Funktionelle Abhängigkeit von Sexualität und Parasitismus am Modell des Zygomyceten Parasitella parasitica:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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3
FUNKTIONELLE ABHAENGIGKEIT VON SEXUALITAET UND PARASITISMUS AM MODELL DES
ZYGOMYCETEN PARASITELLA PARASITICA
INAUGURAL - DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES GRADES DOKTOR DER
NATURWISSENSCHAFTEN AM FACHBEREICH BIOLOGIE
DER FREIEN UNIVERSITAET BERLIN
VORGELEGT VON MARTINA VETTER AUS OSTERODE AM HARZ
BERLIN 1994
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS VII
ABKUERZUNGEN IX
1 EINLEITUNG 1
2 GRUNDLAGEN 4
2.1 SIKYOTISCHER PARASITISMUS 4
2.2 PARASEXUALITAET 7
2.3 KREUZUNGSTYPSPEZIFITAET 8
2.3.1 MORPHOLOGIE 8
2.3.2 STADIEN- UND KREUZUNGSTYPSPEZIFISCHE GENPRODUKTE 9 2.3.3
KOMMUNIKATION KOMPLEMENTAERER PARTNER UEBER DAS TRISPORSAEURE-SYSTEM 10
2.4 ISOLIERUNG DIFFERENTIELL EXPRIMIERTER GENE 14
3 MATERIAL 16
4 METHODEN 21
4.1 PRAEPARATIVE METHODEN 21
4.1.1 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN 21
4.1.2 SCHNELLE PLASMID-DNA-ISOLIERUNG 22
4.1.3 DNA-PRAEPARATION AUS ZYGOMYCETEN 22
4.1.4 PRAEPARATION VON GESAMT-RNA AUS PILZKULTUREN 23
4.1.5 PRAEPARATION VON POLY(A)-RNA 24
4.1.6 PRAEPARATION HOCHMOLEKULARER DNA-MOLEKUELE FUER DIE ROTATIONSFELD-
ELEKTROPHORESE 25
4.1.7 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON CHROMOSOMEN 26 4.1.8
TRISPORSAEUREPRAEPARATION AUS BLAKESLEA TRISPORA 29
4.1.9 ANALYSE DES KULTURUEBERSTANDES 30
4.2 ANALYTISCHE METHODEN 31
4.2.1 IN VI/RO-TRANSLATION 31
4.2.2 GELELEKTROPHORETISCHE METHODEN FUER PROTEINE 32
4.2.2.1 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE(SDS-PAGE) 32 4.2.2.2
ZWEIDIMENSIONALE GELELEKTROPHORESE 33
4.2.3 PROTEINDETEKTION 35
4.2.4 RAPID-PCR 35
4.2.5 ELUTION VON DNA-FRAGMENTEN 36
4.2.6 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA FRAGMENTEN 37
4.2.7 GELELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON RNA 38
4.2.8 TRANSFER VON NUKLEINSAEUREN AUF NYLONFILTER 39
4.2.9 HYBRIDISIERUNG VON SOUTHERN-UND NORTHERN -BLOTS 40 4.2.10
CDNA-SYNTHESE UND KLONIERUNG IN LAMBDA UNI-ZAP*XR 40 4.2.11 ISOLIERUNG
TRISPORSAEURESPEZIFISCHER LAMBDA-KLONE 43 4.2.12
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 45
IMAGE 3
4.3 MIKROBIOLOGISCHE UND GENETISCHE METHODEN
4.3.1 TRANSFORMATION VON E. COLI 4.3.2 INFEKTION VON BAKTERIENZELLEN MIT
PHAGEN 4.3.3 IN VIVO EXCISION DES PBLUESCRIPT AUSUNI-ZAP*XR 4.3.4
KULTIVIERUNG DER ZYGOMYCETEN 4.3.5 BIO-ASSAY
5 ERGEBNISSE
5.1 TRISPORSAEURESYNTHESE IN ZYGOMYCETEN
5.1.1 ISOLIERUNG VON TRISPORSAEURE AUS B. TRISPORA 5.1.2
TRISPORSAEURESYNTHESE IN A. GLAUCA UND P. PARASITICA
5.2 EINFLUSS VON TRISPORSAEURE AUF VEGETATIVE ZELLEN VON P. PARASITICA
5.2.1 ANALYSE DES INDUZIERTEN EXPRESSIONSMUSTER 5.2.1.1 ANALYSE IN VITRO
SYNTHETISIERTER PROTEINE IN DER EINDIMENSIONALEN GELELEKTROPHORESE
5.2.1.2 ANALYSE DER PROTEINE IN DER ZWEIDIMENSIONALEN
GELELEKTROPHORESE
5.2.2 ISOLIERUNG DIFFERENTIELL EXPRIMIERTER CDNA-KLONE 5.2.2.1
KONSTRUKTION DER CDNA-BANK IN LAMBDA UNI-ZAP*XR 5.2.2.2 UEBERPRUEFUNG DER
CDNA-BANK 5.2.2.3 ISOLIERUNG SPEZIFISCHER CDNA-MOLEKUELE AUS P.
PARASITICA 5.2.3 TRANSKRIPT-ANALYSEN DIFFERENTIELL EXPRIMIERTER GENE
5.2.4 LOKALISIERUNG DER SELEKTIERTEN CDNA-KLONE IM GENOM
VON P. PARASITICA
5.3 GENOMANALYSE DER PARAREKOMBINANTEN
5.3.1 RAPID-PCR-TECHNIK 5.3.2 * PCR-FRAGMENTE ALS HYBRIDISIERUNGSPROBEN
5.3.3 UNTERSUCHUNG DER PARAREKOMBINANTEN MITTELS DER ROTATIONSFELD-
ELEKTROPHORESE
5.3.3.1 PROTOPLASTIERUNG VON MINIMYZELIEN 5.3.3.2 ANALYSE DER KARYOTYPEN
6 DISKUSSION
6.1 TRISPORSAEURE-SYNTHESE IN ZYGOMYCETEN
6.2 IN VIRRO-INDUKTION VON P. PARASITICA UND VERGLEICHENDE
EXPRESSIONSMUSTER
6.3 INTERAKTION VON A. GLAUCA UND P. PARASITICA
6.3.1 SIKYOTISCHER PARASITISMUS
6.3.2 ANALYSE VON PARAREKOMBINANTEN
7 ZUSAMMENFASSUNG
8 LITERATUR
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