Bedeutung der Disulfidbrücken für Struktur, Stabilität und Faltungsmechanismus von Ribonuklease T1:
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1. Verfasser: | |
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Sprache: | German |
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1994
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
STABILITAET
VON
PROTEINEN
.
1
1.1.1.
BEDEUTUNG
VON
DISULFIDBRUECKEN
FUER
DIE
KONFORMATIONELLE
STABILITAET
.
3
1.1.2.
ZWEI-ZUSTANDS-MODELL
.
3
1.2.
FALTUNG
VON
PROTEINEN
.
4
1.2.1.
PROLIN-MODELL
FUER
DIE
FALTUNG
VON
PROTEINEN
.
5
1.2.2.
KATALYSE
VON
PROLYL-CIS-TRANS-ISOMERISIERUNGEN
.
6
1.3.
RNASE
TI
ALS
MODELLSYSTEM
.
7
1.4.
PROBLEMSTELLUNG
.
14
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
15
2.1.
MATERIALIEN
.
15
2.2.
SEQUENZSPEZIFISCHE
MUTAGENESE
.
15
2.3.
PRODUKTION
UND
REINIGUNG
DER
VARIANTEN
VON
RNASE
TI
.
16
2.4.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
RNASE
TI
UND
A-LACTALBUMIN
.
16
2.5.
DARSTELLUNG
DER
RCM-FORMEN
VON
RNASE
TI
.
16
2.6.
DARSTELLUNG
VON
APO-A-LACTALBUMIN
.
17
2.7.
RNASE
TL-AKTIVITAETSTEST
.
18
2.8.
PROLYLISOMERASE-AKTIVITAETSTEST
.
18
2.9.
FLUORESZENZ-MESSUNGEN
.
19
2.10.
CD-MESSUNGEN
.
19
2.11.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
GDMCL,
HARNSTOFF
UND
NACL
.
20
2.12.
BESTIMMUNG
DER
FLUORESZENZ
EINES
GEMISCHES
VON
N-ACETYL-TRYPTOPHAN
AMID
UND
N-ACETYL-TYROSIN-AMID
.
20
2.13.
LOESUNGSMITTEL-INDUZIERTE
UEBERGAENGE
.
21
2.14.
THERMISCH
INDUZIERTE
UEBERGAENGE
.
22
2.15.
KINETISCHE
ANALYSE
VON
REAKTIONEN
ERSTER
ORDNUNG
.
23
2.16.
RUECKFALTUNGEN
UND
ENTFALTUNGEN
.
24
2.17.
ENTFALTUNGSTESTS
ZUR
ANALYSE
DES
ZWEI-ZUSTANDS-MODELLS
.
24
2.18.
PROLYLISOMERISIERUNGEN
IN
ENTFALTETEN
FORMEN
VON
RNASE
TI
.
25
2.19.
FALTUNGSREAKTIONEN
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
2SS-(-P55)-TL
NACH
BILDUNG
VON
U
F
.
27
2.20.
ENTFALTUNGEN
UND
RUECKFALTUNGEN
VON
RCM-WT-TL
IM
UEBERGANGSBEREICH
NACH
BILDUNG
VON
UF
.
28
2.21.
ANALYSE
DER
FALTUNG
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
2SS-(-P55)-TL
IM
UEBER
GANGSBEREICH
(HAMSTOFF-INDUZIERTE
ENTFALTUNGEN
UND
RUECKFALTUNGEN)
.
28
2.22.
ANALYSE
DER
FALTUNG
VON
RCM-(-P55)-TL
IM
UEBERGANGSBEREICH
(NACL
INDUZIERTE
ENTHALTUNGEN
UND
RUECKFALTUNGEN)
.
30
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.23.
ANALYSE
DER
FALTUNG
VON
RCM-WT-TL
IM
UEBERGANGSBEREICH
(NACL
INDUZIERTE
ENTFALTUNGEN
UND
RUECKFALTUNGEN)
.
30
2.24.
DARSTELLUNG
DES
RNASE
TI
FRAGMENTS
14-104
.
33
3.
ERGEBNISSE
.
35
3.1.
STRUKTUR
UND
AKTIVITAET
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
RCM-WT-TL
.
35
3.2.
STABILITAET
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
RCM-WT-TL
ALS
FUNKTION
DER
NACL
UND
DER
HARNSTOFF-KONZENTRATION
.
