Die Scid-Mutation der Maus und deren Auswirkung auf DNA-Reparatur und DNA-Rekombination:
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1994
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INHALTVERZEICHNIS
SEITE
1. ZUSAMMENFASSUNG.1
2. EINLEITUNG.3
2.1. REKOMBINATION UND DIFFERENZIERUNG.3
2.1.1. KATEGORIEN GENETISCHER REKOMBINATION.3
2.1.2. REKOMBINATION BEI ZELLULAERER DIFFERENZIERUNG IN PROKARYOTEN.4
2.1.3. REKOMBINATION BEI ZELLULAERER DIFFERENZIERUNG EINZELLIGER
EUKARYOTEN.5
2.1.4. REKOMBINATION BEI ZELLULAERER DIFFERENZIERUNG IN VERTEBRATEN.6
2.1.4.1 V(D)J-REKOMBINATION.6
2.1.4.2. IMMUNGLOBULIN-KLASSENSPRUNG.9
1.1.4.3. GENKONVERSION.9
2.2. EVOLUTION DER V(D)]-REKOMBINATION.9
2.3. DIE BEDEUTUNG DER SCID-MUTATION.10
2.4. ZIELSETZUNG DER ARBEIT:.H
3. RESULTATE.^
3.1. NEUE REKOMBINATIONSSUBSTRATE.12
3.1.1. BESTIMMUNG VON V(D)J REKOMBINASEAKTIVITAET IN EINER TRANSIENTEN
ANALYSE IN PRAEB-ZELLEN.12
3.1.2. EIN VEKTOR FUER EINEN SCHNELLEN NACHWEIS VON
REKOMBINASEAKTIVITAET.13
3.1.3. REKOMBINATIONSSUBSTRATE IN FIBROBLASTEN.17
3.1.4. REKOMBINATION VON PNZP4 IN STABILEN TRANSFEKTANTEN.18
3.1.4.1.VARIANTE ZELLINIEN OHNE LACZ-POSITIVE ZELLEN BESITZEN EINE
INTAKTE KOPIE DES SUBSTRATES.19
3.1.4.3. SUBKLONE OHNE LACZ-POSITIVE KLONE BESITZEN
REKOMBINASEAKTIVITAET. 21
3.1.4.4. STABILITAET DER REKOMBINASEAKTIVITAET BEI LANGER KULTURDAUER.23
3.1.4.4. REKOMBINASEAKTIVITAET IN VARIANTEN MIT HOHEM UND NIEDRIGEM
ANTEIL AN LACZ-POSITIVEN ZELLEN.25
3.1.4.5. DER ANTEIL REARRANGIERTER, LACZ-POSITIVER ZELLEN IN DEN
SUBKLONEN IST NICHT KONSTANT.26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTVERZEICHNIS
SEITE
28
29
31
33
3. 2. DIE SCID-MUTATION UND DNA-REKOMBINATION.28
3. 2.1. DNA-REPARATUR IN SCID-ZELLINIEN.
3. 2.1.1. SCID-PRAEB-ZELLINIEN BESITZEN EINE ERHOEHTE SENSITIVITAT
GEGENUEBER ROENTGENSTRAHLEN.
3.2.1.2. SCID-FIBROBLASTEN BESITZEN EINE ERHOEHTE SENSITIVITAT GEGENUEBER
ROENTGENSTRAHLEN.
3.2.1.3. SCID-FIBROBLASTEN SIND BLEOMYCIN-SENSITIV.
3 2.2. INTEGRATION VON DNA-MOLEKUELEN.
3.2.2.1. FREQUENZ DER INTEGRATION EINES RESISTENZVEKTORS.
3
.
22
.
2
.
DER POSITIONSEFFEKT DES SCHNITTS BEI WILDTYP- UND SCID-ZELLEN.35
3 2.2.3. DER EFFEKT VON MEHR ANTIBIOTIKA WAEHREND DER SELEKTION.
