Physiologische und genetische Untersuchungen des Acetat-Stoffwechsels in Corynebacterium glutamicum:
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| Veröffentlicht: |
Jülich
Forschungszentrum, Zentralbibliothek
1994
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| adam_text | PHYSIOLOGISCHE UND GENETISCHE UNTERSUCHUNGEN DES ACETAT- STOFFWECHSELS
IN CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM DIETER REINSCHEID INHALTSVERZEICHNIS I.
EINLEITUNG 1 H. MATERIALIEN UND METHODEN 8 1. BAKTERIENSTAEMME UND
PLASMIDE 8 2. CHEMIKALIEN 10 3. NAEHRMEDIEN UND KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
11 4. QUANTIFIZIERUNG VON ACETAT UND LYSIN 15 5. ENZYMAKTIVITAETEN,
PROTEINCHEMIE UND KINETIK 15 5.1. BESTIMMUNG DER SPEZIFISCHEN
AKTIVITAETEN VON ACETAT-KINASE, PHOSPHOTRANS- ACETYLASE, ISOCITRAT-LYASE,
MALAT-SYNTHASE UND ISOCITRAT-DEHYDROGENASE 15 5.2. REINIGUNG VON
ISOCITRAT-LYASE UND MALAT-SYNTHASE AUS C. GLUTAMICUM 19 5.3. KINETISCHE
ANALYSEN : 19 5.4. DENATURIERENDE POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 20
5.5. N-TERMINUS-SEQUENZIERUNG 20 5.6. GELFILTRATION ZUR NATIVEN
GROESSENBESTIMMUNG 20 6. ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON DNA 21 7.
TRANFORMATIONSTECHNIKEN 22 7.1. TRANSFORMATION VON PLASMID-DNA NACH E.
COLI 22 7.2. ELEKTROPORATION VON C. GLUTAMICUM 23 7.3. KONJUGATIVER
TRANSFER VON PLASMIDEN AUS 2S. COLI NACH C. GLUTAMICUM 24 8. ANALYSE UND
REKOMBINATION VON DNA 24 8.1. RESTRIKTION UND MODIFIKATION VON DNA 24
8.2. SEQUENZIERUNG VON DNA 25 8.3. SOUTHERN-BLOT-ANALYSE , 28 9.
PRAEPARATION UND ANALYSE VON RNA 30 9.1. ISOLIERUNG VON RNA AUS C.
GLUTAMICUM 30 9.2. NORTHERN-BLOT-ANALYSE 31 HI. ERGEBNISSE 33 1.
UNTERSUCHUNGEN ZUR AKTIVITAET VON ISOCITRAT-LYASE, MALAT-SYNTHASE UND
ISOCITRAT-DEHYDROGENASE IN C. GLUTAMICUM 33 1.1. EINFLUSS DER
KOHLENSTOFFQUELLE AUF DIE SPEZIFISCHE AKTIVITAET VON ISOCITRAT- LYASE,
MALAT-SYNTHASE UND ISOCITRAT-DEHYDROGENASE IN C. GLUTAMICUM 33 1.2:
EINFLUSS DER WACHSTUMSPHASE AUF DIE AKTIVITAET VON ISOCITRAT-LYASE,
MALAT-SYNTHASE UND ISOCITRAT-DEHYDROGENASE IN C. GLUTAMICUM 35 2.
ISOLIERUNG UND ANALYSE DES ISOCITRAT-LYASE-GENS (ACEA) UND DES
MALAT-SYNTHASE-GENS (ACEB) AUS C GLUTAMICUM 37 2.1. ISOLIERUNG DES
AC&SS-GENS AUS C. GLUTAMICUM DURCH HETEROLOGE KOMPLEMENTATION EINER E.
CO// -MUTANTE 37 2.2. SUBKLONIERUNG UND RESTRIKTIONSKARTIERUNG DES
ACEB-GENS UND ANGRENZENDER DNA-BEREICHE AUS C. GUTAMICUM 39 2.3.
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE DES ACEB-GENS UND ANGRENZENDER DNA-BEREICHE AUS C.
GLUTAMICUM 41 2.4. SEQUENZIERUNG DES MALAT-SYNTHASE-KOMPLEMENTIERENDEN
BEREICHES AUS C. GLUTAMICUM : IDENTIFIZIERUNG DER GENE ACEA, ACEB, THIX
UND ORFZ 41 2.5. VERGLEICH VON ISOCITRAT-LYASE UND MALAT-SYNTHASE AUS C.
GLUTAMICUM MIT DEN ENTSPRECHENDEN ENYZMEN ANDERER ORGANISMEN 48 2.6.
CHARAKTERISIERUNG DER VON ORFZ AUS C. GLUTAMICUM ABGELEITETEN
AMINOSAEURE-SEQUENZ 51 2.7. UEBEREXPRESSION DER GENE ACEA UND ACEB IN C.
GLUTAMICUM 54 2.8. ANALYSE DER ACEA- UND ACEZ?-SPEZIFISCHEN TRANSKRIPTE
IN C. GLUTAMICUM 58 2.9. VERSUCH, EIN AN DER REGULATION BETEILIGTES
PROTEIN AUZUTITRIEREN 60 3. PHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR FUNKTION
DES GLYOXYLAT-ZYKLUS IN C. GLUTAMICUM 60 3.1. INAKTIVIERUNG DER GENE
ACEA UND ACEB IM CHROMOSOM VON C. GLUTAMICUM UND ANALYSE DER MUTANTEN 61
3.2. INAKTIVIERUNG DER OFFENEN LESERASTER THIX UND ORFZ IM CHROMOSOM VON
C. GLUTAMICUM UND ANALYSE DER MUTANTEN 66 4. BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG VON ISOCITRAT-LYASE, MALAT-SYNTHASE UND
ISOCITRAT-DEHYDROGENASE AUS C. GLUTAMICUM 67 4.1. REINIGUNG,
QUANTIFIZIERUNG UND BIOCHEMISCHE DARSTELLUNG DER ISOCITRAT-LYASE AUS C.
GLUTAMICUM 67 4.2. REINIGUNG, QUANTIFIZIERUNG UND BIOCHEMISCHE
DARSTELLUNG DER MALAT-SYNTHASE AUS C. GLUTAMICUM 72 4.3.
CHARAKTERISIERUNG DER ISOCITRAT-DEHYDROGENASE IN ZELLEXTRAKTEN VON C.
GLUTAMICUM 76 5. UNTERSUCHUNGEN ZUM ACETAT-STOFFWECHSEL UND DESSEN
REGULATION IN C. GLUTAMICUM 77 5.1. NACHWEIS VON ACETAT-KINASE UND
PHOSPHOTRANSACETYLASE IN C. GLUTAMICUM 77 5.2. ANALYSE VON C.
GLUTAMICUM-MUTANTEN MIT DEFEKTEN IM ACETAT-STOFFWECHSEL 78 5.3.
PHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR REGULATION DES ACETAT- STOFFWECHSELS
IN C. GLUTAMICUM 81 IV. DISKUSSION 84 V.ZUSAMMENFASSUNG 96 VI. LITERATUR
98
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