Untersuchungen zum Phenol-carboxylierenden Enzymsystem eines denitrifizierenden Bakteriums Pseudomonas Stamm K 172:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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INHALTSVERZEICHNIS
EINLEITUNG
MATERIAL
UND
METHODEN
13
I.
MATERIAL
1.
CHENIKALIEN
UND
BIOCHEIIKALIEN
13
2.
RADIOCHEIIKALIEN
13
3.
CHROIATOGRAPHIENATERIAL
13
4.
ZELLIATERIAL
14
II.
ZUECHTUNG
VON
PSEUDOIONAS
SP.
K
172
14
1.
HERSTELLEN
VON
HINERALSALZNEDIUN
14
2.
ZUECHTUNG
16
3.
ZELLERNTE
UND
-LAGERUNG
18
III.
HERSTELLEN
VON
ZELLEXTRAKTEN
19
1.
ZELLEXTRAKT
FUER
DIE
MESSUNG
DER
14
CO
2
:4-HYDROXYBENZOAT-ISOTOPENAUSTAUSCB
AKTIVITAET
UND
DIE
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE-AKTIVITAET.
19
2.
ZELLEXTRAKT
FUER
DIE
MESSUNG
DER
[
14
C]PHENOR.PHENYLPHOSPHAT-ISOTOPENAUSTAUSCH
AKTIVITAET
20
3.
HERSTELLEN
VON
ZELLEXTRAKT
IIT
ULTRASCHALL
20
IV.
GELELEKTROPHORESE
21
1.
POLYACRYLAIID-GELELEKTROPHORESE
21
2.
2-D-GELELEKTROPHORESE
22
3.
PROTEINNACHWEIS
24
4.
PROBENVORBEREITUNG
24
5.
GESAITPROTEINVERGLEICH
ZWISCHEN
4-HYDROXYBENZOAT-GEWACHSENEN
UND
PHENOL
GEWACHSENEN
ZELLEN
25
V.
VERSUCHE
ZUI
PHENOL-ABBAU
NIT
GANZEN
ZELLEN
26
1.
ZWISCHENPRODUKTE
BEI*
PHENOL-ABBAU
26
2.
ADAPTATION
ZUR
VERWERTUNG
VON
AROIATISCHEN
SUBSTRATEN.
28
VI.
ENZYIAKTIVITAETEN
IN
ZELLEXTRAKT
AUS
PSEUDOIONAS
SP.
K
172
29
1.
MESSUNG
DES
14
C0
2
:4-HYDROXYBENZOAT-ISOTOPENAUSTAUSCHES
.
29
2.
MESSUNG
DER
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE-AKTIVITAET
30
3.
MESSUNG
DES
[
14
C]PHENOL:PHENYLPHOSPHAT-ISOTOPENAUSTAUSCHES
33
4.
VERSUCHE
ZUR
HETTO-PHOSPHORYLIERUNG
VON
PHENOL
34
2
VII.
VERSUCHE
ZUR
ANREICHERUNG
DER
ENZYUE,
WELCHE
DIE
DISETZUNG
VON
PHENOL
ZU
4-HYDROXY
BENZOAT
KATALYSIEREN.
35
1.
VORVERSUCHE
ZUR
ENZYISTABILITAET
36
2.
ARBEITSSCHRITTE
DER
ANREICHERUNG
37
VIII.
SONSTIGE
BESTINUNGEN
38
1.
PROTEIN
38
2.
RADIOAKTIVITAET
40
3.
MESSUNG
EINES
GEKOPPELTEN
ENZYUTESTS
UIT
ZELLEXTRAKTEN
AUS
CHLOROFLEXUS
AURANTIACUS
IN
ANWESENHEIT
VON
RADIKALFAENGERN
41
ERGEBNISSE
43
I.
EXPERIIENTE
ZUN
ANAEROBEN
ABBAU
VON
PHENOL
UIT
GANZEN
ZELLEN
43
1.
(^-ABHAENGIGKEIT
DES
ABBAUS
VON
PHENOL
UND
INDUKTION
DER
ABBAUENDEN
ENZYIE
DURCH
PHENOL
43
2.
NACHWEIS
DER
ZWISCHENPRODUKTE
DES
PHENOLSTOFFWECHSELS
NACH
MARKIERUNG
VON
ZELLEN
UIT
[
14
C|PHENOL
46
II.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOTOPENAUSTAUSCHREAKTION
ZWISCHEN
14
COJ
UND
4-IYDROXYBENZOAT
IN
VITRO
50
1.
