Strukturelle Analyse der Zinkfinger Multigenfamilie in Xenopus laevis:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
ZIELSETZUNG
8
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
3.1
EMBRYONEN
9
3.1.1
INJEKTION
VON
HCG
BEI
XENOPUS
LAEVIS
9
3.1.2
"KUENSTLICHE
BEFRUCHTUNG"
ZUR
SYNCHRONISIERTEN
9
EMBRYONALENTWICKLUNG
3.1.3
FROSCHLAICHAUFARBEITUNG
9
3.2
RNA-ISOLIERUNG
10
3.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
10
3.2.2
POLY
(A)
+
RNA-ISOLIERUNG
10
3.3
CDNA-SYNTHESE
11
3.3.1
ERSTE
STRANGSYNTHESE
11
3.3.2
ZWEITE
STRANGSYNTHESE
12
3.3.3
AUFFUELLEN
5'
UEBERHAENGENDER,
EINZELSTRAENGIGER
DNA
12
3.3.4
METHYLIERUNG
DER
ECO
RI-RESTRIKTIONSSTELLEN
12
3.3.5
LIGATION
DER
ECO
RI-ADAPTOREN
13
3.3.6
ERSTELLUNG
VON
ECO
RI-RESTRIKTIONSSTELLEN
13
3.3.7
TRENNUNG
DER
CDNA-MOLEKUELE
VON
DEN
ECO
RI
13
ADAPTOREN
3.4
ETABLIERUNG
EINER
CDNA-BIBLIOTHEK
IN
XGTLO
13
3.4.1
LIGATION
DER
CDNA-MOLEKUELE
MIT
XGTLO
VEKTORARMEN
13
3.4.2
IN
VITRO
PACKAGING
DER
LIGATIONSANSAETZE
14
3.4.3
TITERBESTIMMUNG
DER
REKOMBINANTEN
XGTLO
PHAGEN
14
3.4.4
AMPLIFIKATION
EINER
XGTLO
CDNA-BIBLIOTHEK
14
3.5
SCREENING
VON
CDNA
UND
GENOMISCHEN
XENOPUS
15
LAEVIS
BIBLIOTHEKEN
3.5.1
HERSTELLUNG
VON
PLATING-BAKTERIEN
15
3.5.2
AUSPLATTIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
PHAGEN
15
3.5.3
PHAGEN-DNA
TRANSFER
AUF
NITROCELLULOSE
16
3.5.4
HYBRIDISIERUNG
DER
PHAGEN-DNA
GEGEN
RADIOAKTIV
16
MARKIERTE
DNA-PROBEN
3.5.5
ISOLIERUNG
DER
HYBRIDISIERENDEN
PHAGEN
16
3.6
DNA-ISOLIERUNGEN
17
3.6.1
ISOLIERUNG
VON
PHAGEN-DNA
17
COLI
JM
101,
JM
103
UND
NM522
NACH
DER
CAC12
METHODE
3.6.1.1
PHAGEN-DNA
ISOLIERUNG
NACH
DER
PLATTENLYSATMETHODE
17
3.6.1.2
PHAGEN-DNA
ISOLIERUNG
AUS
GROSSEN
SUSPENSIONSKULTUREN
17
3.6.1.3
PHAGEN-DNA
ISOLIERUNG
AUS
KLEINEN
SUSPENSIONSKULTUREN
18
3.6.1.4
ISOLIERUNG
VON
M13
RF-DNA
AUS
GROSSKULTUREN
19
3.6.1.4.1
MINIPRAEPARATION
VON
M13
RF-DNA
20
3.6.1.5
ISOLIERUNG
VON
EINZELSTRAENGIGER
M13
PHAGEN-DNA
20
3.6.2
PLASMID-DNA
ISOLIERUNG
21
3.6.2.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
GROSSKULTUREN
21
3.6.2.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
25ML
KULTUREN
21
3.6.2.3
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
22
3.6.3
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
22
3.6.3.1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
MENSCHLICHEN
LEUKOCYTEN
22
3.6.3.2
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
XENOPUS
LAEVIS
ERYTHROZYTEN
22
3.6.3.3
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
ESCHERICHIA
COLI
23
3.7
RESTRIKTIONSABBAUTEN
23
3.8
ELEKTROPHORESEN
24
3.8.1
AGAROSEGELELEKTROPHORESEN
24
3.8.2
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESEN
24
3.8.3
ELEKTROPHORESEN
VON
DENATURIERENDEN
POLYACRYLAMIDGELEN
25
3.8.4
ELEKTROPHORESE
EINES
DENATURIERENDEN
SEQUENZGELS
AUF
DEM
ABI
SEQUENCER
