Menschliche Immunglobulingene vom kappa-Typ: Untersuchung des kappa-Locus verschiedener Primaten unter besonderer Berücksichtigung evolutionsspezifischer Aspekte
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
.
1
2.
ERGEBNISSE
.
7
2.1
VERSUCH
DER
EXTENSION
BEREITS
BEKANNTER
UND
CLONIERTER
BEREICHE
DES
MENSCHLICHEN
V
K
-LOCUS
UND
LOKALISATION
NOCH
NICHT
ZUGEORDNETER
V
K
-GENSEGMENTE
IM
ERWEITERTEN
BEREICH
.
7
2.1.1
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
VERSUCHSPARAMETER
AUF
DAS
DNA-
LAUFVERHALTEN
BEI
DER
PULSFELDGELELEKTROPHORESE
(PFGE)
.
7
2.1.2
DIE
VERSUCHSERGEBNISSE
VERHINDERTEN
DAS
AUFFINDEN
WEITERER
V
K-GENSEGMENTE
IN
DEN
DEN
V
K-LOCUS
ANGRENZENDEN
REGIONEN
.
9
2.1.2.1
AUSWAHLKRITERIEN
UND
EINTEILUNG
DER
VERWENDETEN
RESTRIKTIONS
NUCLEASEN
.
9
2.1.2.2
GROESSENBESTIMMUNG
DER
ERHALTENEN
FRAGMENTE,
DIE
DEN
CLONIERTEN
BEREICH
ERWEITERN
.
12
2.1.2.3
UNTERSUCHUNG
DER
FRAGMENTE,
DIE
DEN
CLONIERTEN
BEREICH
RICHTUNG
ZENTRALE
LUECKE
ERWEITERN
AUF
EVENTUELL
VORHANDENE
WEITERE
V
K
-GENSEGMENTE
.
13
2.1.2.4
UNTERSUCHUNG
DER
FRAGMENTE,
DIE
DEN
CLONIERTEN
BEREICH
RICH
TUNG
TELOMER
ERWEITERN
AUF
MOEGLICHE
WEITERE
V
K
-GENSEGMENTE
.
15
2.1.3
KARTIERUNG
DES
V
K-LOCUS
MIT
SNABI
.
16
2.2
UNTERSUCHUNG
DER
V
K
-LOCI
DER
VERSCHIEDENEN
MENSCHENAFFEN
SOWIE
DES
RHESUSAFFEN,
DES
KRALLENAFFEN
UND
DES
BUSCHBABYS
.
19
2.2.1
PFGE-RESTRIKTIONSKARTIERUNG
DER
V
K
-LOCI
DES
SCHIMPANSEN,
DES
GORILLAS
UND
DES
ORANG-UTANS
.
19
2.2.2
UNTERSUCHUNG
DES
V
K
-LOCUS
DES
SCHIMPANSEN
AUF
EINE
MOEGLICHE
DUPLIZIERUNG
.33
2.2.2.1
UNTERSUCHUNG
DES
V
K
-LOCUS
DES
SCHIMPANSEN
AUF
DUPLIKATIONSDIFFERENZIERENDE
POLYMORPHISMEN
(DDP'S)
ERGIBT
KEINEN
HINWEIS
AUF
EINE
DUPLIZIERUNG
.
33
2.2.2.2
PFGE-KARTIERUNGEN
DER
V
K
-LOCI
DER
MENSCHENAFFEN
ERGABEN
KEINE
HINWEISE
AUF
EINE
DUPLIZIERUNG
.
36
2.2.2.3
QUANTIFIZIERUNG
DER
KOPIENZAHL
DES
V
K
-LOCUS
DES
SCHIMPANSEN
.
36
2.2.2.4
HYBRIDISIERUNG
MIT
M41-7,
EINER
DIE
VKLLL-GENFAMILIE
ERKENNENDEN
SONDE
.38
2.2.2.5
HYBRIDISIERUNGSVERSUCHE
MIT
EINER
IN
DER
DNA
DES
MENSCHEN
SPEZIELL
DIE
DISTALE
KOPIE
ERKENNENDEN
SONDE
(M656-1)
.
38
2.2.3
UNTERSUCHUNGEN
DER
V-GENSEGMENTE
ZEIGEN
EINE
HOHE
UEBEREIN
STIMMUNG
DER
V^-LOCI
DES
MENSCHEN
UND
DER
MENSCHENAFFEN
.
39
2.2.4
NACHWEIS
TRANSPONIERTER
GENSEGMENTE
IN
DER
DNA
DER
MENSCHENAFFEN
.
