Etablierung eines Verfahrens zur Herstellung monoklonaler Antikörper gegen die variable Region einer beliebigen humanen T-Zellrezeptor-alpha- oder -beta-Kette:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
A.
VERZEICHNIS
DER
ABBILDUNGEN
.
1
B
.
VERZEICHNIS
DER
TABELLEN
.
1
C.
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
.
2
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
.4
2.
EINFUEHRUNG
.
.3
3.
ZIEL
UND
KONZEPTION
.
11
4.
CHARAKTERISIERUNG
VON
TZR-KETTEN
IN
EINER
CDNA-BANK
DES
HUMANEN
T-ZELLKLONS
WM-3
.
12
4.1.
ERLAEUTERUNGEN
ZUM
KLON
WM-3
.
12
4.2.
UEBERBLICK
.
12
4.3.
IDENTIFIZIERUNG
VON
2
TZRA-KETTEN
UND
2
TZRSS-KETTEN
.
13
4.4.
NACHWEIS
DER
MRNA-EXPRESSION
SAEMTLICHER
ISOLIERTER
TZR-KETTEN
IM
T-ZELLKLON
WM-3
.
22
4.5.
VERIFIZIERUNG
DER
GEFUNDENEN
TZRA
UND
SS-KETTEN
.
M
4.6.
MRNA-EXPRESSION
DER
TZR-KETTEN
AL
UND
B
1
IN
DER
OLIGOKLONALEN
T-ZELLPOPULATION
.
25
4.7.
NACHWEIS
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
DER
TZR
BL-KETTE
.
27
4.8.
DISKUSSION
.
27
5.
EXPRESSION
DER
TZR-KETTEN
AL,
A9
UND
BL
IN
HUMANEN
UND
MURINEN
ZELLINIEN
.
30
5.1.
UEBERBLICK
.
30
5.2.
DURCHFUEHRUNG
.
31
5.3.
DISKUSSION
.
35
6.
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
HUMANE
TZR
VA
UND
VSS-ELEMENTE
.
37
6.1.
UEBERBLICK
.
37
6.2.
IMMUNISIERUNG
SYNGENER
(B10.A
X
AKR)F1-MAEUSE
.
38
6.3.
IMMUNISIERUNG
VON
BIO.A-MAEUSEN
NACH
VERKUERZTEM
IMMUNISIERUNGSPROTOKOLL.
41
6.4.
IMMUNISIERUNG
VON
"AUTOIMMUN
'
-MAEUSEN
ZBWF1
.
43
6.5.
IMMUNISIERUNG
WAEHREND
EINER
GRAFT-VERSUS-HOST-RE&UEON
(GVHR)
.
44
6.6.
DISKUSSION
.
45
INHALTSVERZELCH
NIS
II
7.
GERAETE
.
48
8.
EXPERIMENTELLER
TEIL:
ZELLKULTUR
/
IMMUNOLOGIE
.
50
8.1.
MATERIALIEN/CHEMIKALIEN
.
50
8.2.
ZELLKULTURMEDIEN
.
50
8.3.
ZELLEN
.
51
8.4.
METHODEN
.
51
8.4.1.
ISOLIERUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
(PBMC)
AUS
MENSCHLICHEM
VOLLBLUT
ODER
"BUFFY
COAT"
UBER
EINEN
FICOLL-HYPAQUE-DICHTEGRADIENTEN.
51
8.4.2.
BESTIMMUNG
DER
ZAHL
UND
VITALITAET
VON
ZELLEN
.
52
8.4.3.
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
.
52
8.4.4.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE.
.
.
52
8.4.5.
EXPRESSION
EXOGENER
TZR-KETTEN
IN
EUKARYONTENZELLEN
.
54
8.4.6.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
55
8.4.6.1.
IMMUNISIERUNG
.
55
8.4.6.2.
FUSION
MIT
POLYAETHYLENGLYKOL
(PEG)
.
56
8.4.6.3.
AUSSAAT
KRYOKONSERVIERTER
FUSIONEN
.
56
8.4.6.4.
