Untersuchungen zur Biosynthese von Isopentenylpyrophosphat in Bakterien:
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Jülich
1994
|
Schriftenreihe: | Forschungszentrum <Jülich>: Berichte des Forschungszentrums Jülich
2927 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
L
EINLEITUNG
_
1
H.
MATERIAL
UND
METHODEN
.10
1.
CHEMIKALIEN
.10
2.
KULTURBEDINGUNGEN.
12
2.1.
NAEHRMEDIEN
.
12
2.2.
STAMMHALTUNG
.
15
2.3.
BESTIMMUNG
DES
BAKTERIENWACHSTUMS
.
15
3.
LYOPHILISIERTE
ZELLEN
UND
HERSTELLUNG
VON
ROHEXTRAKTEN
SOWIE
VON
MEMBRANFRAKTIONEN
FUER
ENZYMTESTS
.15
3.1.
LYOPHILISIERTE
ZELLEN
.
15
3.2.
AEROBE
HERSTELLUNG
VON
ROHEXTRAKTEN
UND
MEMBRANFRAKTIONEN
.
16
3.3.
ANAEROBE
HERSTELLUNG
VON
ROHEXTRAKTEN
.
16
3.4.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATIONEN
.
17
4.
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNGSMETHODEN
.
17
4.1.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNGEN
.
17
4.2.
HPLC-TRENNMETHODEN
.
18
4.3.
GASCHROMATOGRAPHISCHE
TRENNMETHODE
.
24
5.
SYNTHESE
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
SUBSTRATEN
.25
5.1.
SYNTHESE
VON
14
C-MEVALONSAEURE-5-PHOSPHAT
UND
14
C-MEVALONSAEURE-5-PYROPHOSPHAT
.
25
5.2.
SYNTHESE
VON
14
C-DIHYDROXYACETONPHOSPHAT
.
25
5.3.
SYNTHESE
VON
L4
C-FRUCTOSE-6-PHOSPHAT
UND
14
C-FRUCTOSE-L,6-BISPHOSPHAT
.
26
5.4.
SYNTHESE
VON
14
C-GLYCERINALDEHYD-3-PHOSPHAT
UND
14
C-DIHYDROXYACETONPHOSPHAT
.
27
6.
ENZYMATISCHE
TESTS.27
HI.
ERGEBNISSE.
39
1.
IPP-BILDUNG
UNTER
VERWENDUNG
VON
SUBSTRATEN
DES
ACETOACETAT-BIOSYNTHESEWEGES.
39
1.1.
ENZYMATISCHE
BILDUNG
VON
14
C-MEVALONSAEURE
AUS
14
C-ACETYL-COA
BZW.
14
C-HYDROXYMETHYLGLUTARYL-COA
.
40
1.2.
ENZYMATISCHE
BILDUNG
VON
14
C-IPP
AUS
14
C-MEVALONSAEURE,
L4
C-MEVALONSAEURE-5-PHOSPHAT
UND
14
C-MEVALONSAEURE-5-PYROPHOSPHAT
.
45
2.
ISOPRENOID-BIIDUNG
AUS
ISOPENTENYLPYROPHOSPHAT
(IPP)
.
52
2.1.
ISOPRENOIDBILDUNG
AUS
IPP
+
DIMETHYLALLYLPYROPHOSPHAT
DURCH
LYOPHILISIERTE
E.
COLI
FMJ39-ZELLEN
UNTER
SCHIEDLICHER
WACHSTUMSPHASEN
.
52
2.2.
VERGLEICH
DER
UMSAETZE
VON
IPP
+
DIMETHYLALLYL
PYROPHOSPHAT
BEI
E.
COLI
FMJ39
UND
Z.
MOBILIS
.
55
2.3.
IPP-BILDUNG
DURCH
GEFRORENE
E.
COLI
FMJ39
UND
Z.
MOBILIS-ZCUEEN
.
57
2.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BILDUNG
VON
IPP
AUS
DEN
ISOPRENALKOHOLEN
BZW.
AUS
ISOPENTENYLPHOSPHAT
.
59
3.
IN
VITRO
VERSUCHE
ZUR
ISOPRENOIDBILDUNG
AUS
VERSCHIEDENEN
METABOLITEN
.
60
3.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BILDUNG
VON
ISOPRENOIDEN
AUS
VERSCHIEDENEN
C
3
-VERBINDUNGEN
DURCH
E.
COLI
FMJ39-BZW.
Z.
MOBILIS-ROHEXTRAKTE
.
60
3.2.
ENZYMTESTS
MIT
ROHEXTRAKTEN
VON
E.
COLI
FMJ39
SOWIE
VON
Z.
MOBILIS
UND
33
P-ATP
.
62
3.3.
DEHYDRATISIERUNG
VON
GLYCERIN-3-PHOSPHAT
BZW.
GLYCERIN
.
63
3.4.
ENZYMTESTS
MIT
CHEMISCH
SYNTHETISIERTEN
ALKOHOLEN,
33
P-ATP
UND
ROHEXTRAKTEN
VON
E.
COLI
FMJ39
SOWIE
VON
Z.
MOBILIS
.
64
3.5.
C
3
-STOFIWECHSEL
BEI
Z.
MOBILIS
.
66
3.5.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DER
VON
VIIKARI
UND
KORHOLA
(1986)
POSTULIERTEN
ENZYMATISCHEN
BILDUNG
VON
GLYCERIN,
DIHYDROXYACETON
UND
GLYCERIN-3-PHOSPHAT
.
67
3.5.2.
NACHWEIS
EINER
NEUEN REAKTIONSSEQUENZ
FUER
DIE
BILDUNG
VON
GLYCERIN
UND
GLYCERIN-3-PHOSPHAT
.
68
IV.
DISKUSSION
_
77
V.
ZUSAMMENFASSUNG
_
89
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
90 |
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