Sequenzierung und Charakterisierung des Aufnahmesystems für zweiwertiges Eisen von Escherichia coli:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
5
2.1.
MATERIALIEN
5
2.1.1.
CHEMIKALIEN
5
2.1.2
MEDIEN
UND
PUFFER
6
2.1.3
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
8
2.2.
METHODEN
11
2.2.1.
DNA-STANDARDMETHODEN
11
2.2.2.
DNA-SEQUENZIERUNG
11
2.2.3.
TRANSFER
VON
LAMBDA-PLAQUES
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
12
2.2.4
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIGOXIGENIN
MARKIERTER
DNA
12
2.2.5.
ISOLIERUNG
VON
LAMBDAPHAGEN-DNA
12
2.2.6.
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
IM
T7-SYSTEM
13
2.2.7.
PROTEINLOKALISIERUNG
14
2.2.8.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
14
2.2.9.
EISENTRANSPORTVERSUCHE
15
2.2.10.
COMPUTERANALYSEN
16
3.
ERGEBNISSE
17
3.1.
DNA-SEQUENZIERUNG
17
3.2.
NUKLEOTIDSEQUENZ
DER/EO-GENREGION
18
3.3.
PROMOTORREGION
DES/EO-GENBEREICHS
24
3.4.
AMINOSAEURESEQUENZ
VON
FEOA
26
3.5.
AMINOSAEURESEQUENZ
VON
FEOB
26
3.6.
PROTEINEXPRESSION
28
3.6.1.
EXPRESSION
VON
FEOA
28
3.6.2.
EXPRESSION
VON
FEOB
28
3.7.
PROTEINLOKALISATION
30
3.8.
FUR-REGULATION
32
3.9.
KARTIERUNG
DES/EO-GENLOKUS
AUF
DEM
E.COLI
CHROMOSOMEN
32
3.9.1.
COTRANSDUKTION
VON/EO
UND
MALT
33
3.9.2.
HYBRIDISIERUNG
DES
GENBEREICHS
MIT
KOHARA
PHAGEN-DNA
33
3.9.3.
SEQUENZUEBERSCHNEIDUNG
MIT
BENACHBARTEN
GENEN
34
3.10.
SUBKLONIERUNG
DES/EO-OPERONS
VOM
LAMBDAPHAGEN
619
34
3.11.
SUBKLONIERUNG
DES/EOA-GENS
VOM
LAMBDAPHAGEN
619
35
3.12.
WEITERE
SUBKLONIERUNGEN
DES
/EOA-GENS
36
3.13.
CHARAKTERISIERUNG
DER/EO-MUTANTEN
37
3.13.1.
KOMPLEMENTATION
VON
/EOA-MUTANTEN
38
3.13.2.
KOMPLEMENTATION
VON
/EOSS-MUTANTEN
38
3.14.-
EISENTRANSPORTE
38
3.14.1.
FE
2+
-AUFNAHME
UNTER
AEROBEN
BEDINGUNGEN
39
3.14.2.
FE
2+
-AUFNAHME
UNTER
ANAEROBEN
BEDINGUNGEN
40
3.14.3.
FE
2+
-AUFNAHME
BEI
NICHT
REPRIMIERBAREN
(AEFIIR)
STAEMMEN
41
3.14.4.
FE
2+
'
AUFNAHME
IN
GEGENWART
VON
NITRAT
42
3.14.5.
"PULSE-CHASE"
EXPERIMENTE
MIT
UNMARKIERTEM
EISEN
43
4.
DISKUSSION
45
4.1.
DAS/EO-OPERON
45
4.2.
DAS
FEOB-PROTEIN:
DIE
TRANSLOKASE
IN
DER
CYTOPLASMAMEMBRAN
45
4.3.
DAS
FEOA-PROTEIN:
EIN
CYTOPLASMATISCHES
PROTEIN
UNBEKANNTER
FUNKTION
47
4.4.
DIE
ENERGETISIERUNG
DES
FE
2+
-TRANSPORT
50
4.5.
REGULATION
51
4.5.1.
FUR-REGULATION
52
4.5.2.
FNR-REGULATION
52
4.5.3.
WEITERE
MOEGLICHE
REGULATIONSMECHANISMEN
53
4.5.3.1.
NITRAT
ALS
AKTIVATOR
DES/EO-OPERONS?
53
4.5.3.2.
GIBT
ES
EINEN
WEITEREN
EISENABHAENGIGEN
REGULATOR?
56
4.6.
DIE
MOEGLICHE
BEDEUTUNG
VON
FEO
FUER
DIE
FNR-REGULATION
57
4.7.
KLONIERUNGSVERSUCHE
59
4.8.
KARTIERUNG
DES/EO-GENLOKUS
AUF
DEM
E.COLI
K12
CHROMOSOM
60
4.9.
FEO,
EIN
MODELL
60
72
5.
ZUSAMMENFASSUNG
62
6.
LITERATUR
64
7.
ANHANG |
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