3.2.2.4. DIE KOPIENZAHL IN DEN TRANSFEKTANTEN.
3.2.3. HOMOLOGE REKOMBINATION IN SCID-ZELLINIEN.^
3.2.3.1. VEKTOREN UND PRINZIP.YY.;;. _
3.2.3.3. HOMOLOGE REKOMBINATION IN SEID PRAEB-ZELLIMEN.
3
.
2
.
32
.
VERGLEICH DER LUCIFERASE- UND CAT-KINETIKEN IN ZELLINIEN.47
3.2.3.3. HOMOLOGE REKOMBINATION IN FIBROBLASTEN.^
3.2.4. KOMPLEMENTATION DER SCID-MUTATION.
3 2.4.1. EFFEKTIVITAET DER SELEKTION MITTELS ROENTGENSTRAHLEN.
3.2.4.2. SELEKTION FUER KOMPLEMENTATION UEBER BESTRAHLUNG.52
3.2.4.3. SELEKTION FUER DIE KOMPLEMENTATION UEBER BLEOMYCIN.YY.54
3.2.4.4. SELEKTION FUER DIE KOMPLEMENTATION UEBER V(D)J REKOMBINATION 55
3.2.4.4.1. TEST DES REKOMBINATIONSSUBSTRATES PRSV H288 IN DER PRAEB-
LINIE 33.1.1-.
3.2.4.4.2. TEST DES REKOMBINATIONSSUBSTRATES PRSV H288 UND DER
RAG-EXPRESSIONSVEKTOREN IN DER FIBROBLASTEN-LINIE LTK-.
YY
YY
3.2.4.4.3. STABILITAET DER REKOMBINASE IN RAG-TRANSFEKTANTEN VON LTK- 5Y
3.2.4.4.5. DAS REKOMBINATIONSSUBSTRAT IN SCID-FIBROBLASTEN.60
3.2.4.4.6. INTEGRATION DES REKOMBINATIONSSUBSTRATES PRSV H288 IN
G'PK-.
3.2.4.4.7. EXPRESSION DES UNREARRANGIERTEN HYGROMYCM-GENS.62
3.2.4.4.8. SELEKTION AUF REKOMBINATION VON PRSV H288 .
3.2.4.5. KOMPLEMENTATION MIT EINER CDNA-EXPRESSIONSBIBILIOTHEK
64
67
INHALTVERZEICHNIS
SEITE
4. DISKUSSION.69
4.1. V(D)J REKOMBINATIONSASSAY.69
4.1.1. REKOMBINATION DES STABIL INTEGRIERTEN SUBSTRATES.69
4.1.2. STABILITAET DER REKOMBINASEAKTIVITAET BEI LANGER KULTURDAUER.70
4.2. SEID MUTATION UND DNA-METABOLISMUS.72
4.2.1. BESTRAHLUNGS- UND BLEOMYCINSENSITIVITAET VON SCID-LINIEN.72
4.2.2. INTEGRATION VON DNA IN SCID-LINIEN.73
4.2.3. HOMOLOGE REKOMBINATION. 74
4.2.3.1. HOMOLOGE REKOMBINATION IN PRAEB-ZELLEN.74
4.2.3.2. HOMOLOGE REKOMBINATION IN FIBROBLASTEN.75
4.2.3.3. WELCHE ROLLE SPIELT HOMOLOGE REKOMBINATION BEI DER V(D)J-
REKOMBINATION. 76
4.2.3.4. DAS "HAIRPIN"-MODELL FUER VDJ-REKOMBINATION.78
4.2.3.5. DIE SCID-MUTATION IST "LEAKY": "LEAKY RECOMBINASE" ODER
REVERSION.79
4.2.4. KOMPLEMENTATION DER SCID-MUTATION.80
4.2.4.1. KOMPLEMENTATION DER BESTRAHLUNGSSENSITIVITAET.80
4.2.4.2. KOMPLEMENTATION DES V(D)J-REKOMBINATIONSDEFEKTS.81
5. MATERIAL UND METHODEN.83
6. LITERATURVERZEICHNIS
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