Strukturelle und funktionelle Untersuchungen an den POU-Homöobox-Genen der Brn-3-Familie und ihre mögliche Rolle bei der Entstehung peripherer neuroektodermaler Tumoren:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 100 S. Ill., graph. Darst. |
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1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
8
2.1
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
8
22
VERWENDETE
BAKTERIENSTSMME
UND
MAUSLINIEN
10
2.2.1
BAKTERIENSTAEMME
(ESCHERICHIA
COLI)
10
2.2.2
MAUSLINIEN
(MUS
MUSCULUS)
10
23
DNA
UND
RNA-TECHNOLOGIE
10
2.3.1
ISOLIERUNG
VON
DNA
10
2.3.1.1
ISOLIERUNG
VON PLASMID-DNA
AUS
5
ML
KULTUREN
10
23.1.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID
DNA
AUS
100
ML
KULTUREN
11
2.3.13
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
FUER
TRANSFEKTIONEN
11
23.1.4
ISOLIERUNG
VONARPHAGEN
DNA
AUS
GROSSEN
LYSATEN
11
2.3.13
PRAEPARATION
GESAMTGENOMISCHER
MAUS-DNA
12
23.2
ISOLIERUNG
VON
RNA
13
233
RESTRIKTIONSVERDAUUNG
UND
ELEKTROPHORESE
VON
DNA
14
23.4
AUFFUELLEN
VON
5
'
UEBERHAENGENDEN
ENDEN
14
2.3.5
ISOLIERUNG
VON
DNA
RESTRIKTIONSFRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
14
23.6
PRAEPARATION
VON
VEKTOR-DNA
14
23.7
LIGATION
VON
DNA
15
2.3.8
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN
15
23.9
EXONUKLEASE
III-ABBAU
15
23.10
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
16
23.11
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA
16
23.11.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
HILFE
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
16
23.112
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
17
2.3.12
IMMOBILISIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
NYLONMEMBRANEN
17
2.3.12.1
TRANSFER
VON
DNA
AUF
NYLONMEMBRAN
17
2.3.12.2
TRANSFER
VON
RNA
AUS
AGAROSEGELEN
AUF
NYLONMEMBRANEN
18
23.13
HYBRIDISIERUNGEN
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
DNA-SONDEN
UND
AUTORADIOGRAPHIE
19
23.14
ISOLIERUNG
VON
DNA-KLONEN
AUS
GENOMISCHEN
DNA-BIBLIOTHEKEN
20
2.3.14.1
HERKUNFT
DER
VERWENDETEN
DNA-BIBLIOTHEKEN
20
2.3.14.2
PRAEPARATION
VON
1
OD-BAKTERIEN
20
23.143
TITERBESTIMMUNG
UND
AUSPLATTIEREN
EINER
GENOMISCHEN
BIBLIOTHEK
20
2.3.14.4
ABSUCHEN
EINER
GENOMISCHEN
DNA-BIBLIOTHEK
21
23.15
POLYMERASEKETTENREAKTIONEN
(PCR-REAKTIONEN)
21
23.15.1
DNA-AMPLIFIKATIONEN
MITTELS
PCR-REAKTIONEN
21
2.3.15.2
RNA-ANALYSE
MIT
HILFE
VON
PCR-REAKTIONEN
22
2.3.15.3
VERANKERTE
POLYMERASEKETTENREAKTION
(RACE-PCR)
22
2.4
ARBEITEN
MIT
PROTEINEN
23
2.4.1
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
23
2.4.2
GEWINNUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
PROTEINEN
23
2.4.2.1
GESAMTZELLEXTRAKTE
23
2.4.2.2
EXPRESSION
UND
AUFREINIGUNG
VON
FUSIONSPROTEINEN
24
2.4.23
IN
VITRO-TRANSLATION
24
2.4.3
DNA-BINDUNGSANALYSE
25
2.4.3.1
GELRETARDATIONSANALYSEN
25
2.4.4
PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONSANALYSEN
26
2.4.4.1
IMMUNPRAEZIPITATION
26
2.4.4.2
PRAEZIPITATION
VON
GST-FUSIONSPROTEINEN
26
2.5
ZELLKULTURTECHNIKEN
27
2.5.1
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
27
2.5.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
27
2.5.3
REF-ASSAY
27
2.5.3.1
ISOLIERUNG
PRIMAERER
RATTENFIBROBLASTEN
27
2.5.3.2
DNA-TRANSFEKTION
UND
AUSBILDUNG
VON
FOCI
28
2.5.3.3
ETABLIERUNG
VON
ZELLINIEN
AUS
FOCI
28
2.5.3.4
WEICHAGARTEST
29
2.5.3.5
TRANSPLANTATION
VON
TRANSFORMIERTEN
ZELLEN
IN
NACKTMAEUSE
29
2.6
SS-GALACTOSIDASE-FSRBUNG
VON
EMBRYONEN
29
3
ERGEBNISSE
31
3.1
ISOLIERUNG
VON
BM-3
GENOMISCHEN
KLONEN
31
32
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
BM-3
CDNA-MOLEKUELEN
35
3.2.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
BRN-3A
CDNA-MOLEKUELEN
36
3.2.2
EIGENSCHAFTEN
VON
BM-3B
CDNA-MOLEKUELEN
40
3.2.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
BRN-3C
CDNA-MOLEKUELEN
40
3.2.4
VERGLEICH
DER
ABGELEITETEN
PROTEINSEQUENZEN
43
33
TRANSFORMIERENDE
EIGENSCHAFTEN
DER
BM-3
GENE
46
3.3.1
REF-ASSAY
46
3.3.2
KOTRANSFEKTION
VON
BM-3
GENEN
MIT
EINEM
AKTIVIERTEN
HA-RAS
ONKOGEN
47
3.3.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
BM-3/HA-RAS
ZELLINIEN
51
3.4
TRANSAKTIVIERENDE
EIGENSCHAFTEN
DER
BM-3
PROTEINE
55
33
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
BM-3A(I)-INHIBIERUNG
DURCH
BM-3B(K)
57
3.5.1
DNA
BINDENDE
EIGENSCHAFTEN
DER
BM-3
PROTEINE
57
3.5.2
DNA
BINDENDE
EIGENSCHAFTEN
DER
BM-3
POU-DOMAENEN
59
3.5.3
PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTION
ZWISCHEN
BM-3A(L)
UND
BM-3B(K)
63
3.6
EXPRESSIONSANALYSEN
DER
BRN-3
GENE
68
3.6.1
TRANSKRIPTANALYSEN
68
3.6.2
EXPRESSION
EINES
BM-3A
LACZ-TRANSGENS
70
4
DISKUSSION
72
4.1
STRUKTUR
UND
EXPRESSION
DER
BM-3
GENE
72
42
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
BM-3
PROTEINE
75
43
MODELLE
ZUR
BESCHREIBUNG
DER
FUNKTION
DER
BM-3
PROTEINE
83
5
ZUSAMMENFASSUNG
87
6
LITERATURVERZEICHNIS
88
7
ANHANG
97 |
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