Polymyxin-B-Nonapeptid-vermittelte Stimulation humaner polymorphnukleärer Granulozyten durch serumresistente Escherichia coli:
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1993
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I
NHALTSVERZEICHNIS
SEITE
13
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
14-36
1.
ISOLIERUNG
DER
POLYMORPHNUKLEAEREN
GRANULOZYTEN
14
-
17
1.1.
BLUTENTNAHME
14
1.2.
PERCOLL-DICHTEGRADIENT
14
-
16
1.3.
INKUBATION
DER
POLYMORPHNUKLEAEREN
GRANULOZYTEN
IN
NAEHRMEDIUM
16
-
17
1.4.
GRANULOZYTEN-ZAEHLUNG
17
2.
SEREN
17
-
18
2.1.
VOLLSERUM
17
2.2.
HITZEINAKTIVIERTES
HUMANES
SERUM
18
2.3.
KOMPLEMENTKOMPONENTE
C8-DEFIZIENTES
SERUM
(R8-SERUM)
18
2.4.
BENTONIT-ADSORBIERTES
R8-SERUM
18
3.
ANZUECHTUNG
UND
AUFBEREITUNG
VON
E.COLI
19
-
20
3.1.
BESTIMMUNG
DER
COLONY-FORMING-UNITS
(CPU)
20
4.
OPT
IMIERUNGSVERSUCHE
20
-
22
4.1.
OPTIMIERUNG
DER
E.COLI
C14
KONZENTRATION
21
4.2.
OPTIMIERUNG
DER
INKUBATIONSZEIT
21
4.3.
OPTIMIERUNG
DER
ZAHL
EINGESETZTER
POLYMORPHNUKLEAERER
GRANULOZYTEN
21
4.4.
OPTIMIERUNG
DER
SERUMKONZENTRATION
21
-
22
5.
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
22
-
26
5.1.
STANDARDISIERTER
VERSUCHSANSATZ
22
-
23
5.1.1.
METHODEN
ZUM
NACHWEIS
DER
PMN
INTEGRITAET
23
-
24
5.1.1.1.
AKTIVITAETSMESSUNG
DER
LAKTAT
DEHYDROGENASE
(
LDH
)
23
-
24
5.1.1.2.
TRYPANBLAU-TEST
24
5.2.
INDUKTION
MAXIMALER
GRANULOZYTAERER
LTBJ-BILDUNG
DURCH
A
2318
,
24
5.3.
EINFLUSS
VON
CYTOCHALASIN
B
AUF
DIE
GRANULOZYTAERE
LTB
4
-BILDUNG
24
-
25
5.4.
EINFLUSS
VON
LIPOPOLYSACCHARIDEN
(LPS)
AUF
DIE
GRANULOZYTAERE
LTB
4
-BILDUNG
25
5.5.
EINFLUSS
EINER
VORAUSGEHENDEN
OPSO
NIERUNG
DER
E.COLI
AUF
DIE
GRANULO
ZYTAERE
LTBJ-BILDUNG
26
6.
METHODIK
DER
HIGH-PRESSURE-LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(
HPLC
)
26
-
31
6.1.
AUFBAU
DER
HPLC-ANLAGE
26
-
27
6.2.
PRINZIP
DER
REVERSED-PHASE-HPLC
27
6.3.
DIE
FESTE
PHASE
27
-
28
6.4.
DIE
FLUESSIGE
PHASE
28
6.5.
PROBENAUFBEREITUNG
UEBER
VAC-ELUT
VORSAEULEN
28
-
29
6.6.
QUALITATIVER
LEUKOTRIEN-NACHWEIS
29
-
30
6.7.
QUANTITATIVER
LEUKOTRIEN-NACHWEIS
30
-
31
7.
PHAGOZYTOSE-ASSAY
31
-
36
7.1.
'
H-THYMIDIN
MARKIERUNG
VON
E.COLI
31
-
32
7.1.1.