BESCHREIBUNG
DER
14
CO
2
:4-HYDROXYBENZOAT-ISOTOPENAUSTAUSCHREAKTION
IN
ZELLEXTRAKT
51
2.
HENUSTOFFE
DER
ISOTOPENAUSTAUSCHREAKTION
52
III.
CARBOXYLIERUNG
VON
PHENYLPHOSPHAT
55
1.
CARBOXYLIERUNG
VON
PHENYLPHOSPHAT
UIT
ZELLEXTRAKTEN
55
2.
INDUKTION
DER
ENZYNAKTIVITAET
DURCH
PHENOL 58
3.
ABHAENGIGKEIT
DER
REAKTION
VON
PHENYLPHOSPHAT,
K
+
UND
MN
2+ 59
4.
PRODUKTE
DER
CARBOXYLIERUNG
VON
PHENYLPHOSPHAT
UND
ENTWICKLUNG
VERSCHIEDENER
METHODEN
ZUR
AKTIVITAETSIESSUNG
61
5.
STOECHIOUETRIE
DER
REAKTION
64
IV.
ISOTOPENAUSTAUSCH
ZWISCHEN
[
14
C]PHENOL
UND
PHENYLPHOSPHAT
66
1.
ISOTOPENAUSTAUSCH
ZWISCHEN
[
14
C]PHENOL
UND
PHENYLPHOSPHAT
IN
ZELLEXTRAKTEN
66
2.
EIGENSCHAFTEN
DES
ENZYNS
70
V.
VERSUCHE
ZUR
NETTO-PHOSPHORYLIERUNG
VON
PHENOL
UND
ZUR
DECARBOXYLIERUNG
VON
4-HYDROXY
BENZOAT
73
1.
NETTO-PHOSPHORYLIERUNG
VON
PHENOL.
74
2.
DECARBOXYLIERUNG
VON
4-HYDROXYBENZOAT
75
VI.
BESTINUNG
DER
MOLEKULARWASSE
DER
ENZYNE,
WELCHE
DIE
CARBOXYLIERUNG
VON
PHENYLPHOSPHAT
UND
DIE
ISOTOPENAUSTAUSCHREAKTION
KATALYSIEREN
75
VII.
VERGLEICH
DES
GESAUTPROTEINSPEKTRUIS
VON
ZELLEN,
DIE
ANAEROB
NIT
4-HYDROXYBENZOAT
ODER
PHENOL
GEZUECHTET
WORDEN
WAREN
79
3
VIII.
ANREICHERUNG
DES
ENZYNS,
DAS
DIE
14
C0J:4-HYDROXYBENZOAT-ISOTOPENAUSTAUSCHREAKTION
UND
DIE
PHENYLPHOSPHATCARBOXYLIERUNG
KATALYSIERT
84
1.
ALLGENEINE
EIGENSCHAFTEN
DES
ENZYNS
84
2.
ANREICHERUNG
DER
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE
87
DISKUSSION
92
1.
BEWEISE
FUER
DIE
CARBOXYLIERUNG
VON
PHENOL
UEBER
PHENYLPHOSPHAT
ZU
4-HYDROXYBENZOAT
93
2.
WIE
WIRD
PHENYLPHOSPHAT
GEBILDET?
94
3.
PHENYLPHOSPHAT,
EIN
"AKTIVIERTES
PHENOL"?
95
4.
PHENYLPHOSPHAT,
DAS
SUBSTRAT
DER
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE
98
5.
KATALYTISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE
99
6.
KATALYTISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
POSTULIERTEN
"PHENOL-KINASE"
102
7.
VORGESCHLAGENER
ABBAUWEG
VON
PHENOL
UEBER
PHENYLPHOSPHAT
ZU
4-HYDROXYBENZOAT,
DER
DURCH
"PHENOL-KINASE"
UND
PHENYLPHOSPHAT-CARBOXYLASE
KATALYSIERT
WIRD
105
8.
WEITERER
ABBAU
VON
4-HYDROXYBENZOAT
108
9.
REGULATION
UND
VENUTETE
GENETISCHE
ORGANISATION
110
10.
BERICHTE
ZUI
ANAEROBEN
ABBAU
VON
PHENOL
UND
ANDERER PHENOLISCHER
VERBINDUNGEN
IN
ANDEREN MIKROORGANISIEN
110
ZUSAMMENFASSUNG
116
LITERATUR
120 |
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