42
2.2.4.1
HYBRIDISIERUNGEN
MIT
M218-22
DEUTEN
DARAUFHIN,
DASS
SCHON
IN
DER
DNA
DER
MENSCHENAFFEN
GENSEGMENTE
TRANSPONIERT
VORLIEGEN.
42
2.2.4.2
DIE
W-REGION
LAESST
SICH
BEI
HALB-,
NEUWELT
UND
ALTWELTAFFEN
NACHWEISEN
.
45
2.2.4.3
DIE
V108-GENREGION
-
IN
DER
MENSCHLICHEN
DNA
AUF
DEN
LANGEN
ARM
DES
CHR.2
TRANSPONIERT
-
LIEGT
IN
DER
DNA
DES
GORILLAS
UND
DES
ORANG-UTANS
IN
DIREKTER
NAEHE
ZUR
O-REGION
DES
V
K
-LOCUS
.
48
2.2.5
DIE
ERKENNUNGSSEQUENZEN
FUER
DIE
B-GENSEGMENTSONDEN
SIND
WEIT
KONSERVIERT
.
52
2.2.6
SEQUENZVERGLEICHE
ZWEIER
GENSEGMENTE
DES
MENSCHEN
UND
DER
MENSCHENAFFEN
ERGEBEN
EINEN
UEBERBLICK
UEBER
DIE
VERAENDE
RUNGEN
DES
V
K-LOCUS
IM
VERLAUF
DER
MENSCHLICHEN
ENTWICKLUNG
.55
2.2.6.1
SEQUENZIERUNG
DER
V
K
TV
(B3)-GENSEGMENTE
.
55
2.2.6.2
SEQUENZIERUNG
DER
C
K
-GENSEGMENTE
.59
3
DISKUSSION
.
63
3.1
EINSATZ
DER
PULSFELDGELELEKTROPHORESE
ZUR NAEHEREN
CHARAKTERISIERUNG
DER
IM
MENSCHLICHEN
V
K
-LOCUS
AN
DEN
BEREITS
CLONIERTEN
BEREICH
ANGRENZENDEN
REGIONEN
.
63
3.2
ENTSCHEIDUNG
FUER
DIE
PFGE-TECHNIK
ZUR
UNTERSUCHUNG
DES
VERWANDTSCHAFTSGRADES
DER
V
K
-LOCI
DER
MENSCHENAFFEN
.
64
3.3
SCHWIERIGKEITEN,
DIE
DNA
DES
SCHIMPANSEN
VOLLSTAENDIG
ZU
SPALTEN,
FUEHRTEN
ZUR
OPTIMIERUNG
DES
SPALTPUFFERS
FUER
DIE
RESTRIKTIONSNUKLEASE
SFIL
.
66
3.4
EVOLUTION
DER
MENSCHENAFFEN
.
67
3.4.1
AUSSAGEN
UEBER
DEN
VERWANDTSCHAFTSGRAD
DER
PRIMATEN
AUFGRUND
VON
PFGE-KARTIERUNGEN
.
68
3.4.2
AUCH
DIE
MUSTER,
DIE
HYBRIDISIERUNGEN
MIT
DEN
SONDEN
FUER
DIE
V-GENSEGMENTE
ERGABEN,
VERANSCHAULICHEN
DIE
UEBEREINSTIMMUNG
IM
AUFBAU
DER
V
K
-LOCI
DES
MENSCHEN
UND
DES
SCHIMPANSEN
.
71
3.5
DER
V
K
-LOCUS
IN
DER
DNA
DES
SCHIMPANSEN,
DES
GORILLAS
UND
DES
ORANG-UTANS
IST
NICHT
DUPLIZIERT
.
72
3.5.1
DIE
UNTERSUCHUNG
DER
V
K
-LOCI
DER
MENSCHENAFFEN
AUF
DUPLIKATIONSDIFFERENZIERENDE
POLYMORPHISMEN
(DDPS)
ERGIBT
KEIN
ANZEICHEN
EINER
DUPLIKATION
.
73
3.6
DER
V
K
-LOCUS
DES
SCHIMPANSE
-
DER
VORLAEUFER
DES
NICHT
DUPLIZIERTEN
MENSCHLICHEN
V
K
-LOCUS?
.
75
3.7
TRANSPONIERTE
V
K
-GENSEGMENTE
.77
3.7.1.
DIE
TRANSPOSITION
UND
DIE
AMPLIFIKATION
DER
W-REGION
IM
LAUFE
DER
MENSCHLICHEN
ENTWICKLUNG
SIND
KOMPLEXE
EREIGNISSE
.78
3.7.2
DIE
V108-REGION
-
IN
DER
MENSCHLICHEN
DNA
AUF
DEN
LANGEN
ARM
DES
CHR.2
TRANSPONIERT
-
LIEGT
IN
DER
DNA
DES
ORANG-UTANS
UND
DER
DES
GORILLAS
WAHRSCHEINLICH
IN
DIREKTER
NAEHE
DER
O-REGION
DES
V
K
-LOCUS
.
