND
VAKUOLEN
.116
4.1.3
LOKALISATION
DER
ROSMANNSAEURE
.119
4.1.4
BESTIMMUNG
DES
PH-WERTES
IN
DER
VAKUOLE
.
120
4.1.5
BESTIMMUNG
DES
MEMBRANPOTENTIALES
DES
TONOPIASTEN
.
122
4.1.6
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
POTENTIAL,
PH
UND
ROSMARINSAEURETRANSPORT
.
123
4.1.7
AUFNAHMESTUDIEN
MIT
ISOLIERTEN
VAKUOLEN
.
128
4.1.8
AKKUMULATION
DER
ROSMARINSAEURE
IN
DER
VAKUOLE
.
134
4.1.9
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
136
4.2
BLECHNUM
BRASILIENSE
.
138
ZUSAMMENFASSUNG
.
141
LITERATURVERZEICHNIS
.145 |
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