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Bibliographische Detailangaben
Hauptverfasser:	Newton, Clive R. (VerfasserIn), Graham, Alex (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	Heidelberg [u.a.] Spektrum, Akad. Verl. 1994
Schriftenreihe:	Labor im Fokus
Schlagworte:	Polymerase Chain Reaction Polymerase-Kettenreaktion
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Beschreibung:	Aus dem Engl. übers.
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adam_text	INHALT VORWORT DANKSAGUNG ABKUERZUNGEN 11 13 14 I. GRUNDREAKTION UND METHODEN 1. DIE POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 19 1.1 LITERATUR 25 2. GERAETE, REAGENTIEN UND HILFSMITTEL 27 2.1 GERAETE 27 2.2 WAHL DER ENZYME 30 2.2.1 7A^/AMPLITAQ-DNA-POLYMERASE 32 2.2.2 VENTYY-DNA-POLYMERASE 33 2.2.3 P/W-DNA-POLYMERASE 34 2.2.4 77U-DNA-POLYMERASE 34 2.2.5 ULTMAYY-DNA-POLYMERASE 35 2.3 WEITERE PCR-REAGENTIEN 35 2.3.1 DESOXYNUCLEOSIDTRIPHOSPHATE 35 2.3.2 PUFFER UND MGCH 36 2.3.3 HEMMSTOFFE UND BESCHLEUNIGER DER PCR 37 2.3.4 DNA-MATRIZE 39 2.4 PRIMER 40 2.4.1 KONSTRUKTION DER PRIMER 40 2.4.2 SCHMELZTEMPERATUR (T M) DER PRIMER 41 2.4.3 MARKIERUNG DER PRIMER 42 2.4.4 BERECHNUNG DER PRIMER-KONZENTRATION 43 2.5 HILFSMITTEL 44 2.6 LITERATUR 45 6 PCR 3. VERVIELFAELTIGUNG DES RICHTIGEN AMPLIKONS 47 3.1 NACHWEIS UND UNTERSUCHUNG VON AMPLIKONS 47 3.2 VERMEIDEN VON VERUNREINIGUNGEN 53 3.2.1 URACIL-V-GLYKOSYLASE 55 3.2.2 UV-STRAHLUNG 56 3.2.3 BEHANDLUNG MIT ENZYMEN 56 3.2.4 BEHANDLUNG MIT PSORALEN 56 3.3 SPEZIFITAET DER REAKTION 57 3.4 HEISSSTART (HOT START) 57 3.5 VERSCHACHTELTE PCR 59 3.6 LITERATUR 59 II. PCR-TECHNIKEN UND ANWENDUNGEN 4. KLONIERUNG VON PCR-PRODUKTEN 63 4.1 EINFUEHRUNG VON RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLEN 63 4.2 KLONIERUNG UEBER GLATTE ENDEN 64 4.3 T-A-VEKTOREN 65 4.4 BILDUNG VON RESTRIKTIONSHAELFTEN 65 4.5 KLONIEREN OHNE LIGATION (LIC) 66 4.6 KONSTRUKTION EINER CDNA-BANK MIT HILFE DER PCR 68 4.7 LITERATUR 70 5. ISOLIERUNG UND KONSTRUKTION VON DNA-KLONEN 71 5.1 PCR VON GENBANKEN 71 5.2 VERANKERTE PCR 72 5.2.1 RACE-PCR 72 5.2.2 LIGATIONSVERANKERTE PCR 75 5.3 RNA-(RT-)PCR 75 5.4 PCR MIT DEGENERIERTEN PRIMERN 77 5.5 LITERATUR 78 6. MODIFIKATION VON PCR-PRODUKTEN 81 6.1 EINBAU VON PROMOTOREN UND RIBOSOMENBINDUNGSSTELLEN 81 6.2 EINSATZ VON PRIMERN FUER DIE INSERTION ZUSAETZLICHER RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLEN 83 6.3 LITERATUR 84 INHALT 7 7. VERKNUEPFEN UEBERLAPPENDER PCR-PRODUKTE 85 7.1 BILDUNG NEUER GENKOMBINATIONEN AUS GENOMISCHER DNA 85 7.2 SYNTHETISCHE GENE 88 7.3 LITERATUR 89 8. PCR-MUTAGENESE 91 8.1 DELETION VON SEQUENZEN 91 8.2 BASENSUBSTITUTIONEN 92 8.3 INSERTIONSMUTAGENESE 97 8.4 LITERATUR 99 9. SEQUENZIERUNG VON PCR-PRODUKTEN 101 9.1 DIREKTE SEQUENZIERUNG 103 9.2 ASYMMETRISCHE PCR 105 9.3 SEQUENZIERUNG EINZELSTRAENGIGER DNA MIT DER EXONUCLEASE III VON LAMBDA 107 9.4 ZYKLISCHE