Immunologische und genregulatorische Eigenschaften von Epstein-Barr-Virus-Genprodukten des lytischen Zyklus:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
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| Beschreibung: | München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 144 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
.
8
ZUSAMMENFASSUNG
.
10
A.
EINLEITUNG
.
12
A.
1.
KLASSIFIZIERUNG
UND
ENTDECKUNGSGESCHICHTE
DES
EBV
.
12
A.
1.
1.
DIE
FAMILIE
DER
HETPESVIREN
.
12
A.
1.2.
ENTDECKUNGSGESCHICHTE
DES
EBV
.
13
A.
2.
VIRUS
UND
GENOM-STRUKTUR
DES
EBV
.
13
A.
2.
1.
STRUKTUR
DES
VIRIONS.
13
A.
2.
2.
STRUKTUR
DES
EBV-GENOMS
.
14
A.
3.
STADIEN
DER
INFEKTION
DURCH
EBV
.
15
A.
3.
1.
INFEKTION
DES
WIRTS
UND
ZELL-ADSORPTION
.
15
A.
3.
2.
PENETRATION
UND
UNCOATING.
15
A.
3.
3.
ZUSAMMMENBAU
UND
FREISETZUNG
VON
VIRUSPARTIKELN
.
16
A.
3.
4.
ETABLIERUNG
DER
LATENZ
.
16
A.
3.
5.
IMMORTALISIERUNG
UND
TRANSFORMATION
.
18
A.
3.
6.
LYTISCHE
INFEKTION
.
19
A.
4.
KLINISCHE
BILDER
UND
PATHOGENESE
EBV-ASSOZIIERTER
ERKRANKUNGEN
.
22
A.
4.
1.
INFEKTIOESE
MONONUKLEOSE.
22
A.
4.
2.
BURKITT-LYMPHOM
.
23
A.
4.
3.
NASOPHARYNX-KARZINOM
.
24
A.
4.
4.
HODGKIN-ERKRANKUNGEN
.
25
A.
4.
5.
ERKRANKUNGEN
IN
IMMUNDEFLZIENTEN
PERSONEN
.
26
A.
5.
IMMUNOLOGISCHE
KONTROLLE
DER
EBV-INFEKTION
.
27
A.
5.
1.
HUMORALE
IMMUNANTWORT.
.
27
A.
5.
2.
ZELLULAERE
IMMUNANTWORT
.
27
A.
5.3.
GESAMTBILD
DER
IMMUNOLOGISCHEN
UEBERWACHUNG
EINER
EBV-INFEKTION
.
30
A.
6.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
31
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
33
B.
1.
AUSGANGSMATERIAL
.
33
B.
1.1.
BAKTERIEN
UND
PLASMIDE
.
33
B.
1.2.
EUKARYOTISCHE
ZELLINIEN
UND
VIRUSSTAEMME
.
34
B.
1.3.
ANTIKOERPER
UND
SEREN
.
34
B.
1.4.
COMPUTEIPROGRANUNE
.
35
B.
2.
ARBEITEN
MIT
DNA
.
35
B.
2.
1.
PRAEPARATION
UND
REINIGUNG
VON
PLASMID-DNA
.
35
B.
2.
2.
SPALTEN
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
36
B.
2.
3.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
37
B.
2.
4.
ELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
37
B.
2.
5.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
38
B.
2.
6.
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.
COSS-KULTUREN
.
38
B.
2.7.
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
MIT
DNA-PLASMIDEN
.
39
B.
2.
8.
OLIGONUKLEOTIDSYNTHESE.
39
B.
2.
9.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
39
B.
2.10.
DNA-SEQUENZIERUNG.
40
B.
2.11.
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
.
41
B.
3.
ZELLKULTUR
.
42
B.
3.1.
ZELLEN
IN
SUSPENSIONSKULTUR
UND
ADHAERENT
WACHSENDE
ZELLEN
.
42
B.
3.2.
PRAEPARATION
HUMANER
HAUT-FIBROBLASTEN
.
42
B.
3.
3.
