Prüfung des Einflusses von Thalidomid und Thalidomid-Metaboliten auf die Aktivität der Steroid-11b-Monooxygenase aus Nebennierenrinden vom Rind:
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
1.1.
THALIDOMID
UND
THALIDOMID
-
METABOLITE
1
1.1.1.
THALIDOMID
ALS
SCHALAFMITTEL
1
1.1.2.
CHEMISCHE
EIGENSCHAFTEN
DES
THALIDOMIDS
1
1.1.3.
EMBRYOTOXISCHE
WIRKUNGEN
VON
THALIDOMID
4
1.1.4.
IMMUNSUPPRESSIVE
WIRKUNGEN
VON
THALIDOMID
6
1.2.
FUNKTION
DER
NEBENNIERE
8
1.2.1.
MORPHOLOGIE
DER
NEBENNIERE
8
1.2.2.
HORMONE
DER
NEBENNIERE
11
1.2.3.
EIGENSCHAFTEN
DER
STEROID
-11
SS-HYDROXYLASE
13
II.
ZIELSETZUNG
15
III.
MATERIAL
19
III
.1.
CHEMIKALIEN
19
III.
2.
VERWENDETE
LOESUNGEN
20
111.2.1.
PRAEPARATION
EINER
LOESLICHEN
STEROID-USS-HYDROXY
LAESE
20
III.
2.2.
PROTEINBESTIMMUNG
20
III.
2.3.
HERSTELLEN
DES
PUFFERS
21
III.
2.4.
HERSTELLEN
DER
RADIOAKTIVEN
SUBSTRATLOESUNG
(DOC)
21
HI.
2.4.1.
HERSTELLEN
DER
14
C-DOC-STAMMLOESUNG
21
III.
2.4.2
HERSTELLEN
DER
14
C-DOC-ZWISCHENLOESUNG
21
III.
2.4.3.
HERSTELLEN
DER
14
C-DOC-GEBRAUCHSLOESUNG
21
III.
2.5.
BESTIMMUNG
DER
STEROID
11
SS-HYDROXYLASEAKTIVITAET
22
III.
2.6.
HERSTELLUNG
DER
INHIBITORLOESUNGEN
22
III.
2.6.1.
THALIDOMID
22
III.
2.6.2.
N,N
-
PHTHALOYL
-
L
-
GLUTAMINSAEURE,
N,N
-
PHTHALOYL
-
D
-
GLUTAMINSAEURE
UND
N-(O-CARBOXYBENZOYL]-DL
GLUTAMINSAEURE
22
III.
2.6.3.
N,N
-
(4
-
HYDROXYPHTHALOYL]
-
DL
-
GLUTAMINSAEURE
(4HO-NPG)
23
III.
2.6.4.
TENSIDE:
TWEEN
20
UND
TRITON
WR
1339
23
III.
2.7.
HERSTELLEN
DES
SPRTIHREAGENZ
AUI
PHENOLE
23
III.
3.
VERSUCHSMATERIAL
23
III.
4.
GERAETE
24
IV.
METHODEN
26
IV.L.
PRAEPARATION
EINER
STEROID
-119
-HYDROXYLASE
25
IV.1.1.
GEWINNUNG
DER
MITOCHONDRIEN
AUS
NEBENNIEREN
VOM
RIND
25
IV.L.
2.
ULTRASCHALLAUFSCHLUSS
DER
MITOCHONDRIENSUSPENSION
26
IV.L.
3.
PROTEINBESTIMMUNG
26
IV.
2.
INKUBATIONSANSAETZE
UND
PROBENAUIARBEITUNG
27
IV.
2.1.
OPTIMIERUNG
DER
INKUBATIONSANSAETZE
27
IV.
2.2.
STANDARDINKUBATIONSANSATZ
ZUR
BESTIMMUNG
DER
ENZYMKINETISCHEN
DATEN
27
IV.
2.3.
INKUBATIONSANSATZ
MIT
HEMMSTOFF
27
IV.
2.4.
ANSAETZE
ZUR
AUFTRAGUNG
NACH
DIXON
28
IV.
2.6.
AUFARBEITEN
DER
PROBEN
28
IV.
3.
CHROMATOGRAPHIE
28
IV.
3.1.
DTINNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
ZUR
REINHEITSPRUFUNG
DER
SYNTHETISIERTEN
SUBSTANZEN
28
IV.
3.2.
DUNNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
VON
11-DESOXYCORTICOSTERON
UND
CORTICOSTERON
29
IV.
3.3.
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
29
IV.
3.4.
VERWENDETE
NACHWEISREAKTIONEN
IN
DER
DTINNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
30
IV.
4.
RADIOCHEMISCHE
AUSWERTUNG
DER
EXPERIMENTE
MIT
DER
STEROID
-11
SS-HYDROXY
LAESE
31
LLSS-HYDROXYLIERUNG
V.
ERGEBNISSE
32
V.L.
SYNTHESE
VON
THALIDOMID
UND
THALIDOMID
-
METABOLITEN
32
V.1.1.
N,N
-
PHTHALOY
1
-
DL
-
GLUTAMINSAEURE
-
IMID
(THALIDOMID]
32
V.L.
2.
N,N
-
PHTHALOYL
-
GLUTAMINSAEURE
35
V.L.
3.
N
-
[O
-
CARBOXYBENZOYL)
-
GLUTAMINSAEURE
40
V.L.
4.
N,N
-
(4
-
HYDROXY
-
PHTHALOYL]
-
DL
-
GLUTAMINSAEURE
44
V.2.
GEWINNUNG
DES
ENZYMS
48
V.2.1.
LAGERUNG
UND
ANREICHERUNG
DER
STEROID
11
SS
HYDROXYLASE
48
V.2.2.
ANTEIL
DES
LOESLICHEN
PROTEINS
(=
STEROID-LLSS
HYDROXYLASE]
AM
GESAMTPROTEIN
50
V.3.
OPTIMIERUNG
DES
TRENNVERFAHRENS
51
V.3.1.
ERGEBNISSE
DER
CHROMATOGRAPHISCHEN
TRENNUNG
VON
11
-
DESOXYCORTICOSTERON
(DOC)
UND
CORTICOSTERON
(CORT)
51
V.3.1.1.
ERGEBNISSE
DER
DUNNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
51
V.3.1.
2.
ERGEBNISSE
DER
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHEN
TRENNUNG
54
V.3.2.
ERGEBNISSE
DER
OPTIMIERUNG
DER
PROBENAUFARBEITUNG
56
V.3.2.1.
EXTRAKTION
UND
MESSUNG
DER
RADIOAKTIVITAET
MITTELS
FLUSSIGKEITSSZINTILLATION
56
V.3.2.
2.
KONTROLLE
DER
AUFARBEITUNGSSCHRITTE
AUF
VERLUSTE
AN
RADIOAKTIV
MARKIERTEM
MATERIAL
58
V.4.
AUFBAU
DES
ENZYMATISCHEN
TESTSYSTEMS
61
V.4.1.
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
AUF
DIE
LLSS-HYDROXYLIERUNG
61
V.4.2.
EINFLUSS
DER
INKUBATIONSZEIT
AUF
DIE
62
V.4.3.
NACHWEIS
DES
LINEAREN
ZUSAMMENHANGS
ZWISCHEN
EINGESETZTER
ENZYMPROTEIN
UND
UMGESETZTER
DOC-MENGE
64
V.4.4.
GRAPHISCHE
DARSTELLUNG
NACH
MICHAELIS-MENTEN
UND
LINEWEAVER
-
BURK
BEI
VARIABLER
DOC-KONZENTRATION
65
V.5.
HEMMUNG
DER
STEROID-LLSS-HYDROXYLASE
MIT
INHIBITOREN
VON
BEKANNTEM
HEMMTYP
68
V.5.1.
KOMPETITIVE
HEMMUNG
MIT
METYRAPON
68
V.5.2.
NICHTKOMPETITIVE
HEMMUNG
MIT
4-AMINOGLUTETHIMID
74
V.6.
PRUEFUNG
DES
EINFLUSSES
VON
THALIDOMID
UND
THALIDOMID-METABOLITEN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
STEROID-LLSS-HYDROXYLASE
78
V.6.1.
THALIDOMID
78
V.6.2.
THALIDOMID
-
METABOLITE
81
V.7.
PRUEFUNG
DES
EINFLUSSES
VON
TENSIDEN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
STEROID-LLSS-HYDROXYLASE
87
V.7.1.
TWEEN
20
87
V.7.2.
TRITON
WR
1339
91
VI.
DISKUSSION
95
VII.
ZUSAMMENFASSUNG
108
VIII.
LITERATURVERZEICHNIS
111
IX.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
119 |
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