Elektrophoretische und immunchemische Untersuchungen von Hopfenproteinen zur Sortendifferenzierung:
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1994
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|---|---|
| adam_text | - OAAE TECHNISCHE UNIVERSITAET MUENCHEN LEHRSTUHL FUER TECHNISCHE
MIKROBIOLOGIE UND TECHNOLOGIE DER BRAUEREI II ELEKTROPHORETISCHE UND
IMMUNCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN VON HOPFENPROTEINEN ZUR
SORTENDIFFERENZIERUNG KLAUS HELLER VOLLSTAENDIGER ABDRUCK DER VON DER
FAKULTAET FUER BRAUWESEN, LEBENSMITTELTECHNOLOGIE UND MILCHWIRTSCHAFT DER
TECHNISCHEN UNIVERSITAET MUENCHEN ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
EINES DOKTOR-INGENIEURS GENEHMIGTEN DISSERTATION VORSITZENDER: PRUEFER
DER DISSERTATION: UNIV.-PROF. DR. W. BACK L.UNIV.-PROF. DR. S.
DONHAUSER, PENS. 2.UNIV.-PROF. DR. L. NARZISS, EM. DIE DISSERTATION WURDE
AM 21.2.1994 BEI DER TECHNISCHEN UNIVERSITAET MUENCHEN EINGEREICHT UND
DURCH DIE FAKULTAET FUER BRAUWESEN, LEBENSMITTELTECHNOLOGIE UND MILCH-
WISSENSCHAFT AM 25.3.1994 ANGENOMMEN. INHALTSVERZEICHNIS: 1 EINLEITUNG 1
1.1 METHODEN DER HOPFENSORTENUNTERSCHEIDUNG 2 1.1.1 HANDBONITIERUNG 2
1.1.2 ANALYSE DER HOPFENOELE 3 1.1.3 ANALYSE DER BITTERSTOFFE 4 1.1.4
WEITERE METHODEN DER HOPFENSORTENDIFFERENZIERUNG 6 1.2 PROBLEMSTELLUNG 7
1.2.1 GRUNDSAETZLICHE UEBERLEGUNGEN ZUR HOPFENSORTENUNTERSCHEIDUNG 7 1.2.2
KRITERIEN ZUR AUSWAHL EINES GEEIGNETEN ANTIGENS FUER IMMUNCHEMISCHE TESTS
8 2 THEORIE: ELEKTROPHORETISCHE METHODEN 9 2.1 ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG (IEF) 9 2.1.1 ANALYTISCHE IEF 9 2.1.1.1 IEF MIT
TRAGENUNPHOLYTEN IN AGANUEGELEN (AGIF) 9 2.1.12 IEF MIT TRAEGERAMPHOLYTEN
IN POLYACRYLAMIDGELEN (PAGIF) 9 2.1.13 IEF MIT IMMOBILISIERTEN
PH-GRADIENTEN (IPG) 10 2.1.2 PRAEPARATIVE IEF 10 2.1.2.1 PRAEPARATIVE IEF
IN GRANULIERTEN GELEN 10 2.1.2.2 PRSPARATIVE IEF IN POLYACRYLAMIDGELEN
MIT IMMOBILISIERTEM PH-GRADIENT 10 2.2 NATIV-PAGE 10 2.3
SDS-ELEKTROPHORESE 11 2.4 DENSITOMETRIE 11 3 THEORIE: IMMUNCHEMIE 11 3.1
DIE BIOLOGISCHE BEDEUTUNG DES IMMUNSYSTEMS 11 3.2 IMMUNCHEMISCHE
ANALYSEN . 12 3.2.1 IMMUNPRAEZIPITATIONSTECHNIKEN 13 3.2.2 IMMUNOASSAYS
13 4 MATERIAL UND METHODEN 15 4.1 TECHNISCHE AUSRUESTUNG 15 4.1.1
VERMAEHLEN, PROBETEILEN UND MISCHEN 15 4.1.2 ZENTRIFUGEN 15 4.1.3 IEF,
NATIV-PAGE UND SDS-ELEKTROPHORESE 15 4.1.4 DENSITOMETER 16 4.1.5
GELCHROMATOGRAPHIE 16 4.1.6 IMMUNCHEMIE 16 4.1.7 IMMUNELEKTROPHORESE 16
4.1.8 SONSTIGES 17 4.2 VERBRAUCHSMATERIAL 17 43 METHODEN 19 4.3.1
