Isolierung und Charakterisierung monoklonaler Mausantikörper gegen das menschliche erb-B2-Genprodukt:
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
EINLEITUNG 1
MATERIAL UND METHODEN
11
1. ZELLEN
1.1. VERWENDETE ZELLEN
1.1.1. HYBRIDOMZELLEN
1.1.2. TEST-ZELLINIEN
1.2. KULTIVIERUNG DER ZELLEN 12
1.2.1. AUFTAUEN
1.2.2. PASSAGIEREN 13
1.2.3. EINFRIEREN
1.2.4. MATERIALIEN UND MEDIEN
1.3. KLONIERUNG VON HYBRIDOMZELLEN 15
1.4. HYBRIDOMZELL-KULTURUEBERSTAND 16
1.4.1. GEWINNUNG VON UEBERSTAND MIT HOHER ANTIKOERPERKONZENTRATION
1.4.2. LAGERUNG 17
1.5. BEHANDLUNG VON ZELLEN MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN
2. EUSA
2.1. ANTIGENBESCHICHTUNG DER MIKROTITERPLATTEN 18
2.1.1. BESCHICHTUNG MIT ZELLEN
2.1.2. BESCHICHTUNG MIT GEREINIGTEM PROTEIN
2.2. BLOCKIERUNG 19
2.3. INKUBATION MIT ANTIKOERPERN
2.4. ENTWICKLUNG
2.5. MATERIALIEN 20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3. IMMUNFLUORESZENZ
3.1. ANFAERBUNG VON ADHAERENTEN ZELLEN 21
3.1. '1. VORBEREITUNG DER ZELLEN
3.1.2. INKUBATION MIT ANTIKOERPERN
3.1.3. MIKROSKOPIE
3.2. ANFAERBUNG VON SUSPENDIERTEN ZELLEN 22
3.3. MATERIALIEN
4. IGM 23
4.1. ISOTYPBESTIMMUNG VON MONOKLONALEN MAUSANTIKOERPERN
4.2. AUFREINIGUNG VON IGM DURCH GELFIITRATIONS-CHROMATOGRAPHIE 24
4.2.1. VORBEREITUNG DER SAEULE
4.2.2. VORBEREITUNG DER PROTEINLOESUNG
4.2.3. AUFTRENNUNG DER PROTEINE 25
4.2.4. BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTS DER FRAKTIONEN
4.2.5. KONZENTRIERUNG UND LAGERUNG DES GEREINIGTEN PROTEINS
4.2.6. MATERIALIEN 26
5. PROTEINE
5.1. PROTEINEXTRAKTION MIT TRITON-X100
5.1.1. STANDARDEXTRAKTION
5.1.2. EXTRAKTION ZUM NACHWEIS PHOSPHORYLIERTER PROTEINE 27
5.2. IMMUNPRAEZIPITATION
5.3. AUFTRENNUNG VON PROTEINEN AUF SDS-POLYACRYLAMID-GELEN 28
5.3.1. VORBEREITUNG DES GELS 29
5.3.2. ELEKTROPHORESE 30
5.3.3. MATERIALIEN
5.4. IMMUNOBLOT
5.4.1. TRANSFER VON PROTEINEN AUS POLYACRYLAMID-GELEN 31
5.4.2. ANTIKOERPERMARKIERUNG VON PROTEINEN AUF PVDF-MEMBRANEN 32
5.4.3. DETEKTION MIT AP-KONJUGIERTEN ANTIKOERPERN
5.4.4. DETEKTION MIT 125L-MARKIERTEM PROTEIN A 33
5.5. COOMASSIE-FAERBUNG VON PROTEINEN IN POLYACRYLAMID-GELEN
6. PUFFERLOESUNGEN 34
ERGEBNISSE 36
I. ISOLIERUNG VON ANTI-ERBB2-PRODUZIERENDEN HYBRIDOMZELLKLONEN
II. BESTIMMUNG DES ISOTYPS DER MOAKS 2M11 UND 2M75 38
III. REINIGUNG VON MOAK 2M75 39
IV. IMMUNPRAEZIPITATION VON ERBB2 AUS SKBR3-ZELLEXTRAKTEN MIT DEN 41
MOAKS 2M11 UND 2M75
V. CHARAKTERISIERUNG DER BINDUNG DER MOAKS 2M11 UND 2M75 AN 42
ENBSS2-EXPRIMIERENDEN ZELLEN
VI. EFFEKT VON MOAK 2M75 AUF DIE 47
TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG DES ERBB2-REZEPTORPROTEINS
DISKUSSION 50
ZUSAMMENFASSUNG 57
LITERATUR 58
DANKSAGUNG 69
LEBENSLAUF 70 |
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