Entwicklung und Anwendung von Immunoassays in der Rückstandsanalytik von Atrazin: Untersuchung von Regenwasser, Oberflächenwasser und gebundenen Rückständen
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | V, 168 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALT
I
EINLEITUNG
.
1
II
MATERIAL
UND
METHODEN.
13
1
MATERIAL.
13
1.1
REAGENZIEN.
.
13
1.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN.
.
15
1.3
VERBRAUCHSMATERIAL
.
17
1.4
GERAETE.
.
17
1.5
SAMMELGEFAESSE
FUER
REGENWASSER.
.
18
1.5.1
FREILANDNIEDERSCHLAG
.
18
1.5.2
BESTANDSNIEDERSCHLAG
.
19
2
METHODEN.
.
21
2.1
PRODUKTION
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
ATRAZIN.
.
21
2.1.1
KONJUGATSYNTHESE
.
21
2.1.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
KONJUGATE.
.
23
2.1.3
IMMUNISIERUNG
UND
BLUTENTNAHME
.
24
2.1.4
SERUMGEWINNUNG
.
24
2.1.5
GEWINNUNG
DER
IMMUNGLOBULIN-FRAKTION.
.
25
2.2
HERSTELLUNG
DES
ENZYMTRACERS
.
27
2.3
DURCHFUEHRUNG
DES
KOMPETITIVEN
ENZYMIMMUNOASSAYS.
.
27
2.3.1
BERECHNUNG
DER
ATRAZINKONZENTRATIONEN.
.
30
2.3.2
BESTIMMUNG
DER
TESTEMPFINDLICHKEIT.
.
32
2.4
ZWEIDIMENSIONALE
TITERBESTIMMUNG
.
32
2.5
BESTIMMUNG
DER
KREUZREAKTIVITAETEN
.
33
2.6
BESTIMMUNG
DER
AFFINITAETSKONSTANTEN
.
34
2.7
PROBENNAHME.
.
36
2.7.1
NIEDERSCHLAGSPROBEN.
.
36
2.7.2
ERMITTLUNG
DER
NIEDERSCHLAGSMENGE.
.
38
2.7.3
OBERFLAECHEN-UND
QUELLWASSER.
.
38
2.8
BESTIMMUNG
VON
ATRAZIN
IN
WASSERPROBEN
MIT
HILFE
DES
ENZYMIMMUNOASSAYS.
.
40
2.9
ENTWICKLUNG
EINES
SCHNELLTESTS
ZUR
ATRAZINBESTIMMUNG
(IMMUNFILTRATION)
.
40
2.9.1
PRINZIP
UND
AUFBAU
DER
IMMUNFILTRATION.
.
40
2.9.2
OPTIMIERUNG
DER
IMMUNFILTRATION.
43
2.9.3
IMMUNFILTRATION
ZUR
BESTIMMUNG
VON
ATRAZIN
IN
UMWELTPROBEN.
.
45
2.10
UNTERSUCHUNG
VON
GEBUNDENEN
RUECKSTAENDEN
MIT
HILFE
NICHT-KOMPETITIVER,
DIREKTER
IMMUNOASSAYS
.
46
2.10.1
HERSTELLUNG
VON
MODELLBOEDEN.
.
48
2.10.2
KOPPLUNG
VON
ANTIKOERPERN
AN
PEROXIDASE
.
51
2.10.3
DURCHFUEHRUNG
DES
NICHT-KOMPETITIVEN,
DIREKTEN
ENZYMIMMUNOASSAYS.
.
54
2.10.4
DURCHFUEHRUNG
DES
NICHT-KOMPETITIVEN,
DIREKTEN
FLUORESZENZIMMUNOASSAY
S.
.
55
III
ERGEBNISSE.
.
57
1
ANTIKOERPER
GEGEN
ATRAZIN.
.
57
1.1
KONJUGATSYNTHESE.
.
57
1.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTISEREN.
.
58
1.3
REINIGUNG
DER
ANTISEREN
.
63
1.3.1
AMMONIUMSULFATFAELLUNG.
.
63
1.3.2
REINIGUNG
MIT
ABX.
