Immunmagnetische Zellseparation zur Produktion monoklonaler Antikörper gegen s-Triazine:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
I
EINLEITUNG
.
1
H
MATERIAL
UND
METHODEN
.
10
1
REAGENZIEN
.
10
2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
MAGNETPARTIKEL
.
11
3
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
IMMUNOLOGISCHE
NACHWEISVERFAHREN
.
11
4
ZELLKULTURREAGENZIEN
UND
MEDIEN
.
13
5
VERBRAUCHSMATERIAL
.
15
6
GERAETE
.
15
7
IMMUNISIERUNG
.
16
7.1
IMMUNKONJUGATSYNTHESE
.
17
7.2
PROTEINKONZENTRATION
DES
IMMUNKONJUGATS
.
18
7.3
BESTIMMUNG
DER
HAPTEN-KOPPLUNGSRATE
.
19
7.4
IMMUNISIERUNGSVERLAUF
.
19
8
SOMATISCHE
FUSION
MURINER
MYELOMZELLEN
MIT
MILZZELLEN
.
20
8.1
ISOLIERUNG
UND
VORBEREITUNG
DER
MILZZELLEN
.
20
8.2
VORBEREITUNG
DER
MYELOMZELLEN
.
20
8.3
FUSION
.
21
9
HAT-SELEKTION
.
21
10
IMMUNMAGNETISCHE
ZELLSEPARATION
.
22
10.1
SYNTHESE
DER
SEPARATIONSKONJUGATE
.
22
10.1.1
KOPPLUNG
NACH
DER
CARBODIIMID-METHODE
.
23
10.1.2
KOPPLUNG
UEBER
REAKTIVE
CHLORGRUPPEN
.
24
10.2
BESCHICHTUNG
DER
MAGNETPARTIKEL
.
24
10.2.1
BESCHICHTUNG
DER
MAGNETPARTIKEL
MIT
SEPARATIONSKONJUGATEN
.
25
10.2.2
QUANTIFIZIERUNG
DER
GEKOPPELTEN
SEPARATIONSKONJUGATE
.
27
10.2.3
BESCHICHTUNG
DER
MAGNETPARTIKEL
MIT
SEPARATIONSDERIVATEN
.
28
10.2.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
GEKOPPELTEN
SEPARATIONSDERIVATE
.
29
10.2.5
FUNKTIONSFAEHIGKEIT
DER
BESCHICHTETEN
MAGNETPARTIKEL
.
29
10.3
IMMUNMAGNETISCHE
SEPARATION
.
30
11
SCREENING
MIT
ELISA
.
?
.
32
12
KLONIERUNG
UND
EXPANSION
.
./.
.
32
13
LAGERUNG
DER
ZELLEN
.
33
14
IMMUNOLOGISCHE
NACHWEISVERFAHREN
.
33
14.1
KLASSEN
UND
SUBLASSENTYPISIERUNG
.
33
14.2
HETEROGENER,
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNASSAY
MIT
IMMOBILISIERTEN
ANTIKOERPERN
.
35
14.2.1
TRACER
.
37
14.2.2
DURCHFUEHRUNG
DES
ELISA
.
38
14.2.3
AUSWERTUNG
DES
ELISA
.
39
14.2.4
SPEZIFITAET
.
41
14.3
SANDWICH-ELISA
.
41
14.4
ELISPOT
.
43
14.5
IMMUNFLUORESZENZ-NACHWEIS
VON
MEMBRANSTAENDIGEN
IMMUNGLOBULINEN
.
45
HI
ERGEBNISSE
.
46
1
PRINZIP
DER
IMMUNMAGNETISCHEN
ZELLSEPARATION
.
46
2
BESCHICHTUNG
DER
MAGNETPARTIKEL
.
49
3
OPTIMIERUNG
DER
MAGNETSEPARATION
.
51
3.1
WASCHEN
VOR
DER
INKUBATION
.
51
3.2
ANZAHL
DER
SEPARATIONEN
.
53
3.3
ZELLKONZENTRATION
.
54
3.4
BLOCKIERUNG
UNSPEZIFISCHER
BINDUNGSPLAETZE
.
56
3.5
MAGNETPARTIKELKONZENTRATION
.
58
3.6
SEPARATIONSVOLUMEN
.
61
3.7
INKUBATIONSTEMPERATUR
UND
INKUBATIONSDAUER
.
63
3.8
PRAESENTATION
DER
HAPTENE
AUF
DER
PARTIKELOBERFLAECHE
.
70
3.9
STRUKTUR
DES
SEPARATIONSKONJUGATS
.
72
3.10
SPEZIFITAET
.
73
3.11
ENTFERNEN
DER
MAGNETPARTIKEL
.
74
4
MODELLSEPARATIONEN
.
76
4.1
ELISPOT
.
76
4.2
MODELLSEPARATIONEN
MIT
ZELLMISCHUNGEN
.
78
5
SEPARATION
VON
HYBRIDOMEN
UND
LYMPHOZYTEN
.
82
5.1
IMMUNKONJUGAT
T.BUT-CL-C6-KLH
.
82
5.1.1
IMMUNISIERUNG
UND
ZELLFUSION
.
82
5.1.2
SCREENING
MIT
IMMUNMAGNETISCHER
ZELLSEPARATION
.
83
5.1.3
SEPARIERTE
KLONE
.
85
5.1.4
SCREENING
MIT
ELISA
.
87
5.2
IMMUNKONJUGAT
ET-CL-C6-KLH
.
89
5.2.1
IMMUNMAGNETISCHE
ZELLSEPARATION
.
89
5.2.2
SEPARIERTE
KLONE
.
91
5.3
IMMUNKONJUGAT
ET-CL-C6-BSA
.
97
5.3.1
IMMUNMAGNETISCHE
ZELLSEPARATION
.
97
5.3.2
SEPARIERTE
KLONE
.
98
5.4
IMMUNKONJUGAT
IPR-CL-BSA
.
101
5.4.1
SEPARATION
VOR
DER
ZELLFUSION
.
101
5.4.2
SEPARATION
NACH
DER
FUSION
.
104
5.4.3
SEPARIERTE
KLONE
.
104
6
IMMUNFLUORESZENZMARKIERUNG
MEMBRANSTAENDIGER
ANTIKOERPER
.
109
IV
DISKUSSION
.
113
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
136
VI
LITERATUR
.
139 |
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