80
3.8
SEQUENZVERGLEICH
DES
V
K
IV-GENSEGMENTES
UND
DES
C
K
-
GENSEGMENTES
ZWISCHEN
MENSCH
UND
VERSCHIEDENEN
MENSCHENAFFEN
.82
3.8.1
UNTERSUCHUNG
DER
C
K
-DOMAENE
.
83
3.8.2
KONSERVIERTE
BEREICHE
IN
DER
V
K
IV-DOMAENE
.
86
3.9
KURZE
UEBERSICHT
UEBER
DIE
BISHER
BEKANNTEN
DATEN
DER
UNTERSUCHTEN
PRIMATEN
.87
4
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
91
4.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
91
4.1.1
CHEMIKALIEN
.
91
4.1.2
ENZYME
.
92
4.2
DNAS,
BAKTERIENSTAEMME
UND
HEFESTAEMME
.
92
4.3
ZEITKULTUR
.
94
4.4
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
94
4.4.1
TRYPSINISIERUNG
DER
PC-3
UND
DER
PRIMAERZELLINIENZELLEN
.
94
4.4.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
FUER
KONVENTIONELLE
GELELEKTROPHORESE
.
95
4.4.2.1
ISOLIERUNG
AUS
PC-3
ODER
PRIMAERKULTURZELLEN
(FIBROBLASTEN)
.
95
4.4.2.2
ISOLIERUNG
AUS
BLUTZELLINIEN
.95
4.4.2.3
ISOLIERUNG
AUS
MAEUSELEBER
.
95
4.4.3
ISOLIERUNG
VON
DNA
FUER
DIE
PULSFELDGELELEKTROPHORESE
.
96
4.4.3.1
ISOLIERUNG
AUS
BLUT
.
96
4.4.3.2
ISOLIERUNG
AUS
PC-3
UND
PRIMAERKULTURZELLEN
.
96
4.4.3.3
ISOLIERUNG
AUS
BLUTZELLINLEN
.
96
4.4.4
ISOLIERUNG
VON
COSMID
UND
PLASMID-DNA
.
96
4.4.5
DNA-AMPLIFIKATION
UEBER
"POLYMERASE
CHAIN
REACTION"
.
97
4.4.5.1
AMPLIFIKATION
VON
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
.
97
4.4.5.2
AMPLIFIKATION
DER
B3
UND
DER
C^-GENSEGMENTE
.
98
4.5
PRAEPARATION
VON
DNA-LAENGENSTANDARDS
ZUR
GROESSENBESTIMMUNG
VON
RESTRIKTIONSFRAGMENTEN
.
98
4.5.1
LAMBDA-DNA-MULTIMERE
(PULSFELDGELELEKTROPHORESE)
.
98
4.5.2
MARKER
AUS
DER
HEFE
CANDIDA
ALBICANS
(CBS
5982)
.
98
4.6
DNA-SPALTUNG
MIT
RESTRIKTIONSNUKLEASEN
.
99
4.6.1
SPALTUNG
VON
DNA
IN
LOESUNG
.
99
4.6.2
SPALTUNGEN
VON
DNA
IN
AGAROSEBLOECKCHEN
(FUER
ALLE
RESTRIKTIONSNUCLEASEN
AUSSER
SFIL)
.
99
4.6.3
SPALTUNGEN
VON
DNA
IN
AGAROSEBLOECKCHEN
MIT
SFIL
.
100
4.6.4
SFIL-PARTIALSPALTUNGEN
VON
DNA
IN
AGAROSE
.
100
4.6.5
DOPPELSPALTUNGEN
BEI
DNA
IN
AGAROSEBLOECKCHEN
.
101
4.7
GELELEKTROPHORESE
.
101
4.7.1
KONVENTIONELLE
GELELEKTROPHORESE
.
101
4.7.2
PULSFELDGELELEKTROPHORESE
.
102
4.8
DNA-TRANSFER
AUF
NYLONMEMBRANEN
UND
HYBRIDISIERUNGEN
.
103
4.9
HYBRIDISIEREN
.
104
4.10
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
DNA
.
104
4.11
ISOLATION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
104
4.12
KLONIERUNG
.
104
4.13
SEQUENZIERUNG
.105
4.14
BIOLOGISCHE
SICHERHEIT
.105
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
107
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
111
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
119
ANHANG |
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