Charakterisierung der Chinonbindenische Qi im Cytochrom-bc1-Komplex aus Hefe:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 107 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
7
II.
1
MATERIAL
UND
GERAETE
7
II.
1.1.
MATERIAL
7
II.
1.2
GERAETE:
7
II.
1.3
CHEMIKALIEN
7
II.2
ANZUCHT
VON
HEFE
(SACCHAROMYCES
CEREVISIAE)
8
II.
3
MITOCHONDRIENPRAEPARATION
AUS
BAECKERHEFE
(SACCHAROMYCES
CEREVISIAE)
(NACH
CLEJAN
UND
BEATTIE,
1986)
9
II.4
HERSTELLUNG
VON
SUBMITOCHONDRIALEN
PARTIKELN
AUS
HEFEMITOCHONDRIEN
10
II.4.1
HERSTELLUNG
VON
SUBMITOCHONDRIALEN
PARTIKELN
NACH
CLEJAN
UND
BEATTIE,
(1986)
10
II.4.2
HERSTELLUNG
VON
SUBMITOCHONDRIALEN
PARTIKELN
NACH
PEDERSEN
UND
HULLIHEN
(1979),
MODIFIZIERT
10
II.5
HERSTELLUNG
VON
CHROMATOPHOREN
AUS
PURPURBAKTERIEN
11
II.6
PRAEPARATION
DES
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
AUS
HEFEMITOCHONDRIEN
(NACH
LJUNGDAHL
ET
AL.
1987,
MODIFIZIERT)
11
II.7
REINIGUNG
VON
CYTOCHROM
B
AUS
DEM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
VON
HEFE
12
II.8
PH-WASCHUNGEN
SUBMITOCHONDRIALER
MEMBRANEN
UND
CHROMATOPHOREN
14
II.9
MESSUNG
DES
RESPIRATORISCHEN
ELEKTRONENTRANSPORTES
14
11.10
AKTIVITAETSBESTIMMUNGEN
VON
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXEN
15
11.11
STEADY
STATE
MESSUNGEN
AN
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXEN
15
11.12
PROTEINBESTIMMUNGEN
15
II.
12.1
PROTEINBESTIMMUNG
MIT
PIERCE
PROTEINASSAY
16
II.
12.2
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
MARKWELL
ET
AL.
(1978),
MODIFIZIERT
16
11.13
BESTIMMUNG
VON
CYTOCHROM-GEHALTEN
17
11.14
GEWINNUNG
VON
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERN
(BERZBOM,
1980)
17
11.15
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNGEN
18
11.16
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESEN
18
11.17
IMMUNO-BLOTS
18
11.18
AUTORADIOGRAPHIE
UND
RADIOAKTIVITAETSMESSUNG
IN
FLUESSIGKEITEN
19
11.19
ELEKTROELUTION
VON
PROTEINEN
11.20
PROTEASESPALTUNGEN
19
11.21
NHZ-TERMINALE
SEQUENZIERUNGEN
VON
PROTEINEN
UND
PROTEOLYTISCHEN
ENTSTANDENEN
PEPTIDEN
20
III.
ERGEBNISSE
21
III.
1
CHARAKTERISIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
UND
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
22
III.2
HEMMSTOFFSENSIBILITAET
DER
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXE
AUS
WILDTYP
UND
MUTANTEN-HEFE
27
III.2.1
PLSO
BESTIMMUNGEN
AN
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXEN
AUS
BEIDEN
HEFESTAEMMEN
27
III.2.2
MESSUNGEN
DER
REDUKTION
VON
CYTOCHROM
B
IN
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXEN
UNTER
GLEICHGEWICHTSBEDINGUNGEN
28
III.3
DESTABILISIERUNG
DES
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXES
IN
DER
MITOCHONDRIALEN
MEMBRAN
BEI
HOHEN
PH-WERTEN
32
III.4.
REINIGUNG
VON
CYTOCHROM
B
AUS
DEM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
36
III.5
HERSTELLUNG
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
CYTOCHROM
B,
CYTOCHROM
CI
UND
DAS
RIESKE-FE-S-PROTEIN
AUS
DEM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
VON
HEFE
40
III.6
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
AM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
AUS
HEFE
48
III.6.1
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
MIT
(
14
C)AZIDO-MONURON
48
III.6.2
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
MIT
(
14
C)-AZIDO-UBICHINON
AM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
AUS
HEFE
50
III.6.3
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
MIT
(
3
H)-7-AZIDO-ISOPROPYL-ACRIDON
52
III.7
MARKIERUNGSVERSUCHE
MIT
14
C-BROMANIL
54
III.
8
PROTEOLYTISCHE
SPALTUNG
VON
CYTOCHROM
B
55
III
.9
NH
2
-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
PROTEIN-UNTEREINHEITEN
59
III.9.1
NHZ-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
VON
(
T4
C)-AZIDO-MONURON
MARKIERTEM
CYTOCHROM
B
60
I1I.9.2
NH
2
-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
VON
MIT
(
14
C)-AZIDO-UBICHINON
MARKIERTEM
CYTOCHROM
B
63
III.9.3
NHZ-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
DER
DURCH
(
14
C)-AZIDO-UBICHINON
MARKIERTEN
UNTEREINHEIT
8
65
IV.
DISKUSSION
66
IV.
1
STRUKTURELLE
UNTERSUCHUNGEN
AN
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEXEN
67
IV.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
DCMU-WIRKUNG
AM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
AUS
HEFE
72
IV.3
STRUKTURELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
QI-ZENTRUMS
IM
CYTOCHROM
BEI
KOMPLEX
AUS
HEFE
75
IV.4
LOKALISIERUNG
DER
BINDUNGSSTELLEN
VON
(
I4
C)-AZIDO-MONURON
IN
DER
SEQUENZ
VON
CYTOCHROM
B
82
V.
ZUSAMMENFASSUNG
VI.
LITERATUR
91
94 |
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