INDUKTION
VON
ENDOGENEM
EBV
.
43
B.
3.
4.
ARBEITEN
MIT
PERIPHEREN
BLUTLYMPHOZYTEN
.
43
B.
3.
5.
ETABLIERUNG
SPEZIFISCHER
ZYTOTOXISCHER
T-ZELLINIEN
UND
KLONE
.
44
B.
3.
6.
5I
CR-FREISETZUNGSTEST
.
44
B.
3.7.
TEST
AUF
ANTIKOERPER-VERMITTELTE
ZELLULAERE
ZYTOTOXIZITAET
.
45
B.
4.
TRANSFEKTION
EURKARYONTISCHER
ZELLEN
.
45
B.
4.
1.
CALCIUMPHOSPHAT-TRANSFEKTION
.
45
B.
4.2.
ELEKTROPORATION
.
46
B.
4.
3.
"TRANSFERRINFEKTION".
46
B.
5.
REKOMBINANTE
VACCINIA-VIREN
.
48
B.
5.1.
SELEKTION
VON
THYMIDINKINASE-POSITIVEN
WILDTYPVIREN
.
48
B.
5.
2.
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
VIREN
DURCH
INFEKTION/TRANSFEKTION
.
48
B.
5.
3.
SELEKTION
REKOMBINANTER
VIREN
.
49
B.
5.
4.
REINIGUNG
REKOMBINANTER
VIREN
DURCH
VEREINZELUNG
.
49
B.
5.
5.
BESTIMMUNG
DES
VIRUSTITERS
.
50
B.
5.
6.
ANREICHERUNG,
PRAEPARATION
UND
LAGERUNG
REKOMBINANTER
VACCINIA-VIREN.
50
B.
5.7.
INFEKTION
VON
IN
SUSPENSIONSKULTUR
UND
ADHAERENT
WACHSENDEN
ZELLEN
MIT
REKOMBINANTEN
VACCINIA-VIREN
.
51
B.
6.
PROTEINANALYSE
.
51
B.
6.
1.
HERSTELLUNG
VON
ZELLYSATEN
.
51
B.
6.
2.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE.
52
B.
6.
3.
WESTERN-BLOT
.
52
B.
6.4.
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
.
53
B.
6.
5.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
53
B.
7.
PROMOTORTEST
DURCH
CAT-ASSAY
.
54
C.
ERGEBNISSE
.
55
C.
1.
GENTECHNISCHE
HERSTELLUNG
VON
EBV-PROTEINEN
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
IN
EUKARYOTISCHEN
ZELLEN
.
55
C.
1.
1.
KLONIERUNGSARBEITEN
ZUR
HERSTELLUNG
DER
VACCINIA-TRANSFERVEKTOREN
.
55
C.
1.
2.
HERSTELLUNG
DER
REKOMBINANTEN
VACCINIA-VIREN
UND
NACHWEIS
DER
EXPRESSION
DER
FREMDGENE
.
60
C.
1.
3.
HERSTELLUNG
VON
PLASMIDVEKTOREN
FUER
DIE
TRANSIENTE
ODER
STABILE
GENTECHNISCHE
SYNTHESE
DER
TRANSAKTIVATOREN
DES
FRUEHEN
LYTISCHEN
ZYKLUS
.
61
C.
1.4.
TRANSFEKTION
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
IN
EUKARYOTISCHE
ZELLINIEN
DURCH
ELEKTROPORATION
.
68
C.
1.
5.
TRANSFEKTION
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
IN
EUKARYOTISCHE
ZELLINIEN
DURCH
"TRANSFERRINFEKTION
"
.
69
C.
2.
ERKENNUNG
DER
EBV-TRANSAKTIVATOREN
DES
FRUEHEN
LYTISCHEN
ZYKLUS
DURCH
SPEZIFISCHE
ZYTOTOXISCHE
T-ZELLEN
.
75
C.
2.
1.
EBV-IMMORTALISIERTE
B-ZELLINIEN
ALS
STIMULATORZELLEN
.
75
C.
2.2.