PROBENEXTRAKTION 19 43.1.1 PROBENEXTRAKTION FUER DIE EIEKTROPHORETISCHEN
METHODEN 19 43.1.2 PROBENEXTRAKTION FUER DEN EUSA 19 4.3.2
PROTEINBESTIMMUNGEN 20 43.2.1 UV-METHODE NACH WARBURG 20 4322
MIKRO-LOWRY-METHODE 20 43.23 BESTIMMUNG VON ROHPROTEIN 20 4.3.3
ANALYTISCHE ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 20 433.1 IEF MIT
TRFIGERAMPHOLYTEN IN AGAROSEGELEN 20 433.2 IEF MIT TRAEGCNUNPHOLYTEN IN
POLYACRYLAMIDGELEN 21 4333 IEF MIT IMMOBILISIERTEN PH-GRADIENTEN 22
4.3.4 PRAEPARATIVE IEF 23 434.1 PRAEPARATIVE IEF IN GRANULIERTEN GELEN 23
43.4.2 PRAEPARATIVE IEF IN POLYACRYLAMIDGELEN MIT IMMOBILISIERTEM
PH-GRADIENT 24 4.3.5 NATIV-PAGE 25 4.3.6 SDS-ELEKTROPHORESE 25 4.3.7
ZWEIDIMENSIONALE ELEKTROPHORESE (2D) 26 4.3.8 VISUALISIERUNG DER
PROTEINE 27 43.8.1 COOMASSLE-FAERBUNGCN 27 43.8.1.1 COOMASSIE R-250 27
4.3.8.1.2 SERVA VIOLETT 49 27 43.8:13 SERVA W 27 43.8.1.4 COOMASSIE
R-250 MIT KUPFERVERSTAERKUNG 27 43.8.2 SILBERFAERBUNGEN 28 43.8.2.1
SILBERFAERBUNG NACH WILLOUGHBY 28 43.8.2.2 SILBERFAERBUNG NACH HEUKESHOVEN
28 4.3.9 ZYMOGRAMME 28 43.9.1 PEROXLDASEN (POD) * ANIARBUNG 28 43.9.2
ESTERASEN 28 43.93 PHOSPHATASEN 29 4.3.10 DENSITOMETRIE 29 4.3.11
GELPERMEATION 29 4.4 IMMUNCHEMLSCHE METHODEN 30 4.4.1 IMMUNISIEREN 30
4.4.2 ANTISERUMGEWINNUNG 30 4.4.3 ISOLIERUNG VON IGG MIT IMMOBILISIERTEM
PROTEIN A 31 4.4.4 BIOTINYLIERUNG 4.4.5 IMMUNDOPPELDIFFUSIONSTEST NACH
OUCHTERLONY 4.4.6 IMMUNELEKTROPHORESEN 4.4.6.1 ALLGEMEINE
ARBEITSSCHRITTE 4.4.6.2 ROCKET-IMMUNELEKTROPHORESE 4.4.63
UNE-IMMUNELEKTROPHORESE 4.4.6.4 LINE-ROCKET-INUNIINELEKTROPHORESE
4.4.6.5 KREUZIMMUNELEKTROFOKUSSIERUNG 4.4.7 ELEKTROBLOTTEN 33 4.4.8
ELISA 34 4.4.8.1 ALLGEMEINE ARBEITSSCHRITTE 34 4.4.8.2 DURCHFUEHRUNG DES
OPTIMIERTEN EUSA 35 5. HOPFENSORTENUNTERSCHEIDUNG MIT HILFE
ELEKTROPHORETISCHER METHODEN 37 5.1 PROBENEXTRAKTION 5.2 IEF 53
NATIV-PAGE 5.4 SDS-ELEKTROPHORESE 5.5 2D-ELEKTROPHORESE 5.6 ZYMOGRAMME
5.7 VERGLEICH VERSCHIEDENER HOPFENSORTEN 5.7.1 UNTERSUCHUNG
VERSCHIEDENER ERNTEJAHRE 5.7.2 EINFLUSS DES ERNTEZEITPUNKTS AUF DIE
HOPFENPROTEINE 5.7.3 ABHAENGIGKEIT DER PROTEINE VOM STANDORT DES HOPFENS
5.7.4 EINFLUSS DER STICKSTOFFDUENGUNG AUF DIE PROTEINE VERSCHIEDENER
HOPFENSORTEN 5.7.5 AUSWIRKUNGEN DER TEMPERATUR AUF DIE
PROTEINZUSAMMENSETZUNG 64 BEI HOPFENPULVERN 5.8 BESTIMMUNG VON
VERSCHIEDENEN HOPFENMISCHUNGEN 66 5.8.1 NACHWEIS VON BREWERS GOLD IN
ANDEREN HOPFENSORTEN 66 5.8.2 NACHWEIS VON HUELLER BITTERER IN ANDEREN
HOPFENSORTEN 71 5.8.3 NACHWEIS VON HOPFEN DES SAAZER-FORMENKREISES BZW.
