Humane Papillomviren und Zellzyklusregulation: Zellzyklusregulation eines HPV18 Enhancer-Bindungsproteins
Gespeichert in:
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| Format: | Mikrofilm Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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| Beschreibung: | Berlin, Humboldt-Univ., Habil.-Schr., 1994 |
| Beschreibung: | 106 Bl. Ill., graph. Darst. |
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1
INHALTSVERZEICHNIS
VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN
ZUSAMMENFASSUNG
EINLEITUNG
10
1. EINFUEHRUNG
2. HUMANE PAPILLOMVIREN UND DIE ENTSTEHUNG
DES ZERVIXKARZINOMS
3. GENOMORGANISATION VON PAPILLOMVIREN
4. MECHANISMEN DER ZELLTRANSFORMATION DURCH
PAPILLOMVIREN
4
.
1
.
ZELLZYKLUSKONTROLLE IN EUKARYONTEN
4.2.
TUMOR
SUPPRESSORPROTEINE PRB UND P53 SIND
REGULATOREN DES ZELLZYKLUS
4.3. DAS E7-PROTEIN BINDET PRB
4.4. DAS E6-PROTEIN INAKTIVIERT P53
4.5. TUMORSUPPRESSOR GENE
RB UND P53 SIND NICHT
MUTIERT IN ZERVIXKARZINOMEN, DIE MIT HPV
ASSOZIIERT SIND
5. REGULATION DER EXPRESSION DER FRUEHEN GENE
VON HPV18
5.1 MECHANISMEN DER GENREGULATION
5.2 STRUKTUR UND FUNKTION DER HPV18
"UPSTREAM REGULATORY REGION" (URR)
6. FRAGESTELLUNG UND EXPERIMENTELLER AUFBAU
10
10
12
12
13
15
17
18
19
19
19
20
22
MATERIAL UND METHODEN
25
1
. GEWEBEKULTUR, SERUMENTZUG, SERUMSTIMULATION
2. HERSTELLUNG VON CYTOPLASMA- UND KERNEXTRAKTEN
3. ISOLIERUNG VON KLONIERTEN ENHANCER FRAGMENTEN
4. DNASEI FOOTPRINTING
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
5. OLIGONUKLEOTID SYNTHESE 26
6. "ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ANALYSIS" (EMSA)
EMS-ANALYSE
27
7. UV CROSSLINKING
27
8. SOUTHWESTERN ODER "BINDING SITE BLOTTING" (BSB) 27
9. IN VITRO TRANSKRIPTION UND TRANSLATION 28
10. DMS PROTEKTION (METHYLIERUNGSSCHUTZ) 28
11. PRAEPARATIVER GELSHIFT 29
12. CHROMATOGRAFIE AN HEPARIN-SEPHAROSE 29
13. WESTERN BLOTTING
29
14. ISOLIERUNG VON ZELLZYKLUSPOPULATIONEN
DURCH ELUTRIATION
29
15. BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTS DURCH FACS-ANALYSE 30
16. DEOXYCHOLAT (DOC) BEHANDLUNG VON KERNEXTRAKTEN 30
17. PRAEPARATION DES INHIBITORS 1-92 30
18. ISOLIERUNG VON CDNA KLONEN DURCH
"BINDING SITE SCREENING"
30
ERGEBNISSE
31
1. NACHWEIS VON HPV18 ENHANCER-BINDENDEN PROTEINEN 31
1.1 DARSTELLUNG VON DNARPROTEIN INTERAKTIONEN DURCH
DNASEI FOOTPRINTS 31
1.2 ANALYSE VON DNARPROTEIN INTERAKTIONEN DURCH
YYYYELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ANALYSIS" 33
1.3 NACHWEIS VON DNA-BINDENDEN PROTEINEN DURCH
"BINDING SITE BLOTTING" (BSB) 37
2. ANALYSE VON HPV18 ENHANCER-BINDENDEN PROTEINEN DURCH
"BINDING SITE BLOTTING" (BSB) 38
2.1 BESTIMMUNG EINER PLLO ERKENNUNGSSEQUENZ 40
2.2 BESTIMMUNG DER ERKENNUNGSSEQUENZ FUER P42/P40 42
2.3 BESTIMMUNG EINER ERKENNUNGSSEQUENZ FUER P92 42
3. VERGLEICH VON P92 MIT OKTAMER-BINDENDEN
PROTEINEN
44
3.1 EMS-ANALYSE VON OCT-1 MIT ENHANCER OLIGONUCLEOTIDEN 44
3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR BINDUNGSSPEZIFITAET VON P92 46
3
3.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR SEQUENZSPEZIFITAET DER P92
DNA-BINDUNG 47
3.4 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN P92 UND OCT-1 51
4. ZELLZYKLUSREGULATION VON P92 55
4.1.UNTERSUCHUNGEN ZUR ZELLZYKLUSREGULATION 55
4.1.1 REGULATION DER INTRAZELLULAEREN VERTEILUNG VON P92 55
4.1.2 IMMUNOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON P92 58
4.1.3 INTRAZELLULAERE LOKALISATION VON OCT-1 60
4.1.4 REGULATION DER INTRAZELLULAEREN P92 VERTEILUNG
DURCH SERUMFAKTOREN 6
4.2 REGULATION DER P92 DNA-BINDUNGSAKTIVITAET WAEHREND
DES ZELLZYKLUS
64
4.3 ZELLZYKLUSREGULATION VON P92 DURCH EINEN
NUKLEAEREN INHIBITOR
66
4.4 NACHWEIS DES INHIBITORS 1-92 DURCH
EMS-ANALYSE
70
4.5 VERSUCHE ZUR IDENTIFIZIERUNG VON P92 72
4.5.1 VERSUCH DER KLONIERUNG VON P92 CDNA 72
4.5.1 BIOCHEMISCHE REINIGUNG VON P92 73
DISKUSSION 74
LITERATURVERZEICHNIS 87
DANKSAGUNGEN |
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