MIT
PEPTIDEN
BELADENE
LYMPHOBLASTEN
ALS
STIMULATORZELLEN
.
81
C.
3.
ERKENNUNG
SPAETER
EBV-GLYKOPROTEINE
DURCH
DEN
MECHANISMUS
DER
ANTIKOERPER
VERMITTELTEN
ZELLULAEREN
ZYTOTXIZITAET
.
85
C.
4.
EINFLUSS
VON
EBV-GENPRODUKTEN
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
AUF
DIE
KONZENTRATION
VON
MOLEKUELEN
DER
KLASSE
I
DES
HAUPT
HISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEXES
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
.
89
C.
5.
EINFLUSS
DER
EBV-TRANSAKTIVATOREN
DES
FRUEHEN
LYTISCHEN
ZYKLUS
AUF
DIE
VIRALE
GENEXPRESSION
.
96
C.
5.1.
INDUKTION
VON
ENDOGENEN
GENPRODUKTEN
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
DURCH
GENTECHNISCH
EXPRIMIERTE
TRANSAKTIVATOREN
IN
EBV-POSITIVEN
ZELLINIEN
.
96
C.
5.
2.
UNTERSCHIEDLICHE
AKTIVIERUNG
VON
IMMEDIATE
EARLY
UND
EARFY-GENEN
IN
BURKITT-LYMPHOM-ZELLEN
UND
LYMPHOBLASTOIDEN
ZELLINIEN
.
99
C.
5.
3.
AKTIVIERUNGSMUSTER
VON
IMMEDIATE
EARLY
UND
EARLY-GENEN
IN
EBV
INFIZIERTEN
SOMATISCHEN
HYBRIDZELLEN.
105
D.
DISKUSSION
.
109
D.
1.
UNTERSCHIEDLICHE
TECHNIKEN
DER
GENTECHNISCHEN
EXPRESSION
VON
EBV
TRANSAKTIVATOREN
.
109
D.
1.
1.
REKOMBINANTE
VACCINIA-VIREN
.
109
D.
1.
2.
TRANSFEKTION
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
DURCH
ELEKTROPORATION
.
110
D.
1.
3.
TRANSFEKTION
VON
EXPRESSIONSPLASMIDEN
DURCH
"TRANSFERRINFEKTION"
.
111
D.
2.
DIE
ZYTOTOXISCHE
T-ZELL-ANTWORT
GEGEN
TRANSAKTIVATOREN
DES
FRUEHEN
LYTISCHEN
ZYKLUS
.
113
D.
3.
DIE
ERKENNUNG
SPAETER
EBV-GLYKOPROTEINE
DURCH
DEN
MECHANISMUS
DER
ANTIKOERPER-VERMITTELTEN
ZELLULAEREN
ZYTOTXIZITAET
.
117
D.
4.
EINFLUSS
VON
EBV-GENPRODUKTEN
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
AUF
DIE
KONZENTRATION
VON
MOLEKUELEN
DER
KLASSE
I
DES
HAUPT
HISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEXES
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
.
119
D.
5.
UNTERSCHIEDLICHE
AKTIVIERUNG
ENDOGENER
GENPRODUKTE
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
DES
EBV
IN
BURKITT-LYMPHOM-ZELLEN
UND
LYMPHOBLASTIODEN
ZELLINIEN
.
120
D.
6.
AKTIVIERUNG
ENDOGENER
GENPRODUKTE
DES
LYTISCHEN
ZYKLUS
DES
EBV
IN
SOMATISCHEN
HYBRIDZELLEN
.
124
D.
7.
SCHLUSSBEMERKUNGEN
.
126
E.
ANHANG
.
128
E.
1.
SEQUENZEN
DER
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
PCR-KLONIERUNGEN
.
128
E.
2.
SEQUENZEN
DER
ZTA-OLIGOPEPTIDE
.
129
LITERATUR
.
130
VEROEFFENTLICHTE
ARBEITEN
.
142
DANKSAGUNG
.
143
LEBENSLAUF
.
144 |
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