Antivirale und cytotoxische Wirkstoffe aus Basidiomyceten:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1994
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| adam_text | A ANTIVIRALE UND CYTOTOXISCHE WIRKSTOFFE AUS BASIDIOMYCETEN VOM
FACHBEREICH BIOLOGIE DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN ZUR VERLEIHUNG DES
AKADEMISCHEN GRADES DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN GENEHMIGTE
DISSERTATION (D 386) VORGELEGT VON BRIGITTE SIMON VORSITZENDER: 1.
BERICHTERSTATTER: 2. BERICHTERSTATTER: PROF. DR. H. HUBER PROF. DR. T.
ANKE PROF. DR. M. METZLER TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE:
21.01.1994 KAISERSLAUTERN, 1994 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1.
EINLEITUNG 1 2. MATERIAL UND METHODEN S 2.1. CHEMIKALIEN 8 2.2. MEDIEN
10 2.2.1. MEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 10 2.2.2. MEDIEN FUER
ZELLKULTUREN UND VIREN 11 2.2.3. PUFFER UND LOESUNGEN 13 2.3. ORGANISMEN
14 2.3.1 TESTSTAEMME FUER DAS WIRKUNGSSPEKTRUM 14 2.3.2. BAKTERIEN FUER DEN
AMES-TEST AUF MUTAGENITAET . 15 2.3.3. NEMATODEN - 15 2.3.4. ZELLKULTUREN
UND VIREN 15 2.3.5. VERMEHRUNG UND AUFBEWAHRUNG VON ZELLINIEN UND VIREN
15 2.4. SCREENING VON ASCO-UND BASIDIOMYCETEN 16 2.4.1. GEWINNUNG DER
ROHEXTRAKTE 16 2.4.2. SCREENING 17 2.4.3. FERMENTATION DER
PRODUZENTENSTAEMME UND GEWINNUNG VON 17 ROHEXTRAKTEN 2.5.
FERMENTATIONSANALYSEN 18 2.5.1. MYZELTROCKENGEWICHT 18 2.5.2.
GLUCOSE-UND MALTOSEBESTIMMUNG 18 2.5.3. ABGASANALYTIK 18 2.5.4. PH-WERT
19 2.6. METHODEN ZUR REINIGUNG UND CHEMISCH-PHYSIKALISCHEN 19
CHARAKTERISIERUNG DER WIRKSTOFFE 2.6.1. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 19 2.6.2.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 20 2.6.3. SPEKTROSKOPIE 20 2.7. BIOLOGISCHE
TESTMETHODEN 21 INHALTSVERZEICHNIS 2.7.1. VSV-VERMEHRUNGSASSAY 21 2.7.2.
VSV-PLAQUEASSAY 21 2.7.3. PRAEPARATION DES VSV 22 2.7.4. ASSAY DER
RNA-ABHAENGIGEN RNA-POLYMERASE DES VSV 22 2.7.5. CYTOTOXIZITAETSTESTS 23
2.7.5.1. MONOLAYERKULTUREN 23 2.7.5.2. SUSPENSIONSKULTUREN 24 2.7.6.
EINBAU RADIOAKTIVER VORSTUFEN IN DNA, RNA UND PROTEINE 24 2.7.7.
ERMITTLUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION (MQC) BEI BAKTERIEN 24 UND
PILZEN 2.8. WEITERE BIOLOGISCHE TESTMETHODEN 25 2.8.1.
AGARDIFFUSIONSTEST 25 2.8.2. ASSAY DER HIV-L-REVERSEN TRANSKRIPTASE 25
2.8.3. RNA-SYNTHESE AN ISOLIERTEN ZELLKERNEN 26 2.8.4. HEMMUNG DER
RINDERTHROMBOZYTENAGGREGATION 27 2.8.5. MUTAGENITAETSTEST 28 2.8.6.
HAEMOLYSETEST 28 2.8.7. REAKTION MIT L-CYSTEIN 29 3. ERGEBNISSE 30 3.1.
RNA-ABHAENGIGE RNA-POLYMERASE DES VSV (VSV-TRANSKRIPTASE) 30 3.1.1.
PRAEPARATION DES VIRUS DER VESIKULAEREN STOMATITIS 30 3.1.2.
