Vergleichende Untersuchungen zur Regulation des Androgen-Rezeptors in hormonsensitiven versus hormon-resistenten Prostata-Karzinom-Zellinien:
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
LISTE
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
.
VIII
VORWORT
.
XI
I.
E
INLEITUNG
.
1
1.
PRIMAERE
SEXUALDIFFERENZIERUNG
.
1
2.
DER
ANDROGEN-REZEPTOR
-
EIN
MITGLIED
DER
FAMILIE
STEROIDALER
KERNREZEPTOREN
.
2
2.1.
ANDROGEN-REZEPTOR
MRNA
.
2
2.2.
DIE
STRUKTUR
DES
ANDROGEN-REZEPTORS
.
3
2.2.1.
N-TERMINUS
.
4
2.2.2.
DNA-BINDUNGSDOMAENE
.
6
2.2.3.
KEMLOKALISIERUNGS-SIGNAL
.
7
2.2.4.
LIGAND-BINDUNGSDOMAENE
.
8
3.
RNA-POIYMERASELL
TRANSKRIPTION
.
12
4.
DNA-BINDUNGSMOTIV:
ARE
.
14
5.
ANDROGENE
THERAPIE
DES
PROSTATA-KARZINOMS
.
15
5.1.
REGULATION
DURCH
ANDROGENE
IN
DER
NORMALEN
PROSTATA
.
16
5.1.1.
REGULATION
DES
ANDROGEN-REZEPTORS
.
17
5.1.2.
PROSTATA-SPEZIFISCHES
ANTIGEN
.
17
5.1.3.
PROSTATEIN:
C3(L)
.
19
5.2.
REGULATION
DURCH
ANDROGENE
IM
PROSTATA-KARZINOM
.
20
5.2.1
ANDROGEN-REZEPTOR
.
20
5.2.2.
TGF-SSL
.
21
5.2.3.
MAMMA-KARZINOM
.
22
6.
ZIELSETZUNG
.
22
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
25
1.
MATERIAL
.
25
1.1.
MATERIALIEN
ALLGEMEIN
.
25
1.2.
ORGANISMEN
UND
ZELLINIEN
.
26
1.3.
VEKTOREN
.
26
1.4.
PUFFERLOESUNGEN
.
27
1.5.
BAKTERIENMEDIEN
.
30
1.6.
OLIGODEOXYNUKLEOTIDE
.
31
-
SONDEN
.
31
-
SEQUENZIER
BZW.
PCR-PRIMER
.
31
-
GSA-OLIGONUKLEOTIDE
.
32
2.
METHODEN
UND
GERAETE
.
33
2.1.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UND
BIOCHEMISCHE
ARBEITSMETHODEN
.
33
2.1.1.
ANZUCHT
UND
KULTIVIERUNG
VON
BAKTERIENKULTUREN
.
33
2.1.2.
BESTIMMUNG
DES
PHAGENTITERS
.
33
2.1.3.
AUPLATTIEREN
DER
GENOMISCHEN
BANK
.
34
2.1.4.
PLAQUE/FILTER
LIFTING
.
34
2.1.5.
MARKIEREN
DER
SONDEN
.
34
2.1.6.
HYBRIDISIEREN
.
35
2.1.7.
WASCHEN
.
35
2.1.8.
ZWEITSCREEN
.
35
2.1.9.
PRAEPARATION
DER
PHAGEN-DNA
.
36
2.1.10.
RESTRIKTIONSANSAETZE
.
36
2.1.11.
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
.
36
2.1.12.
PARTIELLER
RESTRIKTIONSVERDAU
.
37
2.1.13.
QUALITATIVE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
37
2.1.14.
QUANTITATIVE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
37
2.1.15.
POLYACRYLAMID
(PAA)-GELELEKTROPHORESE
.
37
2.1.16.
ELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
38
2.1
17.
SOUTHERN-BLOT
.
38
2.1.18.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
39
2.1.19.
LIGATION
.
39
2.1.20.
TRANSFORMATION
.
39
2.1.21.
SUBKLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
40
-
PBS-KONSTRUKTE
.
40
-
CAT-KONSTRUKTE
.
40
-
SS-GAL-KONSTRUKTE
.
41
2.1.22.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA:
MINIPRAEP
.
42
2.1.23.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA:
MAXIPRAEP
.
42
2.1.24.
SEQUENZIERUNG
.
42
2.1.25.
PRAEPARATION
VON
KEMEXTRAKTEN
.
43
2.1.26.
DNAASEL
PROTECTION
ASSAYS
.
43
2.1.27.
GEL
MOBILITY
SHIFT
ASSAYS
.
44
2.1.28.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
44
2.1.29.
SOUTH-WESTEM-BLOTS
.
45
2.1.30.
UV-CROSSLINKS
.
47
2.1.31.
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
DER
HAR
DBD
.
48
2.2.
ZELLKULTUR
UND
TRANSFEKTIONSEXPERIMENTE
.
49
VI
2.2.1.
KULTIVIERUNG
DER
ZELLINIEN
.
49
2.2.2.
TRANSIENTE
TRANSFEKTIONEN
.
49
2.2.3.
STABILE
TRANSFEKTIONEN:
ELEKTROPORATION
.
50
2.2.4.
CAT
ASSAYS
.
51
2.2.5.
SS-GAL-ASSAYS
.
51
M.
E
RGEBNISSE
.
53
1.
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HAR-PROMOTERS
.
53
1.1.
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
.
53
1.2.
SUBKLONIERUNG
.
54
1.3.
SEQUENZIERUNG
.
54
2.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
ANDROGEN-REZEPTOR-PROMOTERS
.
61
2.1.
CAT-KONSTRUKTE
.
62
2.2.
TRANSIENTE
TRANSFEKTIONEN
.
63
3.
PROTEIN-DNA-WECHSELWIRKUNGEN
DES
AR-PROMOTERS
IN
VITRO
.
68
3
1.
DNAASEL
PROTECTION
ASSAYS
.
68
3.2.
GEL
SHIFT
ASSAYS
.
73
3.3.
SUPERSHIFT-EXPERIMENTE
.
78
4.
COTRANSFEKTIONEN
.
83
IV.
D
ISKUSSION
.
87
1.
BASALE
PROMOTERELEMENTE
.
87
2.
PROXIMALER
SILENCER
.
88
3.
PROXIMALER
ENHANCER
.
89
3.1.NF-1
.
91
3.2.
C-MYC
.
92
3.3.
ANDROGEN-REZEPTOR
.
92
4.
DISTALER
SILENCER
.
94
5.
DISTALER
ENHANCER
.
94
6.
COTRANSFEKTIONS-EXPERIMENTE
.
95
7.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
97
V.
Z
USAMMENFASSUNG
.
103
VI.
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
105 |
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