HALLERTAUER MFR. 73 IN ANDEREN HOPFENSORTEN 5.9 DISKUSSION DER
ERGEBNISSE 73 6. HOPFENSORTENDIFFERENZIERUNG MIT IMMUNCHEMISCHEN
METHODEN 77 6.1 GEWINNUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON ANTISEREN ZUR
IMMUNCHEMISCHEN 77 HOPFENSORTENUNTERSCHEIDUNG 6.1.1 GEWINNUNG EINES
ANTISERUMS GEGEN BREWERS GOLD 77 6.1.2 GEWINNUNG EINES ANTISERUMS GEGEN
BREWERS GOLD 81 UND HUELLER BITTERER 6.1.3 GEWINNUNG EINES ANTISERUMS
GEGEN HOPFEN 82 DES SAAZER-FORMENKREISES UND HALLERTAUER MFR. 6.1.4
GEWINNUNG EINES ANTISERUMS ZUR HOPFENGRUPPENUNTERSCHEIDUNG 83 6.1.5
DISKUSSION DER ERGEBNISSE 88 6.2 ENTWICKLUNG EINES ELISA ZUR
HOPFENGRUPPENUNTERSCHEIDUNG 89 6.2.1 IGG-ISOLIERUNG 89 6.2.2
BIOTINYLIERUNG DES IGG 90 6.2.3 OPTIMIERUNG DES ELISA 90 6.23.1
BESTIMMUNG DER OPTIMALEN BESCHLCHTUNGSBEDINGUNGEN 91 6232 OPTIMIERUNG
DER PROBENINKUBATION 91 6.233 BESTIMMUNG DER OPTIMALEN KONZENTRATION UND
INKUBATION DES KONJUGATS 95 6.23.4 OPTIMIERUNG DER
DETERGENZIENKONZENTRATION IM WASCHPUFFER 97 6.23.5 BESTIMMUNG DER
OPTIMALEN KONZENTRATION UND INKUBATIONSZELT 98 VON EXTR- BZW.
STREPTAVIDLN-AIKALISCHER PHOSPHATASE 623.6 MESSGENAUIGKEIT UND UNTERE
NACHWEISGRENZE DES ELISA 99 6.23.7 OPTIMIERUNG DER EXTRAKTION 101 6.23.8
PRAEZISION DER EXTRAKTION 104 63 VERGLEICH VERSCHIEDENER HOPFENSORTEN 105
6.3.1 UNTERSUCHUNG VERSCHIEDENER ERNTEJAHRE 107 6.3.2 EINFLUSS DES
ERNTEZEITPUNKTS AUF DEN ANTIGENGEHALT 108 6.3.3 ABHAENGIGKEIT DES
ANTIGENGEHALTS VOM STANDORT DES HOPFENS 111 6.3.4 EINFLUSS DER
STICKSTOFFDUENGUNG AUF DEN ANTIGENGEHALT 113 VERSCHIEDENER HOPFENSORTEN
6.3.5 TEMPERATUREINFLUSS AUF DEN ANTIGENGEHALT BEI HOPFENPULVER 115 6.4
BESTIMMUNG VON VERSCHIEDENEN HOPFENMISCHUNGEN 118 6.4.1 NACHWEIS VON
HUELLER BITTERER IN ANDEREN HOPFENSORTEN 118 6.4.2 NACHWEIS VON PERLE IN
ANDEREN HOPFENSORTEN 123 6.5 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 125 7
ZUSAMMENFASSUNG 128 8 LITERATUR 131 9 ANHANG 152
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