Einfluss des viralen Enhancers und des UV-A-Lichtes auf die Transkription des humanen Papillomvirus-8:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
I
I.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
H.
EINLEITUNG
.
3
M.
MATERIAL
.
10
1.
EUKARYONTE
ZELLEN
.
10
2.
BAKTERIEN
.
10
3.
NUKLEINSAEUREN
.
10
3.1.
SYNTHETISCH
HERGESTELLTE
OLIGONUKLEOTIDE
.
10
3.2.
REKOMBINANTE
PLASMIDE
.
12
3.3.
DNA-LAENGENSTANDARD
.
14
3.4.
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
.
14
4.
ENZYME
.
15
4.1.
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
15
4.2.
SONSTIGE
ENZYME
.
15
5.
FERTIGE
REAGENZIENSYSTEME
.
15
6.
REAGENZIEN
.
16
7.
MEDIEN
.
16
7.1.
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
16
7.2.
MEDIEN
FUER
DIE
BAKTERIENKULTUR
.
17
8.
ANTIKOERPER
.
19
IV.
METHODEN
.
20
1.
IN
VITRO
ZELLKULTUR
.
20
1.1.
MONOLAYERKULTUREN
.
20
II
1.2.
TRANSFEKTION
VON
EUKARYONTEN
ZELLEN
.
20
1.3.
TPA-BEHANDLUNG
VON
EUKARYONTEN
ZELLEN
.
20
1.4.
BESTRAHLUNG
EUKARYONTER
ZELLEN
MIT
UV-LICHT
.
21
1.5.
INKUBATION
EUKARYONTER
ZELLEN
MIT
H
3
O
2
.
21
2.
BAKTERIENKULTUR
.
22
2.1.
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
22
2.2.
BAKTERIENKULTUREN
FUER
PLASMIDISOLIERUNGEN
.
22
2.3.
INFEKTION
VON
BAKTERIEN
.
22
3.
DNA-METHODEN
.
22
3.1.
STANDARDMETHODEN
.
22
3.2.
PRAEPARATIVE
PLASMIDISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
BAKTERIEN
.
23
3.3.
FRAGMENTELUTION
AUS
AGAROSEGELEN
.
23
3.4.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
23
3.5.
IN
VITRO
MUTAGENESE
.
24
3.6.
SEQUENZIERUNG
.
24
3.7.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
25
4.
RNA-METHODEN
.
25
4.1.
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
EUKARYONTEN
ZELLEN
.
25
4.2.
RNASE-PROTEKTIONSANALYSE
.
25
5.
TRANSIENTE
EXPRESSIONSTESTS
.
26
5.1.
CAT-ELISA
UND
CAT-EXPRESSIONSTEST
.
26
5.2.
LUCIFERASE-EXPRESSIONSTEST
.
28
6.
PROTEINMETHODEN
.
28
INHALTSVERZEICHNIS
III
6.1.
KEMPROTEINEXTRAKTION
AUS
EUKARYONTEN
ZELLEN
.
28
6.2.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
30
6.3.
DNASEL-FOOTPRINT
.
30
6.4.
GEL-RETARDIERUNGS-EXPERIMENT
(BAND-SHIFT)
.
31
7.
COMPUTERGESTUETZTE
SEQUENZANALYSE
.
31
V.
ERGEBNISSE
.
32
A.
EINFLUSS
DES
VIRALEN
ENHANCERS
AUF
DIE
TRANSKRIPTION
VON
HPV8
.
32
1.
DAS
M33/AP1
ELEMENT
STELLT
EINEN
KONSTITUTIVEN
ENHANCER
DAR
.
32
2.
INTERAKTIONEN
DES
ENHANCERS
MIT
KEMPROTEINEN
.
33
3.
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
DES
M33/AP1
ELEMENTES
.
36
4.
STIMULIERUNG
DES
M33/AP1
ELEMENTES
DURCH
PHORBOL-ESTER
.
39
5.
BEDEUTUNG
DES
HUMANEN
ETS-1
FUER
DIE
ENHANCERAKTIVITAET
.
40
6.
AKTIVITAET
DES
ENHANCERS
IN
VERSCHIEDENEN
KERATINOZYTEN-LINIEN
.
42
B.
EINFLUSS
VON
UV-STRAHLUNG
AUF
DIE
TRANSKRIPTION
VON
HPV8
.
44
1.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
HPV8
PROMOTORAKTIVITAET
NACH
UV-BESTRAHLUNG
.
44
2.
EINENGUNG
EINES
DEN
UV-EFFEKT
VERMITTELNDEN
HPV8-SEQUENZELEMENTES
.
47
3.
EINFLUSS
VON
H
2
O
2
AUF
DIE
HPV8-PROMOTORAKTIVITAET
.
49
4.
INTERAKTION
DER
HPV8-NCR
MIT
KEMPROTEINEN
AUS
NICHT
BESTRAHLTEN
UND
UV-A
BESTRAHLTEN
ZELLEN
.
50
VI.
DISKUSSION
.
52
VH.
LITERATURVERZEICHNIS
.
59
V.M.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
77 |
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