SEQUENZIERUNG 107 9.5 DIREKTE SEQUENZIERUNG AN EINER FESTPHASE 109 9.6 GENAMPLIFIZIERUNG MIT ANSCHLIESSENDER SEQUENZIERUNG DER TRANSKRIPTE (GAWTS) 110 9.7 CHEMISCHE SEQUENZIERUNG 111 9.8 PCR FUER ARCHAEOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 112 9.9 LITERATUR 114 10. CHARAKTERISIERUNG UNBEKANNTER DNA-BEREICHE 117 10.1 VEKTORETTEN-PCR 117 10.2 INVERSE PCR 120 10.3 LITERATUR 122 11. NACHWEIS VON KRANKHEITSERREGERN 123 11.1 VIREN 124 11.1.1 MENSCHLICHE RETROVIREN 124 11.1.2 ANDERE KLINISCH RELEVANTE VIREN 126 11.2 BAKTERIEN 126 11.3 UNTERSUCHUNGEN AN ARCHIVIERTEN HISTOLOGISCHEN PRAEPARATEN 127 11.3.1 MIT HAEMATOXYLIN ODER EOSIN GEFAERBTE GEWEBE SCHNITTE 128 11.3.2 MIT FORMALIN FIXIERTES UND IN PARAFFIN EINGEBETTETES MATERIAL 128 11.3.3 ZELLABSTRICHE 129 8 PCR 11.4 INSITU-PCR 129 11.5 LITERATUR 131 12. CHARAKTERISIERUNG BEKANNTER MUTATIONEN 133 12.1 SYSTEM DER AMPLIFIZIERUNGSRESISTENTEN MUTATION (ARMS) 133 12.1.1 GRUNDPRINZIPIEN 133 12.1.2 ENTWURF VON PRIMERN FUER ARMS 135 12.2 HYBRIDISIERUNG ALLEISPEZIFISCHER OLIGONUCLEOTIDE AN FIXIERTE PCR-PRODUKTE IM DOT-BLOT 137 12.3 UMGEKEHRTER DOT-BLOT 138 12.4 RFLP ANALYSE 139 12.5 GENDIAGNOSTIK MIT MULTIPLEX-ANALYSEN 139 12.5.1 MULTIPLEX-PCR-ANALYSEN BEI DER DUCHENNE MUSKELDYSTROPHIE 140 12.5.2 MULTIPLEX-ARMS BEI CYSTISCHER FIBROSE 141 12.6 SPEZIELLE METHODEN 142 12.6.1 NACHWEIS VON MUTATIONEN DURCH EINFUEHREN EINER RESTRIKTIONSSCHNITTSTELLE 142 12.6.2 AMPLIFIZIERUNG MIT KOMPETITIVEN OLIGONUCLEOTID PRIMEM (COP) 143 12.6.3 MUTATIONSTEST DURCH PRIMERVERLAENGERUNG (PEST) 144 12.6.4 MUTATIONSNACHWEIS MIT HILFE DER 5' - 3'-EXO NUCLEASEAKTIVITAET DER TBG-DNA-POYMERASE 144 12.7 NACHWEIS VEREINZELTER ENTARTETER ZELLEN IM ANSCHLUSS AN EINE KREBSBEHANDLUNG 145 12.8 DIAGNOSTIK BEI DER IN VITRO-BEFRUCHTUNG 146 12.9 LITERATUR 146 13. CHARAKTERISIERUNG UNBEKANNTER MUTATIONEN 149 13.1 DENATURIERENDE GRADIENTENGELELEKTROPHORESE (DGGE) 149 13.1.1 PARALLELE DGGE 152 13.1.2 SENKRECHTE DGGE 152 13.2 UNTERSUCHUNG VON POLYMORPHISMEN IM EINZELSTRANG (SSCP) 154 13.3 CHEMISCHE SPALTUNG VON FEHLPAARUNGEN 157 13.4 LITERATUR 159 14. FINGERPRINT-ANALYSEN 161 14.1 ZUFAELLIG AMPLIFIZIERTE POLYMORPHE DNA (RAPD) 161 14.2 MIKROSATELLITEN 162 14.3 TYPISIERUNG VON HLA-ANTIGENEN DER KLASSE II 165 14.4 LITERATUR 167 INHALT 9 15. PCR-EINSATZ IM RAHMEN DER KARTIERUNG DES MENSCHLICHEN GENOMS 169 15.1 DURCHSUCHEN VON GENBANKEN UND KARTIERUNG DER ENDEN VON COSMIDEN UND KUENSTLICHEN HEFECHROMO SOMEN MIT DER PCR 169 15.2 ZUORDNUNG VON AMPLIKONS ZU DEN CHROMOSOMEN 170 15.3 ALU-PCR 171 15.4 TESTS AN TRANSGENEN TIEREN 172 15.5 AMPLIFIZIERUNG KLEINGESCHNITTENER CHROMOSOMEN 173 15.6 LITERATUR 174 16. QUANTITATIVE PCR 175 16.1 DNA 177 16.2 RNA 178 16.3 LITERATUR 179 ANHANG A: GLOSSAR 181 ANHANB B: BEZUGSQUELLEN 191 ANHANG C: WEITERFUEHRENDE LITERATUR 197 ANHANG D: PATENTRECHTE 199 INDEX 201
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