CHARAKTERISIERUNG DER RNA-ABHAENGIGEN RNA-POLYMERASE 30 3.1.3. EINFLUSS
LITERARURBEKANNTER SUBSTANZEN AUF DIE RNA-POLYMERASE DES 32 VSV 3.1.4.
EINFLUSS FREIER FETTSAEUREN AUF DIE RNA-POLYMERASE DES VSV 34 3.2.
VSV-VERMEHRUNGSASSAY 34 3.2.1. EINFLUSS LITERATURBEKANNTER SUBSTANZEN AUF
DIE VSV-VERMEHRUNG 35 3.2.2. EINFLUSS VON FETTSAEUREN AUF DIE
VSV-VERMEHRUNG 37 3.3. SCREENING 38 3.4. FERMENTATION, ISOLIERUNG UND
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 39 DER WIRKSTOFFE 3.4.1.
ISOLIERUNG VON COLLYBIAL AUS COLLYBIA CONFLUENS TA 90293 39 3.4.1.1.
FERMENTATION VON COLLYBIA CONFLUENS TA 90293 39 3.4.1.2. ISOLIERUNG DES
WIRKSTOFFS COLLYBIAL 41 INHALTSVERZEICHNIS 3.4.2. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG VON COLLYBIAL 42 3.4.2.1. RETENTIONSZEITEN UND
OPTISCHE DREHUNG 42 3.4.2.2. UV- UND CD-SPEKTROSKOPIE 42 3.4.2.3.
IR-SPEKTROSKOPIE 44 3.4.2.4. MASSENSPEKTROSKOPIE UND NMR-SPEKTROSKOPIE
44 3.4.3. FILOBOLETINSAEURE, STROBILURIN E UND LINOLENSAEURE: DREI
WIRKSTOFFE AUS 45 FILOBOLETUS SPEC. TA 90054 3.4.3.1. FERMENTATION VON
FILOBOLETUS SPEC. TA 90054 45 3.4.3.2. ISOLIERUNG VON FILOBOLETINSAEURE
47 3.4.4. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON FILOBOLETINSAEURE
48 3.4.4.1. RETENTIONSZEITEN UND SPEZIFISCHE DREHUNG 48 3.4.4.2. UV- UND
CD-SPEKTROSKOPIE 48 3.4.4.3. IR-SPEKTROSKOPIE 50 3.4.4.4.
MASSENSPEKTROSKOPIE UND NMR-SPEKTROSKOPIE 50 3.4.5. ISOLIERUNG DER
WIRKSTOFFE AUS TA 90279 51 3.4.5.1. FERMENTATION VON TA 90279 52
3.4.5.2. ISOLIERUNG VON P-METHOXYZIMTSAEUREMETHYLESTER 53 3.4.6.
PHYSIKALISCH-CHEMISCNE CHARAKTERISIERUNG VON P-METHOXYZIMT- 53
SAEUREMETHYLESTER 3.4.6.1. RETENTIONSZEITEN 53 3.4.6.2. UV-SPEKTROSKOPIE
54 3.4.6.3. IR-SPEKTROSKOPIE 55 3.4.6.4. MASSENSPEKTROSKOPIE UND
NMR-SPEKTROSKOPIE 55 3.4.7. WIRKSTOFFE AUS PANUS SPEC. TA 90067 56
3.4.7.1. FERMENTATION VON PANUS SPEC. TA 90067 56 3.4.7.2. ISOLIERUNG
DER WIRKSTOFFE BS9067-A UND BS9067-B 58 3.4.8. PHYSIKALISCH-CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG VON BS9067-A UND 59 BS9067-B 3.4.8.1. RETENTIONSZEITEN
UND SPEZIFISCHE DREHWERTE 59 3.4.8.2. UV- UND CD-SPEKTROSKOPIE 60
3.4.8.3. IR-SPEKTROSKOPIE 62 3.5. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
WIRKSTOFFE 63 3.5.1. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON COLLYBIAL 63
3.5.1.1. WIRKUNG VON COLLYBIAL AUF DIE VSV-VERMEHRUNG 63 3.5.1.2.
WIRKUNG VON COLLYBIAL AUF DIE RNA-POLYMERASE DES VSV 64 3.5.1.3.