39
3.3.
LANGSAME
BILDUNG
VON
SEKUNDAERSTRUKTUR
WAEHREND
DER
RUECKFALTUNG
VON
RCM-(-P55)-TL
.
44
3.4.
GUELTIGKEIT
DES
ZWEI-ZUSTANDS-MODELLS
FUER
DEN
NACL-INDUZIERTEN
FAL
TUNGSUEBERGANG
VON
RCM-(-P55)-TL
.
46
3.4.1.
KINETISCHE
ENTFALTUNGSTESTS
MIT
RCM-(-P55)-TL
.
47
3.4.2.
GUELTIGKEIT
DES
DREI-ZUSTANDS-MODELLS
FUER
DEN
GDMCL-INDUZIERTEN
UEBER
GANG
VON
APO-A-LACTALBUMIN
.
50
3.5.
FALTUNGSMECHANISMUS
VON
RNASE
TI
IN
ABWESENHEIT
DER
DISULFIDBRUECKEN
.
58
3.5.1.
CIS-PROLINE
IN
RCM-(-P55)-TL
UND
RCM-WT-TL
.
58
3.5.2.
KATALYSE
VON
ENTFALTUNG
UND
RUECKFALTUNG
UNTER
IDENTISCHEN
END
BEDINGUNGEN
.
69
3.5.3.
PROLYLISOMERISIERUNGEN
IM
ENTFALTETEN
ZUSTAND
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
RCM-WT-TL
.
71
3.5.4.
ANALYSE
DER
FALTUNGSKINETIK
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
RCM-WT-TL
(NACL
INDUZIERTE
UEBERGAENGE)
.
72
3.6.
EINFLUSS
DER
DISULFIDBRUECKEN
AUF
DIE
FALTUNG
VON
S54G/P55N-RNASE
TI
.
81
3.6.1.
VERGLEICH
DER
RUECKFALTUNGSREAKTIONEN
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
2SS
(-P55)-TL
.
81
3.6.2.
PROLYLISOMERISIERUNGEN
IN
DEN
ENTFALTETEN
FORMEN
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
2SS-(-P55)-TL
.
83
3.6.3.
ANALYSE
DER
FALTUNG
VON
RCM-(-P55)-TL
UND
2SS-(-P55)-TL
IM
BEREICH
DES
UEBERGANGS
.
86
3.7.
STABILITAET
UND
STRUKTUR
VON
RCM-(-P39)-TL
.
96
3.8.
EINFLUSS
DER
AMINOSAEURERESTE
1-13
AUF
DIE
STABILITAET,
STRUKTUR
UND
FAL
TUNG
VON
RNASE
TI
.
100
3.8.1.
STRUKTUR
UND
STABILITAET
VON
S13M-RNASE
TI
.
100
3.8.2.
ZEITVERLAUF
DER
BRCN-SPALTUNG
.
101
3.8.3.
CHARAKTERISIERUNG
DES
RNASE
TL-FRAGMENTS
(14-1O4)-T1
.
104
4.
DISKUSSION
.
111
4.1.
CIS-KONFORMATIONEN
VON
PRO39
UND
PRO55
IN
RNASE
TI
MIT
GEOEFFNETEN
DISULFIDBRUECKEN
.
111
4.2.
EINFLUSS
VON
PRO39
UND
PRO55
AUF
DIE
FALTUNG
VON
RNASE
TI
MIT
GEOEFF
NETEN
DISULFIDBRUECKEN
.
114
4.3.
EINFLUSS
DER
S54G/P55N-MUTATION
AUF
DIE
STABILITAET
VON
RNASE
TI
.
115
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.4.
EINFLUSS
DER
AMINOSAEURERESTE
1-13
AUF
DIE
STABILITAET
UND
FALTUNG
VON
RCM-WT-TL
.
116
4.5.
KATALYSE
GESCHWINDIGKEITSBESTIMMENDER
FALTUNGSSCHRITTE
DURCH
PROLYL
ISOMERASE
.
119
4.6.
KINETISCHE
UEBERPRUEFUNG
DES
ZWEI-ZUSTANDS-MODELLS
.
120
4.7.
EINFLUSS
DER
DISULFIDBRUECKEN
AUF
DIE
FALTUNG
VON
RNASE
TI
.
122
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.127
6.
SUMMARY
.
131
7.
ABKUERZUNGEN
.
133
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.135 |
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