370A
25
3.9
REISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
EINER
GELMATRIX
26
3.9.1
REISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
POLYACRYLAMIDGELEN
26
3.9.3
REISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
LOW-MELTING
AGAROSEGELEN
26
3.10
KLONIERUNGEN
26
3.10.1
VEKTOREN
26
3.10.2
LIGASEREAKTION
27
310.2.1
LIGASEREAKTION
IN
"LOW
MELTING"
AGAROSE
27
3.10.3
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
VON
ESCHERICHIA
28
3.10.3.1
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
ESCHERICHIA
COLI
ZELLEN
MIT
M13
PHAGEN
28
3.10.3.2
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
ESCHERICHIA
COLI
28
ZELLEN
MIT
PLASMIDEN
3.11
SOUTHERN
BLOTS
29
3.12
NORTHERN
BLOTS
29
3.13
OLIGONUKLEOTIDE
30
3.13.1
SYNTHESE
UND
REINIGUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
30
3.13.2
OLIGONUKLEOTIDE
ALS
SEQUENZIERUNGSPRIMER
30
3.13.3
OLIGONUKLEOTIDE
ALS
FLUORESZENZMARKIERTE
SEQUENZIERUNGSPRIMER
30
3.14
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
31
3.14.1
5'
ENDMARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
MIT
Y32P-ATP
31
3.14.1.1
5'
ENDMARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
Y32P-ATP
32
3.14.2
NICK-TRANSLATION
32
3.14.3
MARKIERUNG
MIT
HEXANUKLEOTIDZUFALLSPRIMER
32
3.14.4
3'
ENDMARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
EINER
"FILL
IN"
REAKTION
33
3.14.5
HERSTELLUNG
5'
ENDMARKIERTE,
EINZELSTRAENGIGE
DNA
33
PROBEN
MIT
EINEM
THERMOCYCLER
FUER
S1
NUKLEASE
EXPERIMENTE
(STUERZL
UND
ROTH,
1990)
3.15
DNA-SEQUENZIERUNG
33
3.15.1
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
(1977)
33
3.15.2
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
SANGER
(1977)
MIT
FLUORESZENZMARKIERTEN
PRIMERN
35
3.15.3
DOPPELSTRANGSEQUENZIERUNG
VON
XGT
11
PHAGEN
36
3.15.4
DNA-SEQUENZIERUNG
NACH
MAXAM
UND
GILBERT
(1980)
36
3.16
PRIMER
EXTENSION
EXPERIMENTE
37
3.17
S1
NUKLEASE
EXPERIMENTE
MIT
EINZELSTRAENGIGEN
DNA-PROBEN
38
3.18
AUTORADIOGRAPHIEN
38
3.19
CHEMIKALIEN
38
3.20
ANALYSE
DER
DATEN
MIT
COMPUTERN
39
4.
ERGEBNISSE
40
4.1
ISOLIERUNG
VON
FINGERPROTEIN
KODIERENDEN
CDNA
40
KLONEN
AUS
XENOPUS
LAEVIS
4.2
ISOLIERUNG
VON
XENOPUS
LAEVIS
FINGERPROTEIN
GENEN
53
4.3
STRUKTURANALYSE
DER
FINGERPROTEIN
KODIERENDEN
69
XENOPUS
LAEVIS
CDNA
KLONE
4.4
TRANSKRIPTION
DER
ZINKFINGER
GENE
WAEHREND
DER
79
EMBRYONALENTWICKLUNG
VON
XENOPUS
LAEVIS
4.5
STRUKTURELLE
ORGANISATION
DES
XFG
5-1
GENES
81
4.6
ALTERNATIV
GESPLEISSTE
CDNA
KLONE
DES
XFG
5-1
GENES
87
5.
DISKUSSION
92
5.1
STRUKTURELLE
ASPEKTE
DER
ZINKFINGER
PROTEINE
92
5.2
GENOMISCHE
ORGANISATION
DER
ZINKFINGER
GENE
96
5.3
RAEUMLICHE
UND
ZEITLICHE
VERTEILUNG
DER
ZINKFINGER
99
TRANSKRIPTE
5.4
BIOLOGISCHE
FUNKTION
DER
ZINKFINGER
PROTEINE
102
6,
ZUSAMMENFASSUNG
106
Z.
LITERATURVERZEICHNIS
108 |
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