CYTOTOXIZITAET 64 3.5.1.4. EINFLUSS VON COLLYBIAL AUF DIE
MAKROMOLEKUELSYNTHESEN IN VIVO 65 3.5.1.5. MINIMALE INHIBITORISCHE
KONZENTRATION (MK) FUER BAKTERIEN UND PILZE 66 3.5.2. BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG VON FILOBOLETINSAEURE 67 INHALTSVERZEICHNIS 3.5.2.1.
WIRKUNG VON FILOBOLETINSAEURE AUF DIE VSV-VERMEHRUNG 67 3.5.2.2. WIRKUNG
VON FILOBOLETINSAEURE AUF DIE RNA-POLYMERASE DES VSV 67 3.5.2.3.
CYTOTOXIZITAET 67 3.5.2.4. WIRKUNG VON FILOBOLETINSAEURE AUF DIE
MAKROMOLEKUELSYNTHESEN 68 3.5.2.5. MINIMALE INHIBITORISCHE KONZENTRATION
(MK) FUER BAKTERIEN UND PILZE 69 3.5.3. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON
P-METHOXYZIMTSAEUREMETHYLESTER 69 3.5.3.1. EINFLUSS VON
P-METHOXYZIMTSAEUREMETHYLESTER AUF DIE VSV-VERMEHRUNG 69 3.5.3.2. WIRKUNG
VON P-METHOXYZIMTSAEUREMETHYLESTER AUF DIE RNA-ABHAENGIGE 70
RNA-POLYMERASE DES VSV 3.5.3.3. CYTOTOXIZITAET 70 3.5.3.4. EINFLUSS VON
P-METHOXYZIMTSAEUREMETHYLESTER AUF DIE 70 MAKROMOLEKUEL SYNTHESEN 3.5.3.5.
MINIMALE INHIBITORISCHE KONZENTRATION (MK) FUER BAKTERIEN UND PILZE 70
3.5.4. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON BS9067-A UND BS9067-B 71
3.5.4.1. EINFLUSS VON BS9067-A UND BS9067-B AUF DIE VSV-VERMEHRUNG 71
3.5.4.2. WIRKUNG VON BS9067-A UND BS9067-B AUF DIE RNA-ABHAENGIGE RNA- 71
POLYMERASE DES VSV 3.5.4.3. CYTOTOXIZITAET 71 3.5.4.4. EINFLUSS VON
BS9067-A UND BS9067-B AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN 72 IN VIVO 3.5.4.5.
MINIMALE INHIBITORISCHE KONZENTRATIONEN (MK) FUER BAKTERIEN UND 73 PILZE
3.6. WEITERE BIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 75 3.6.1. EINFLUSS DER WIRKSTOFFE
AUF DIE HIV-1 -REVERSE TRANSKRIPTASE 75 3.6.2. RNA-SYNTHESE AN
ISOLIERTEN ZELLKERNEN 75 3.6.3. HEMMUNG DER AGGREGATION VON
RINDERTHROMBOZYTEN 77 3.6.4. HAEMOLYSETEST 77 3.6.5. TEST AUF NEMATIZIDE
EIGENSCHAFTEN 77 3.6.6. MUTAGENITAETSTEST NACH ARNES 78 3.6.7. INDUKTION
DER MORPHOLOGISCHEN DIFFERENZIERUNG DER ZELLINIE HL-60 79 3.8.
PHENOXAZON: EIN WIRKSTOFF AUS COLLYBIA SPEC. TA 90270 80 4. DISKUSSION
81 4.1. VERWENDETE TESTSYSTEME 81 4.2. SCREENING 84 4.3. NEUE
INHIBITOREN DER VSV-VERMEHRUNG 85 INHALTSVERZEICHNIS 4.4. BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 87 4.4.1. ANTIVIRALE
WIRKUNGEN DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 87 4.4.2. EINFLUSS DER SUBSTANZEN
AUF DIE VSV-RNA-POLYMERASE UND DER HIV 1- 89 REVERSEN TRANSKRIPTASE
4.4.3. UNTERSUCHUNGEN ZUR SPEZIFITAET DER VERBINDUNGEN 89 4.4.4. WEITERE
BIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 91 5. ZUSAMMENFASSUNG 97 6. LITERATUR 99
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