Fötale und neonatale Entwicklung der mRNA-Konzentrationen von Wachstumshormon und Gonadotropinen beim Schwein:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Braunschweig u.a.
Bundesforschungsanst. für Landwirtschaft
1994
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| Schriftenreihe: | [Landbauforschung Völkenrode / Sonderheft]
150 |
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1 Einleitung 1
2 Literaturübersicht 2
2.1 Grundlagen der Genstruktur und Proteinbiosynthese 2
2.1.1 Aufbau eines Gens 2
2.1.2 Der Weg vom Gen zum Protein 4
2.1.3 Regulationsmöglichkeiten der Proteinbiosynthese.. 5
2.2 Protein- und Genstruktur der Hormone 6
2.2.1 Wachstumshormon (GH) : 6
2.2.2 Gonadotropine... , 7
2.2.2.1 Proteinstruktur und Lokalisation 7
2.2.2.2 Genstruktur der a-Untereinheit 8
2.2.2.3 Genstruktur der LHß-Untereinheit 9
2.2.2.4 Genstruktur der FSHß-Untereinheit 10
2.2.2.5 Stammesgeschichtliche Konservierung der Genstruktur von LH und FSH 10
2.3 Funktion und Regulation der Hormone im postnatalen bzw. adulten
Schwein 13
2.3.1 Wachstumshormon 13
2.3.1.1 Funktion von GH im postnatalen Tier 13
2.3.1.2 Regulation der GH-Sekretion 14
2.3.1.3 Regulation der GH-Gentranskription 15
2.3.2 Gonadotropine 17
2.3.2.1 Funktion von LH und FSH im adulten Tier.. 17
2.3.2.2 Regulation der Sekretion von LH und FSH 18
2.3.2.3 Regulation der Gentranskription der Gonadotropine 20
2.4 Entwicklung der Hormonsysteme im fötalen und neonatalen Schwein 23
2.4.1 Fötale Entwicklung der Adenohypophyse und des Portalgefäßsystems 23
2.4.2 Fötale Differenzierung der hormonproduzierenden Zellen der Adeno¬
hypophyse 24
2.4.3 Wachstumshormon 26
2.4.3.1 Funktion von GH im Schweinefötus 26
2.4.3.2 Entwicklung der GH-Konzentration in der Adenohypophyse 27
2.4.3.3 Entwicklung der GH-Konzentration im Blutplasma 28
2.4.3.4 Entwicklung der Regulation der GH-Sekretion 29
2.4.3.5 Entwicklung und Regulation der GH-Gentranskription 30
2.4.4 Gonadotropine 31
2.4.4.1 Funktion von LH und FSH im Schweinefötus 31
2.4.4.2 Entwicklung der LH- und FSH-Konzentration in der Adenohypophyse 32
2.4.4.3 Entwicklung der LH- und FSH-Konzentration im Blutplasma 33
2.4.4.4 Entwicklung der Regulation der Sekretion von LH und FSH 34
2.4.4.5 Entwicklung und Regulation der Gentranskription der Gonadotropine 36
3 Eigene Untersuchungen 38
3.1 Zielsetzung . 38
3.2 Material und Methoden 39
3.2.1 Material und Labortechniken 39
3.2.1.1 Tiere 39
3.2.1.2 Gewebeentnahme 39
Fötale Adenohypophysen 39
Adenohypophysen bzw. Kontrollgewebe von Ferkeln und adulten
Schweinen 40
3.2.1.3 Hybridisierungssonden 40
3.2.1.4 Labortechniken 41
Extraktion von Gesamt-RNA 41
Gelelektrophorese 42
Northern Blot und RNA-Fixierung 43
Herstellung von cRNA aus cDNA-Inserts 43
Markierungsverfahren für die Hybridisierungssonden 44
Nick Translation . 44
Random Primed Labeling 44
5 -End-Labeling 45
Hybridisierungsverfahren 45
Prinzip der Hybridisierung 45
Hybridisierung und enzymatischer Nachweis 45
Hybridisierung und radioaktiver Nachweis 46
Rehybridisierung 48
3.2.2 Vorversuche zur Methodik 48
3.2.2.1 Spezifität der Hybridisierungssonden 48
3.2.2.2 Auswahl des Nachweisverfahrens 49
3.2.3 Versuchsaufbau zur Untersuchung der mRNA-Konzentrationen von GH,
LHß-, FSHß- und a-Untereinheit 51
3.2.4 Statistische Auswertung 53
3.3 Ergebnisse 54
3.3.1 Körper- und Adenohypophysengewicht, Gesamt-RNA pro Hypophyse 54
3.3.2 Vorversuche zur Methodik 57
3.3.2.1 Spezifität der Hybridisierungssonden 57
3.3.2.2 Auswahl des Nachweisverfahrens 62
3.3.3 Entwicklung der mRNA-Konzentrationen von GH, LHß-, FSHß- und
ot-Untereinheit 64
3.4 Diskussion 72
3.4.1 Körper- und Adenohypophysengewicht, Gesamt-RNA pro Hypophyse 72
3.4.2 Spezifität des mRNA-Nachweises 73
3.4.3 Auswahl und Bewertung der Hybridisierungs- und Meßverfahren 75
3.4.4 Entwicklung der mRNA-Konzentrationen von GH, LHß-, FSHß- und
a-Untereinheit 77
3.4.4.1 Wachstumshormon 77
3.4.4.2 LHß-, FSHß-und a-Untereinheit : 80
4 Zusammenfassung 86
5 Literaturverzeichnis 89
6 Anhang 108
6.1 Verzeichnis der Reagenzien 108
6.2 Verzeichnis der Geräte 110
6.3 Verzeichnis der Puffer, Lösungen und Protokolle 111
6.3.1 Gewebeentnahme 111
6.3.2 RNA-Extraktion 111
6.3.3 Elektrophorese 112
6.3.4 Northern Blot 113
6.3.5 Herstellung von RNA aus cDNA-Inserts 114
6.3.6 Präparation der cDNA-Inserts für die radioaktiven Markierungen 115
6.3.7 Markierung der Hybridisierungssonden 117
6.3.8 Enzymatisches Nachweisverfahren 118
6.3.9 Radioaktives Nachweisverfahren 120
6.4 Verzeichnis der Abkürzungen 122
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