Freigabe von basic Fibroblast-Growth-Factor aus resorbierbaren Trägern zur Förderung der Wundheilung:
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
5
1.1
PHYSIOLOGIE
DER
HAUT
.
5
1.2
PHYSIOLOGIE
DER
WUNDHEILUNG
.
9
1.2.1
ENTZUENDUNG
.
10
1.2.1.1
THROMBOZYTEN
.
10
1.2.1.2
NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN
.
11
1.2.1.3
MONOZYTEN/MAKROPHAGEN
.
11
1.2.1.4
FUNKTION
UND
REGULATION
VON
LYMPHOZYTEN
.
12
1.2.2
PROLIFERATIVE
PHASE
.
13
1.2.2.1
REGULATION
DER
FIBROBLASTENPROLIFERATION
.
13
YY
1.2.2.2
SYNTHESE
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX
.
14
1.2.2.2.1
COLLAGEN
.
14
1.2.2.2.2
PROTEOGLYCANE
.
15
1.2.2.2.3
FIBRONECTIN
.
15
1.2.2.3
ENDOTHELZELLFUNKTION
UND
ANGIOGENESE
.
15
1.2.3
UMBILDUNGSPHASE:
MATRIXUMBILDUNG
.
16
1.3
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
GESTOERTEN
WUNDHEILUNG
.
16
1.3.1
DEKUBITALULZERA
.
16
1.3.2
ULCUS
CRURIS
VENOSUM
.
17
1.3.3
DIABETISCHE
ULZERA
.
17
1.4
KONVENTIONELLE
THERAPIE
DER
GESTOERTEN
WUNDHEILUNG
.
19
1.4.1
DEKUBITALULZERA
.
19
1.4.2
ULCUS
CRURIS
VENOSUM
.
19
1.4.3
DIABETISCHE
ULZERA
.
20
1.5
FOERDERUNG
DER
WUNDHEILUNG
DURCH
GEEIGNETE
WUNDABDECKUNGEN
.
21
1.5.1
VERBAENDE
AUS
POLYMEREN
.
22
1.5.1.1
SEMIPERMEABLE
FILME
.
22
1.5.1.2
SCHAEUME
.
22
1.5.1.3
HYDROGELE
.
22
1.5.1.4
XEROGELE
.
22
1.5.1.5
DEXTRANOMERPARTIKEL
.
23
1.5.1.6
ALGINAT-VERBAENDE
.
23
1.5.1.7
HYDROKOLLOIDE
.
23
1.5.2
IMPRAEGNIERTE
VERBAENDE
.
23
1.5.3
DESODORIERENDE
VERBAENDE
.
24
1.5.4
BIODRESSINGS
.
24
1.6
NEUE
ANSAETZE
IN
DER
THERAPIE
VON
PROBLEMWUNDEN
.
25
1.7
TRAEGERMATERIALIEN
FUER
BFGF
ZUR
ANWENDUNG
BEI
WUNDHEILUNGSSTOERUNGEN
27
1.7.1
CHITIN
UND
CHITOSAN
.
27
1.7.2
ALGINATE
.
34
1.7.3
COLLAGEN
.
35
1.7.4
GELATINE
.
37
1.8
BASIC
FIBROBLAST-GROWTH-FACTOR
.
39
2
ZIELSETZUNG
44
3
MATERIALIEN
UND
METHODEN
45
3.1
BASIC
FIBROBLAST-GROWTH-FACTOR
.
45
3.2
TRAEGERMATERIALIEN
.
46
3.2.1
CHITOSAN
.
46
3.2.2
EINGEFFIHRTE
WUNDABDECKUNGEN
.
47
3.3
SONSTIGE
.
48
3.4
GEFRIERTROCKNUNG
.
57
3.5
ANALYTIK
VON
CHITOSAN-ABBAUPRODUKTEN
.
61
3.5.1
BESTIMMUNG
DER
REDUZIERENDEN
ENDEN
.
61
3.5.2
BESTIMMUNG
VON
N-ACETYLGLUCOSAMIN-BAUSTEINEN
.