ANALYSE
VON
HYBRIDOMKULTURUEBERSTAENDEN
AUF
TZR
SPEZIFITAET
.
56
9.
EXPERIMENTELLER
TEIL:
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
57
9.1.
MATERIALIEN/CHEMIKALIEN
.
57
9.2.
ENZYME
.
58
9.3.
RADIOCHEMIKALIEN
.
58
9.4.
VEKTOREN
/
TZR-DNA-SONDEN
/
PRIMER
.
58
9.5.
BAKTERIENSTAEMME
/
BAKTERIOPHAGEN
.
59
9.6.
METHODEN
.
59
9.6.1.
STANDARDTECHNIKEN
.
59
9.6.2.
KGTLO-TITERBESTIMMUNG
.
60
9.6.3.
ABKLATSCH
VON
PHAGEN-DNA
AUF
NITROZELLULOSE-FILTER
.
60
9.6.4.
RADIOAKTIVE
MARIDERUNG
VON
DNA
("NICK-TRANSLATION")
.
61
9.6.5.
HYBRIDISIERUNG
VON
NITROZELLULOSE-FILTERN
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTER
TZR-DNA
.
61
9.6.6.
ISOLIERUNG
VON
EINZELPLAQUES
.
62
9.6.7.
ISOLIERUNG
VON
REKOMBINANTER
XGTLO-PHAGEN-DNA
.
62
9.6.8.
SUBKLONIERUNG
VON
CDNA-FRAGMENTEN
AUS
DEM
XGTLO-PHAGENVEKTOR
IN
DEN
PLASMIDVEKTOR
PBLUESCRIPT
IISK
(+)
ODER
KS
(+)
.
62
9.6.9.
PLASMID-PRAEPARATION
MIT
HILFE
VON
QIAGENSAEUIEN
.
63
9.6.10.
AUSPLATTIEREN
VON
VCSM13-HELFERPHAGEN
.
63
IIL
INHALTSVERZEICHNIS
9.6.11.
HERSTELLUNG
EINES
HOCHTITRIGEN
VCSM13-PHAGENLYSATS
.
63
9.6.12.
ISOLIERUNG
VON
EINZELSTRANG-DNA
.
64
9.6.13.
DNA-SEQUENZIERUNG
MIT
DER
T7
DNA-POLYMERASE
(SEQUENASE)
.
64
9.6.14.
COMPUTERANALYSE
DER
SEQUENZIERUNGSDATEN
MIT
HILFE
VON
GENDATEN
BANKEN
.
65
9.6.15.
ISOLIERUNG
VON
TZR
V-REGION
SPEZIFISCHEN
CDNA-FRAGMENTEN
AUS
REKOMBINANTEN
PBLUESCRIPT-PLASMIDEN
.
65
9.6.16.
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
MIT
HILFE
EINES
CSCL-DICHTEGRADIENTEN.
.66
9.6.17.
NORTHEM-BLOT-TECHNIK
.
66
9.6.18.
HYBRIDISIERUNG
VON
NORTHERN-,
SOUTHERN
UND
RNA-DOT-BLOTS
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA
.
67
9.6.19.
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
KLEINEN
ZELLMENGEN
MIT
SAUREM
PHENOL
.
67
9.6.20.
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
TZR
MRNA
ZU
EINZELSTRAENGIGER
CDNA
.
68
9.6.21.
PCR-AMPLIFIKATION
DER
TZR-CDNA
.
68
9.6.22.
SOUTHEM-BIOT-TECHNIK
.
68
9.6.23.
UMKLONIEREN
VON
TZR-CDNA
FRAGMENTEN
AUS
PBLUESCRIPT
N
IN
DIE
EUKARYONTISCHEN
EXPRESSIONSVEKTOREN
BCMGSHYG
BZW.
BCMGSNEO
.69
9.6.24.
RNA-DOT-BLOT
TECHNIK
.
71
9.6.25.
PCR-NACHWEIS
VON
MYKOPLASMEN
.
71
10.
LITERATURVERZEICHNIS
.
73
DANKSAGUNG
.
82
LEBENSLAUF
83 |
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