'
H-THYMIDIN
MARKIERUNG
VOR
EINSATZ
DER
E.COLI
IM
PHAGOZYTOSE-ASSAY
31
7.1.2.
'
H-THYMIDIN
MARKIERUNG
DER
E.COLI
NACH
INKUBATION
MIT
PMN
32
7.2.
FILTERSYSTEM
32
-
33
7.3.
VERSUCHSAUFBAU
UND
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
33
-
35
7.3.1.
OPTIMIERTE
FILTERMETHODE
MIT
'
H
THYMIDIN
MARKIERUNG
DER
E.COLI
NACH
DER
PHAGOZYTOSE-INKUBATION
33
-
35
7.4.
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
LEBENDER
BAKTERIEN
DURCH
AUSPLATIEREN
36
7.5.
ANWENDUNG
DES
FILTER-PHAGOZYTOSE
ASSAYS
AUF
STAPHYLOCOCCUS
AUREUS,
STAMM
WOOD
46
36
37
-
75
1.
AUSSCHLUSS
EINES
STIMULATIVEN
EFFEKTES
VON
POLYMYXIN
B-NONAPEPTID
AUF
POLY
MORPHNUKLEAERE
GRANULOZYTEN
37
2.
OPTIMIERUNGSVERSUCHE
FUER
E.COLI
C14
38
-
41
2.1.
OPTIMIERUNG
DER
E.COLI-KONZENTRATION
38
2.2.
OPTIMIERUNG
DER
INKUBATIONSZEIT
38
-
39
2.3.
OPTIMIERUNG
DER
PMN-ANZAHL
PRO
PROBE
39
2.4.
2.5.
OPTIMIERUNG
DER
SERUMKONZENTRATION
FUER
E.COLI
C14
KEIMZAHLBESTIMMUNG
FUER
E.COLI
C14
40
40
-
41
3.
VORAUSSETZUNGEN
ZUR
STIMULATION
DER
PMN
DURCH
E.COLI
C14
41
-
65
3.1.
ABHAENGIGKEIT
DER
LTB
4
-BILDUNG
E.COLI
C14
STIMULIERTER
PMN
VON
POLYMYXIN
B
NONAPEPTID
(PMBN)
41
-
42
3.2.
ABHAENGIGKEIT
DER
LTB
4
-BILDUNG
E.COLI
C14
STIMULIERTER
PMN
VON
SERUM
42
-
46
3.3.
VORAUSGEHENDE
OPSONIERUNG
VON
E.COLI
C14
UND
DEREN
EINFLUSS
AUF
DIE
GRANULOZYTAERE
LTB
4
-BILDUNG
46
-
48
3.4.
PHAGOZYTOSE
VON
E.COLI
C14
DURCH
PMN
48
-
58
3.4.1.
VORVERSUCHE
ZUM
PHAGOZYTOSE-ASSAY
48
-
52
3.4.1.1.
KINETIK
DER
3
H-THYMIDIN
AUFNAHME
DURCH
E.COLI
C14
48
3.4.1.2.
3
H-THYMIDIN
AUFNAHME
DER
E.COLI
IN
AN
WESENHEIT
VON
SERUM
UND
POLYMYXIN
B
NONAPEPTID
49
-
50
3.4.1.3.
FILTER-PASSAGE
FUER
E.COLI
C14
50
-
51
3.4.1.4.
VORVERSUCHE
ZUM
EINSATZ
VON
SOLUEN
51
-
52
3.4.2.
SCHEMATISCHE
DARSTELLUNG
DES
FILTER-
PHAGOZYTOSE-ASSAYS
53
3.4.3.
AUSSAGEN
ANHAND
DER
GEMESSENEN
RADIO
AKTIVITAET
54
3.4.4.
PMBN-ABHAENGIGKEIT
VON
DER
PHAGOZYTOSE
UND
ADHAERENZ
FUER
E.COLI
C14
55
-
57
3.4.5.
VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
DES
FILTER-
PHAGOZYTOSE-ASSAYS
MIT
DEN
ERGEBNISSEN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
COLONY-FORMING
UNITS
(CFU)
58
3.5.
EINFLUSS
VON
CYTOCHALASIN
B
AUF
DIE
E.
COLI
C14
INDUZIERTE
LTB
4
-BILDUNG
DURCH
PMN
58
-
62
3.6.
TRYPANBLAU-TEST
UND
MESSUNG
DER
LDH
AKTIVITAET
ALS
PARAMETER
FUER
DIE
INTEGRITAET
DER
PMN-ZELLMEMBRAN
NACH
E.COLI-INKUBATION
62
-
63
3.7.
EINFLUSS
HOHER
E.COLI-KONZENTRATIONEN
AUF
DIE
LTB
4
-BILDUNG
DURCH
PMN
63
3.8.
VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
DES
FILTER
PHAGOZYTOSE-ASSAYS
MIT
DER
ANZAHL
COLONY-FORMING-UNITS
NACH
AUSPLATIEREN
FUER
E.COLI
C14
64
-
65
I.
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
4.5.
4.6.
4.7.
4.8.
4.8.1
VORAUSSETZUNGEN
ZUR
STIMULATION
DER
PMN
MIT
E.COLI
0-111
SMOOTH
OPTIMIERUNG
DER
SERUMKONZENTRATION
FUER
E.COLI
0-111
SMOOTH
KEIMZAHLBESTIMMUNG
FUER
E.COLI
0-111
SMOOTH
EINFLUSS
VON
SERUM
AUF
DIE
INDUKTION
DER
LTB
4
-BILDUNG
IN
PMN
DURCH
E.COLI
0-111
SMOOTH
EINFLUSS
VON
POLYMYXIN
B-NONAPEPTID
AUF
DIE
LTBJ-BILDUNG BEI
E.COLI
0-111
SMOOTH
STIMULIERTEN
PMN
PRAEINKUBATION
DER
E.COLI
0-111
SMOOTH
MIT
SERUM
UND
DEREN
EINFLUSS
AUF
DIE
GRANULOZYTAERE
LTB
4
-BILDUNG
STIMULATIONSVERSUCHE
MIT
ISOLIERTEM
LIPOPOLYSACCHARID
VON
E.COLI
0-111
SMOOTH
EINFLUSS
ZUNEHMENDER
E
.
COLI-KONZENTRA
TIONEN
AUF
DIE
GRANULOZYTAERE
LTB
4
-
BILDUNG
ERGEBNISSE
DER
FILTER-PHAGOZYTOSE
ASSAYS
MIT
E.COLI
0-111
SMOOTH
KINETIK
DER
3
H-THYMIDIN-AUFNAHME
FUER
E.COLI
0-111
SMOOTH
65
-
74
65
-
66
66
66
-
67
67
-
68
68
-
69
69
-
70
70
70
-
74
70
-
71
4.8.2.
VERHALTEN
DER
E.COLI
0-111
SMOOTH
IM
FILTER-PHAGOZYTOSE-ASSAY
71
-
73
4.8.3.
VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
DES
FILTER
PHAGOZYTOSE-ASSAYS
MIT
DER
ANZAHL
DER
COLONY-FORMING-UNITS
NACH
AUSPLATIEREN
FUER
E.COLI
0-111
SMOOTH
73
-
74
5.
TESTUNG
DES
GRAM-POSITIVEN
STAPHYLO-
COCCUS
AUREUS,
STAMM
WOOD
46,
IM
FILTER-PHAGOZYTOSE-ASSAY
74
-
75
P.
PISKPSSIQW
76
-
95
E.
ZUSAMMENFASSUNG
96
F.
LITERATURVERZEICHNIS
97
-
106 |
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