.
64
2
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAY
MIT
ANTIKOERPER
S2.
64
2.1
EINFLUSS
VON
ANTIKOERPER
UND
ENZYMTRACERKONZENTRATION
AUF
DEN
TESTMITTELPUNKT
.
65
2.2
REPRODUZIERBARKEIT
DES
ASSAYS
.
67
2.3
MESSUNG
VON
WASSERPROBEN.
.
68
2.3.1
MATRIXEFFEKTE.
.
68
2.3.2
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
DER
PROBEN
AUF
DIE
ATRAZINBESTIMMUNG
.
71
2.3.3
REPRODUZIERBARKEIT
DER
PROBENMESSUNGEN
.
72
2.4
VERGLEICH
DES
ENZYMIMMUNOASSAYS
MIT
DER
GC.
.
74
3
ATRAZINBELASTUNGEN
DER
WASSERPROBEN
.
74
3.1
ATRAZINBELASTUNGEN
DES
REGENWASSERS.
.
74
3.2
ATRAZINEINTRAG
DURCH
NIEDERSCHLAEGE
.
83
3.3
ATRAZINBELASTUNGEN
VON
OBERFLAECHEN
UND
QUELLWASSER.
.
88
4
SCHNELLTEST
ZUR
ATRAZINBESTIMMUNG
(IMMUNFILTRATION)
.
92
4.1
VERGLEICH
VON
MEMBRANEN
.
92
4.2
VERGLEICH
VON
BLOCKIERMITTELN
.
94
4.3
VERGLEICH
VON
SUBSTRATEN
.
95
4.4
MATRIXEFFEKTE
.
96
4.5
AUSWERTUNG
.
96
4.6
PROBENMESSUNGEN
.
97
5
UNTERSUCHUNG
GEBUNDENER
RUECKSTAENDE
MIT
HILFE
NICHT-KOMPETITIVER,
DIREKTER
IMMUNOASSAYS.
.
99
5.1
AUSWAHL
DER
ANTIKOERPER.
.
99
5.2
HERSTELLUNG
VON
MODELLBOEDEN
.
101
5.3
UNTERSUCHUNG
DER
MODELLBOEDEN
MIT
HILFE
DES
NICHT-KOMPETITIVEN,
DIREKTEN
ENZYMIMMUNOASSAYS
.
102
5.3.1
UNTERSUCHUNG
VON
AMETRYN-AMINOHEXYLSEPHAROSE.
.
103
5.3.2
UNTERSUCHUNG
VON
ATRAZIN
UND
AMETRYNSULFOXID-XAD-HARZEN.
.
104
5.3.3
BLOCKIERUNGSVERSUCHE
.
104
5.3.4
EINFLUSS
DES
WASCHPUFFERS
AUF
DIE
UNSPEZIFISCHE
BINDUNG
.
106
5.3.5
UEBERPRUEFUNG
DER
UNSPEZIFISCHEN
BINDUNG
DER
FREIEN
PEROXIDASE.
.
106
5.4
UNTERSUCHUNG
DER
MODELLBOEDEN
MIT
HILFE
DES
NICHT-KOMPETITIVEN,
DIREKTEN
FLUORESZENZIMMUNOASSAYS
.
107
5.4.1
EICHREIHEN
DER
FLUORESZENZ-MARKIERTEN
FAB-FRAGMENTE.
.
108
5.4.2
UNTERSUCHUNG
VON
AMETRYN-AMINOHEXYLSEPHAROSE
.
108
IV
DISKUSSION.
.
111
1
ANTIKOERPERPRODUKTION.
.
111
2
KOMPETITIVER
ENZYMIMMUNOASSAY.
.
116
3
ATRAZINBELASTUNG
DER
WASSERPROBEN
.
119
4
IMMUNFILTRATION.
.
127
5
UNTERSUCHUNG
GEBUNDENER
RUECKSTAENDE
MIT
HILFE
NICHT-KOMPETITIVER
IMMUNOASSAYS.
.
129
6
AUSBLICK.
.
134
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
137
VI
LITERATUR.
.
140
VII
ANHANG
.
157 |
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