Quantifizierung, Verbreitung und Struktur-Aktivitäts-Beziehungen des myotropen Crustaceen-Neuropeptids Orcokinin:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1994 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I. EINLEITUNG 1
1. NEUROSEKRETION UND NEUROPEPTIDE BEI CRUSTACEEN 1
2. MYOTROPE PEPTIDE 3
3. PROBLEMSTELLUNG 8
II. MATERIAL UND METHODEN 10
1. VERSUCHSTIERE 10
2. HERSTELLUNG DES ORCOKININ-ANTISERUMS 10
3. BESTIMMUNG DES ANTIKOERPERTITERS 11
3.1. IMMUNODOT-BLOT
11
3.2. ENZYMIMMUNOASSAY 12
4. ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 12
4.1. AFFINITAETSREINIGUNG DER ANTIKOERPER 12
4.2. BIOTINYLIERUNG DER ANTIKOERPER 14
4.3. DURCHFUEHRUNG DES "SANDWICLT-ELISA 14
4.4. PUFFERLOESUNGEN UND REAGENZIEN FUER DEN ELISA 16
4.5. GEWEBEEXTRAKTION UND PROBENVORBEREITUNG 17
4.5.1. NERVENSYSTEM UND ENDDARM 17
4.5.2. HAEMOLYMPHE 18
5. SEPPAK-REINIGUNG 18
6. PROTEINBESTIMMUNG
19
7. PRAEPARATION UND EXTRAKTION VON NERVENGEWEBE 19
8. GELFILTRATION 20
8.1. SUPEROSE-12 (FPLC) 20
8.2. SEPHADEX G-50 20
9. IMMUNAFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 21
9.1. HERSTELLUNG DER ANTI-ORCOKININ-IGG-PROTEIN-SEPHAROSE-SAEULE 21
9.2. DURCHFUEHRUNG DER IMMUNAFIFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 21
10. HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (HPLC) 22
11. AMINOSAEUREANALYSE 22
12. AUTOMATISCHE GASPHASEN-SEQUENZIERUNG 23
13. FAST-ATOM-BOMBARDEMENT (FAB)-MASSENSPEKTROSKOPIE 23
13.1. SYNTHETISCHE PEPTIDE 23
13.2. NATIVE PEPTIDE 24
14. INKUBATION MIT CARBOXYPEPTIDASE A 24
15. PEPTIDSYNTHESE 24
15.1. T-BOC-FESTPHASENPEPTIDSYNTHESE 24
15.2. FMOC-FESTPHASENPEPTIDSYNTHESE 25
15.2.1. SYNTHESE 25
15.2.2. ABSPALTUNG UND REINIGUNG DES PEPTIDS 27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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16. BIOASSAYS 28
16.1. ISOLIERTER ENDDARM VON
ORCONECTES LIMOSUS UND CARCINUS MAENAS 28
16.2. ISOLIERTES HERZ VON ORCONECTES LIMOSUS 29
16.3. SEMI-ISOLIERTES HERZ VON
CARCINUS MAENAS 30
17. DOSIS-WIRKUNGS-KURVEN UND ANALYSE DER DATEN 30
III. ERGEBNISSE 31
1. ENZYMIMMUNOASSAY 31
1.1. ANTISEREN 31
1.2. BESTIMMUNG DES ANTIKOERPERTITERS 31
1.3. ENTWICKLUNG UND SPEZIFITAETSUEBERPRUEFIMG DES SANDWICH-ELISA 33
2. QUANTITATIVE VERTEILUNG VON ORCOKININ IM NERVENSYSTEM ASTACIDER
CRUSTACEEN 40
2.1. ORCONECTES LIMOSUS 40
2.1.1. NERVENGEWEBE UND ENDDARM 40
2.1.2. HAEMOLYMPHE 41
2.2.
ASTACUS ASTACUS 42
2.3.
PROCAMBARUS CLARKII ~ 43
2.4.
HOMARUS AMERICAMTS 44
2.4.1. NERVENGEWEBE UND ENDDARM 44
2.4.2. HAEMOLYMPHE 45
2.5.
PENAEUS JAPONICUS 45
3. STRUKTUR-AKTIVITAETS-BEZIEHUNGEN VON ORCOKININ 47
3.1. BIOLOGISCHE WIRKUNG VON ORCOKININ 47
3.1.1. EFFEKT AUF DEN ISOLIERTEN ENDDARM 47
3.1.2. EFFEKT AUF DAS ISOLIERTE HERZ 49
3.2. N-TERMINAL VERKUERZTE ANALOGA 49
3.3. C-TERMINAL VERKUERZTE ANALOGA 52
3.4. C-TERMINAL AMIDIERTES ANALOGON 56
3.5. AMINOSAEURESUBSTITUTIONEN 60
4. VORKOMMEN ORCOKININ-VERWANDTER PEPTIDE IM NERVENSYSTEM DER
STRANDKRABBE,
CARCINUS MAENAS 63
4.1. ISOLIERUNG ORCOKININ-IMMUNREAKTIVER PEPTIDE 63
4.2. AMINOSAEUREANALYSE UND SEQUENZIERUNG 71
5. ERSTE UNTERSUCHUNGEN ZUM VORKOMMEN VON ORCOKMIN-IR IN INSEKTEN 76
IV. DISKUSSION 78
1. QUANTIFIZIERUNG VON ORCOKININ IM NERVENSYSTEM UND IN DER HAEMOLYMPHE
ASTACIDER CRUSTACEEN 7G
2. STRUKTUR-AKTIVITAETS-BEZIEHUNGEN 82
3. VERBREITUNG ORCOKININ-VERWANDTER PEPTIDE 86
V. ZUSAMMENFASSUNG 92
VI. LITERATURVERZEICHNIS 95
ANHANG: LEBENSLAUF, PUBLIKATIONSLISTE, ERKLAERUNG |
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