61
3.5.3
BESTIMMUNG
VON
GLUCOSAMIN-BAUSTEINEN
.
61
3.6
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
62
3.7
WASSERGEHALT
.
62
3.8
POROSITAETSMESSUNGEN
.
62
3.9
BESTIMMUNG
DES
QUELLUNGSVERMOEGENS
.
62
3.10
MARKIERUNG
VON
BFGF
MIT
135
IOD
.
63
3.11
BELADUNG
VON
WUNDVLIESEN
MIT
BFGF
.
63
3.11.1
EINBRINGEN
VON
BFGF
WAEHREND
DER
VLIESHERSTELLUNG
.
63
3.11.2
EINBRINGEN
VON
BFGF
UNMITTELBAR
VOR
DER
VERWENDUNG
DER
VLIESE
63
3.12
HPLC-METHODEN
.
64
3.12.1
LONENAUSTAUSCH-HPLC
.
64
3.12.2
HEPARIN-AFFINITAETS-HPLC
.
64
3.13
ZELLKULTUR
.
65
3.13.1
ZELLEN
.
65
3.13.2
ANZUCHTBEDINGUNGEN
.
65
3.13.3
BEDINGUNGEN
BEI
DEN
ZELLKULTURVERSUCHEN
.
66
3.13.3.1
ZUGABE
VON
BFGF
AM
TAG
DER
ZELLAUSSAAT
.
66
3.13.3.2
ZUGABE
VON
BFGF
NACH
SECHS
TAGEN
VORLAUFZEIT
.
66
3.13.4
TESTMETHODEN
.
67
3.13.4.1
ZELLZAEHLUNG
NACH
VITALFAERBUNG
.
67
3.13.4.2
METHYL
3
H-THYMIDIN-INKORPORATIONS-TEST
.
67
3.13.4.3
MTT-TEST
.
68
3.13.5
VALIDIERUNG
DES
MTT-TESTS
.
68
3.13.5.1
PRAEZISION
.
69
3.13.5.2
LINEARITAET
UND
RICHTIGKEIT
.
70
3.13.5.3
STOERANFAELLIGKEIT
.
71
3.13.5.4
SELEKTIVITAET
.
71
3.13.6
BIOKOMPATIBILITAETSTEST
.
72
3.13.6.1
AUFWACHSVERSUCHE
.
72
3.13.6.2
VERSUCHE
IN
DER
LOGARITHMISCHEN
PHASE
.
73
3.13.6.3
VERSUCHE
AN
KONFLUENTEN
ZELLEN
.
73
3.13.7
FAERBUNG
VON
FIBROBLASTEN
NACH
PAPPENHEIM
.
73
3.14
FREISETZUNGSUNTERSUCHUNGEN
.
75
3.14.1
KONTINUIERLICHE
FREISETZUNG
.
75
3.14.2
SEQUENTIELLE
FREISETZUNG
.
75
3.14.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
MIT
THRESHOLDYYILA
.
76
3.14.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
MIT
GAMMA
COUNTER
.
78
3.14.5
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
MIT
DEM
BIOASSAY
.
78
3.15
UNTERSUCHUNG
DER
LAGERSTABILITAET
BELADENER
WUNDVLIESE
.
81
4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
84
4.1
GEFRIERTROCKNUNG
ALS
VERFAHREN
ZUR
HERSTELLUNG
VON
WUNDVLIESEN
.
84
4.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
HERGESTELLTEN
VLIESE
.
88
4.2.1
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
88
4.2.2
POROSITAETSMESSUNGEN
.
91
4.2.3
WASSERGEHALT
.
92
4.2.4
FLUESSIGKEITSAUFNAHMEVERMOEGEN
.
93
4.3
BIODEGRADIERBARKEIT
VON
CHITOSANVLIESEN
.
101
4.4
ENTWICKLUNG
VON
ZELLKULTURMETHODEN
.
108
4.4.1
WACHSTUMSKURVE
UNBEHANDELTER
SWISS-3T3-FIBROBLASTEN
.
108
4.4.2
BASIC
FGF-WIRKUNG
IN
DER
LOGARITHMISCHEN
PHASE
.
