Methodik der quantitativen Erfassung früher hämopoetischer Stammzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I. EINLEITUNG
1
1.1. DAS HAEMOPOETISCHE KONTINUUM
1
1.1.1. DIE PROGENITORZELLEN 2
1-1-2. DIE STAMMZELLEN 3
1.2. DIE KNOCHENMARL-LANGZEITKULTUR (LTC) 8
1
.
2
.
1
.
ANALOGIEN DER KNOCHENMARKHAEMOPOESE
IN VIVO UND IN VITRO 8
1.2.2. DIE REGULATION DER HAEMOPOESE IN DER LTC 12
1.2.3. DIE KNOCHENMARK-LANZEITKULTUR ALS
QUANTITATIVER ASSAY (LDA)
15
II. AUFGABENSTELLUNG 24
III. METHODEN UND MATERIALIEN 27
111.1. MATERIAL 27
111.1.1. UNTERSUCHTES ZELLMATERIAL 27
111.1.1.1. KNOCHENMARKASPIRATE 27
111.1.1.2. SEKTION VON RIPPEN 27
111.1.1.3. NABELSCHNURBLUT 27
111.1.1.4. LEUKOPHERESE 28
111.1.2. ISCOVE'S MODIFIED DULBECCO'S
CONDITIONED MEDIUM 28
111.1.3. SEREN 28
111.1.4. HYDROCORTISON-NATRIUM-SUCCINAT 29
111.1.5. MATRIX DER SEMISOLIDEN KOLONIE-ASSAYS 29
111.1.5.1. AGAR 29
111.1.5.2. METHYLZELLULOSE 29
111.1.6. KOLONIEN STIMULIERENDE AGENZIEN 30
111.1.6.1. RINDEI-SERUM-ALBUMIN 30
111.1.6.2. 5637-KONDITIONIERTES MEDIUM 30
111.1.6.3. REKOMBINANTES ERYTHROPOETIN
31
111.1.7. ANTIKOERPER
31
III.2. METHODEN
32
111.2.1. ZELLSEPARATIONEN 32
111.2.1.1. SEDIMENTATION MIT METHYLZELLULOSE 32
111.2.1.2. ZENTRIFUGIERUNG MIT DICHTEGRADIENT 32
111.2.1.3. ELIMINIERUNG VON PLASTIK-ADHAERENTEN
ZELLEN
32
111.2.1.4. MESSUNG UND ANREICHERUNG DER CD34-
POSITIVEN ZELLEN
33
III.2.2. KOLONIE-ASSAYS IM SEMISOLIDEN MEDIUM 34
111.2.2.1. AGAR: GM-CFC-ASSAY
34
111.2.2.2. METHYLZELLULOSE: MIX-ASSAY
34
III.2.3. KNOCHENMARK-LANGZEITKULTUR (LTC)
35
111.2.3.1. ANZUECHTEN UND UNTERHALTEN VON LTC 35
111.2.3.2. ZWEISCHRITT-LTC 36
111.2.3.3. LTC IN 96WELL-MIKROTITERPLATTEN 36
111.2.4. LIMITING DILUTION ASSAY 38
111.2.4.1. STATISTISCHE ANALYSE DER LDA 38
111.2.4.2. TECHNIK DES LDA
41
111.2.5. SONSTIGE STATISTISCHE ANALYSEN 42
III.2.5.1. MITTELWERT UND VARIATION 42
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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IV. ERGEBNISSE
44
IV. 1. KOLONIE-ASSAYS IM SEMISOLIDEN MEDIUM
44
IV.1.1. DER MIX-ASSAY
44
IV.1.2. DER CFU-G/M-ASSAY
45
IV.2. BESTIMMUNG DES ANTEILS DER CD34+ ZELLEN 46
IV.3. KNOCHENMARK-LANGZEITKULTUREN
46
IV.3.1. EINSCHRITT-LTC
46
IV.3.2. ZWEISCHRITT-LTC
46
IV.3.3. EINSCHRITT-LTC IN 96WELL-MIKROTITER-
PLATTEN
47
IV.3.4. BFUE IN DER LTC
47
IV.3.5. UNTERSUCHUNG SEHR ALTER LTC
47
IV.3.
6
. UNTERSUCHUNG VON COBBLE-STONE AREALEN 48
IV.4. LIMITING DILUTION ASSAY
49
IV.4.1. DEFINITION DER POSITIVEN ANTWORT
49
IV.4.2. VORVERSUCH
51
IV. 4.3. DIREKTVERGLEICH VON NKM, HUC UND
PBSC (LH) MITTELS LDA
51
V. DISKUSSION
52
V.L. DER MIX-ASSAY
52
V.2. CFU-GM UND CD34+ ZELLEN IN NKM, HUC UND LH 54
V.3. DIE KNOCHENMARK-LANGZEITKULTUR
55
V.3.1. UNTERSUCHUNG DER ZELLEN DES UEBERSTANDES
IM ZEITLICHEN VERLAUF DER LTC
55
V.3.2. DIE UNTERSUCHUNG SEHR ALTER LTC 56
V.4. DER LIMITING DILUTION ASSAY 58
V-4.1. DISKUSSION DER METHODE DES LDA 58
V.4.2. DISKUSSION DER ERGEBNISSE 62
V.4.2.1. ABSOLUTE ZAHLEN IN DER ZELLKULTUR
TECHNIK 62
V.4.2.2. ERGEBNISSE DER LDA 64
V.5. VERSUCH EINER ERKLAERUNG DER HAEMOPOESE
IN DER LTC (HYPOTHESE)
68
ANHANG
LITERATURVERZEICHNIS
LI
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