Ein neues calciumbindendes Protein (CCBP-23) vom EF-Handtyp aus dem Abdominalmuskel von Flußkrebs (Orconectes limosus) und Hummer (Homarus americanus):
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1994
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1
INHALT
VERWENDETE ABKUERZUNGEN .III
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS EF-HAND-MODELL.3
1.2 EF-HANDPROTEINE BEI VERTEBRATEN.7
1.3 EF-HANDPROTEINE BEI WIRBELLOSEN.10
1.3.1 PROTOZOA, CNIDARIA, VENNES.10
1.3.2 MOLLUSCA, ECHINODERMATA, ACRANIA UND INSECTA.12
1.3.3 CRUSTACEA .13
1.4 PROBLEMSTELLUNG . 14
2 MATERIAL UND METHODEN.17
2.1 REINIGUNG VON CCBP-23.17
2.2 ELEKTROPHORETISCHE METHODEN.17
2.3 4^CA^+-OVERLAY .18
2.4 UV-SPEKTREN 18
2.5 GELFILTRATIONSANALYSE .18
2.6 DERIVATISIERUNG DER CYSTEINRESTE.19
2.7 ENZYMATISCHE SPALTUNGEN.19
2.7.1 TRYPSIN .19
2.7.2 ENDOPROTEINASE ASP-N.19
2.7.3 CHYMOTRYPSIN.19
2.7.4 ENDOPROTEINASE ARG-C.20
2.7.5 ENDOPROTEINASE-ASPN- UND -GLUC-SPALTUNG DES PEPTIDES C31 .20
2.8 UMKEHRPHASEN-HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (RP-HPLC).20
2.8.1 KONVENTIONELLE HPLC.20
2.8.2 MICROBORE-HPLC.20
2.9 PROTEINSEQUENZIERUNG MIT TANDEMMASSENSPEKTROSKOPIE.21
2.9.1 DIE SCHRITTE DER METHODE.21
2.9.2 FAB-MS (FAST ATOM BOMBARDMENT MASS SPECTROMETRY).22
2.9.3 CAD-SPEKTREN.24
2.9.3.1 THEORETISCHE GRUNDLAGEN.24
2.9.3.2 DURCHFUEHRUNG.28
2.10 ELEKTROSPRAY-LONISATIONS-MASSENSPEKTROSKOPIE (ESI-MS).28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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11
2.11 PEPTIDSEQUENZIERUNG MIT AUTOMATISIERTEM EDMANABHAU.29
2.12 AMINOSAEUREANALYSE .29
3 ERGEBNISSE 30
3.1 REINIGUNG VON CCBP-23.:.30
3.2 UV-SPEKTREN UND ELEKTROPHORETISCHE ANALYSE.32
3.3 NACHWEIS DER CA2 + -BINDUNG.34
3.4 ERMITTLUNG DER PRIMAERSTRUKTUR VON CCBP-23.36
3.4.1 ENZYMATISCHE SPALTUNG UND AUFTRENNUNG DER PEPTIDE.36
3.4.2 SEQUENZIERUNG DER SPALTPEPTIDE.42
3.4.3 GESAMTPROTEINSEQUENZ VON CCBP-23 AUS ORCONECTES LIMOSUS.47
3.4.4 ESI-MS-ANALYSE VON ORCONECTES-CCBP-23.49
3.4.5 VERGLEICH DER HOMARUS-PEPTIDSEQUENZEN MIT DER ORCONECTES-
CCBP-23-GESAMTSEQUENZ.51
3.4.6 DATENBANKVERGLEICH DER CCBP-23-SEQUENZ.52
4 DISKUSSION 54
4.1 REINIGUNG VON CCBP-23.54
4.2 UV-SPEKTREN, PL UND PARTIELLE DIMERISIERUNG.56
4.3 CA2+-BINDUNG .57
4.4 ERMITTLUNG DER AMINOSAEURESEQUENZ VON CCBP-23 .59
4.5 VERGLEICH VON CCBP-23 MIT CALCYPHOSIN.61
4.6 ANALYSE DER EF-HANDDOMAENEN VON CCBP-23.62
4.7 GESAMTSCHAU UND AUSBLICK.64
5 ZUSAMMENFASSUNG.66
6 LITERATUR
68 |
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