Untersuchungen zur Interaktion des Proteins BiP mit schweren Ketten von Immunglobulinen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
|
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| Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 142 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
A.
EINLEITUNG
1
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
1.
CHEMIKALIEN,
ENZYME,
ANTIKOERPER,
ANTISEREN
UND
HAPTENKONJUGATE
15
2.
KONSTRUKTION
REKOMBLNANTER
PLASMIDE
IN
VITRO
15
2.1.
ZUR
PLASMIDKONSTRUKTION
VERWENDETE
MATERIALIEN
UND
TECHNIKEN
15
2.1.1.
PLASMIDE
UND
SYNTHETISCHE
OLLGONUKLEOTLDE
16
2.1.2.
METHODEN
ZUR
ERZEUGUNG,
MODIFIZIERUNG
UND
VERKNUEPFUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
17
2.1.3.
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
DNA
FRAGMENTEN
17
2.2.
KONSTRUKTION
REKOMBLNANTER
IMMUNGLOBULINGENE
IM
EXPRESSIONSVEKTOR
PSV2GPT
18
2.2.1.
P
SV-V
NP
Y
C
H
38:
KODIERT
FUER
EINE
IG
H-KETTE
MIT
EINER
KONSTANTEN
DOMAENE
18
2.2.2.
PEV
H
C
H
1AY3:
KODIERT
FUER
EINE
IG
H-KETTE
MIT
DELETION
DER
C
H
1-DOMAENE
24
2.2.3.
PEV
H
(C
H
3)
2
Y3:
KODIERT
FUER
EINE
IG
H-KETTE
MIT
AUSTAUSCH
DER
C|-|1-DOMAENE
GEGEN
EINE
CH
3-DOMAENE
28
3.
UEBERPRUEFUNG
REKOMBLNANTER
PLASMIDE
DURCH
SEQUENZIERUNG
DOPPEL
STRAENGLGER
DNA
29
4.
KLONIERUNG,
NACHWEIS
UND
AMPLIFIKATION
REKOMBLNANTER
PLASMIDE
IN
BAKTERIEN
30
4.1.
BAKTERIENSTAEMME
UND
BAKTERIENKULTUR
4.2.
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
MIT
REKOMBLNANTER
DNA
4.3.
IDENTIFIZIERUNG
VON
TRANSFORMANDEN
DURCH
ANALYTISCHE
DNA
30
30
PRAEPARATION
30
4.4.
PRAEPARATIVE
REINIGUNG
VON
PLASMLD-DNA
31
5.
TRANSFEKTLON
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
MIT
REKOMBLNANTEN
PLASMIDEN
31
5.1.
ZELLINLEN
UND
ZELLKULTUR
31
5.2.
TRANSFEKTLON
VON
ZELLEN
UND
SELEKTION
STABIL
TRANSFLZLERTER
ZELLINLEN
32
6.
IMMUNFLUORESZENZANALYSEN
33
7.
BIOSYNTHETISCHE
MARKIERUNG
ZELLULAERER
PROTEINE
MIT
35
S-METHIONLN,
35
PULSE
CHASE-ANALYSEN
8.
PRAEPARATION
UND
ATP-BEHANDLUNG
VON
ZELLYSATEN
36
9.
REINIGUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
IMMUNPRAEZIPITATIONEN,
AFFLNLTAETSCHROMATO
37
GRAPHLE
UND
PROTEIN
A-SEPHAROSE-SAEULEN
10.
SDS-POLYACRYLAMLD-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
UND
WESTERNBLOT
39
TECHNLKEN
11.
ENZYMGEKOPPELTE
IMMUNOSORBENT-ANALYSE
(ELISA)
42
C.
ERGEBNISSE
43
1.
TRANSFEKTLON
REKOMBLNANTER
IMMUNGLOBULINGENE
43
2.
ANALYSE
VON
IG
H-KETTEN
MIT
NUR
EINER
KONSTANTEN
DOMAENE
(V-C
H
1
UND
44
V-C
H3)
2.1.
NACHWEIS
DER
BINDUNG
VON
V-C
H
1
UND
V-C
H
3
AN
BIP
44
3.
ANALYSE
VON
IG
H-KETTEN
MIT
DELETION
ODER
SUBSTITUTION
DER
C
H
1-DOMAENE
(C
H
14Y3
UND
C
H
3Y3)
IM
VERGLEICH
MIT
UNVERAENDERTEN
IG
H-KETTEN
(Y3WT)
49
3.1.
UNTERSUCHUNG
DER
IG
H-KETTEN
IN
ABWESENHEIT
VON
IG
L-KETTEN
49
3.1.1.
NACHWEIS
DER
BINDUNG
VON
Y3WT,
C
H
1AY3
UND
CH
3Y3
AN
BIP
49
3.1.2.
VERSUCH
DER
STABILISIERUNG
VON
KOMPLEXEN
ZWISCHEN
BIP
UND
IG
H-KETTEN
DURCH
TEMPERATURERNIEDRIGUNG
52
3.1.3.
VERWENDUNG
DES
REDUKTIONSMITTELS
DTT
ZUR
STABILISIERUNG
VON
KOMPLEXEN
ZWISCHEN
BIP
UND
IG
H-KETTEN
57
3.2.
ANALYSE
DER
IG
H-KETTEN
IN
AN
UND
ABWESENHEIT
VON
IG
L-KETTEN
74
3.2.1.
UNTERSUCHUNG
DES
SEKRETIONSVERHALTENS
DER
IG
H-KETTEN
IN
AN
UND
ABWESENHEIT
VON
IG
L-KETTEN
74
3.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
IG
H-KETTEN
IN
ANWESENHEIT
VON
IG
L-KETTEN
75
3.3.1.
UNTERSUCHUNGEN
AN
INTRAZELLULAEREN,
IMMUNGLOBULINHALTIGEN
VESLKELN
75
3.3.2.
ANALYSE
DER
ASSOZIATIONSFORMEN
VON
IG
H
UND
L-KETTEN
88
3.3.3.
DEFINITION
DER
FUNKTIONALITAET
VON
IG
H
UND
L-KETTEN-ASSO
ZIATEN
DURCH
IHR
ANTIGENBINDEVERHALTEN
94
3.3.4.
VERGLEICH
DER
BIP-BINDUNG
ZWEIER
UNTERSCHIEDLICHER
IG
H
KETTEN
MIT
DELETION
DER
C|_|1-DOMAENE
108
D.
DISKUSSION
110
1.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
110
2.
BETEILIGUNG
DES
PROTEINS
BIP
AN
DER
FALTUNG
VON
IG
H-KETTEN
110
3.
EXPRESSION
UNTERSCHIEDLICHER
IG
H-KETTEN
IN
GEGENWART
VON
IG
L-KETTEN
114
3.1.
INTRAZELLULAERE
AGGREGATLON
VON
IG
115
3.2.
ANTIGENBINDEVERHALTEN
UNTERSCHIEDLICHER
IG
120
4.
FUNKTION
DER
C
H
1-DOMAENE
BEI
DER
FALTUNG
UND
ASSOZIATION
VON
IG
121
E.
ZUSAMMENFASSUNG
126
F.
LITERATURVERZEICHNIS
127 |
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