110
4.4.2.1
ZELLZAEHLUNG
NACH
VITALFAERBUNG
.
110
4.4.2.2
MTT-TEST
.
112
-
4.4.2.3
METHYL
3
H-THYMIDIN-INKORPORATIONS-TEST
.
114
4.4.3
BASIC
FGF-WIRKUNG
IN
DER
PLATEAUPHASE
.
117
4.4.3.1
ZELLZAEHLUNG
NACH
VITALFAERBUNG
.
117
4.4.3.2
MTT-TEST
.
119
4.4.3.3
METHYL
3
H-THYMIDIN-INKORPORATIONS-TEST
.
121
4.4.4
MORPHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
UNTER
BFGF-BEHANDLUNG
.
124
4.5
BIOKOMPATIBILITAET
DER
VERWENDETEN
TRAEGER
.
128
4.5.1
KOMPATIBILITAET
IM
AUFWACHSVERSUCH
.
128
4.5.2
KOMPATIBILITAETSTEST
AN
ZELLEN
IN
DER
LOGARITHMISCHEN
PHASE
.
.
130
4.5.3
KOMPATIBILITAETSTEST
AN
KONFLUENTEN
ZELLEN
.
132
4.6
UEBERPRUEFUNG
DER
BIOLOGISCHEN
AKTIVITAET
DES
INKORPORIERTEN
BFGFS
.
.
134
4.7
HOMOGENITAET
DER
BFGF-VERTEILUNG
IM
VLIES
.
141
4.8
FREISETZUNGSUNTERSUCHUNGEN
.
144
4.8.1
KURZZEITFREISETZUNG
.
144
4.8.1.1
FREISETZUNG
AUS
METHYLPYRROLIDINONCHITOSAN
.
144
4.8.1.2
FREISETZUNG
AUS
LYOSTYPT
.
153
4.8.1.3
FREISETZUNG
AUS
SORBALGON
.
159
4.8.1.4
FREISETZUNG
AUS
GELITA
.
162
4.8.2
LANGZEITFREISETZUNG
.
165
4.8.2.1
FREISETZUNG
AUS
METHYLPYRROLIDINONCHITOSAN
.
165
4.8.2.2
FREISETZUNG
AUS
CHITOSANLACTAT
.
169
4.8.2.3
FREISETZUNG
AUS
LYOSTYPT
.
-
.
.
.
172
4.8.3
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DES
FREIGESETZTEN
BFGFS
.
176
4.8.3.1
FREISETZUNG
AUS
METHYLPYRROLIDINONCHITOSAN
.
176
4.8.3.2
FREISETZUNG
AUS
CHITOSANLACTAT
.
178
4.8.3.3
FREISETZUNG
AUS
LYOSTYPT
.
180
4.9
VERGLEICH
DES
QUELLUNGSVERHALTENS
MIT
DEN
FREISETZUNGSKINETIKEN
.
.
.
183
4.10
STABILITAET
BFGF-HALTIGER
METHYLPYRROLIDINONCHITOSANVLIESE
.
187
5
ABSCHLIESSENDE
DISKUSSION
190
6
ZUSAMMENFASSUNG
196
7
AUSBLICK
198
A
ANHANG:
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
199
B
ANHANG:
VALIDIERUNG
DES
BIOASSAYS
200
B.L
PRAEZISION
.
200
B.2
LINEARITAET
UND
RICHTIGKEIT
.
202
B.3
STOERANFAELLIGKEIT
.
204
B.4
SELEKTIVITAET
.
210
C
TABELLENANHANG
211
C.L
DATEN
ZUR
ENTWICKLUNG
DER
ZELLKULTURMETHODEN
.
211
C.2
DATEN
DER
BIOKOMPATIBILITAETSTESTS
.
216
C.3
DATEN
DER
KURZZEITFREISETZUNGEN
.
219
C.4
DATEN
DER
LANGZEITFREISETZUNG
.
225
C.5
DATEN
DES
METHODENVERGLEICHS
.
234
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
240
LITERATUR
242 |
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