Untersuchungen zur Biosynthese der Carotinoide und der daran beteiligten Enzyme bei Neurospora crassa:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1994
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-
5
-
INHALTSVERZEICHNIS
I
EINLEITUNG
.
9
II
MATERIAL
UND
ALLGEMEINE
METHODEN
.
22
1
ANZUCHT
VON
NEUROSPORA
.
22
2
SYNTHESE
DER
UNGESAETTIGTEREN
CAROTINOIDE
IM
IN-VITRO-VERSUCH
.
22
2.1
MEMBRANPROTEINE
DER
CAROTINOIDSYNTHESE
.
23
2.1.1
INDUKTION
UND
SYNTHESE
DER
ENZYME
.
23
2.1.2
EXTRAKTION
UND
ANREICHERUNG
DER
MEMBRANGEBUNDENEN
ENZYM
FRAKTION
.
24
2.1.3
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
.
25
2.2
MEMBRANLIPIDE
.
25
2.2.1
CHLOROFORM-METHANOL-EXTRAKTION
DER
LIPIDE
.
25
2.2.2
BESTIMMUNG
DER
PHOSPHOLIPIDMENGE
.
26
2.2.3
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
VON
LIPIDGEMISCHEN
.
26
2.3
ENZYMATISCHE
SYNTHESE
UND
GEWINNUNG
VON
^C-PHYTOEN
.
26
2.3.1
VERSEIFUNG
DES
R,S-[2-^
4
C]-MEVALONSAEURELACTONS
.
27
2.3.2
GGPP-IIEFERNDES
SYSTEM
.
27
2.3.3
^C-PHYTOENSYNTHESE
(KOMBINIERTER
ENZYMANSATZ)
.
28
2.3.4
EXTRAKTION
UND
AUFREINIGUNG
VON
14
C-PHYTOEN
.
29
2.3.4.1
ACETON-METHANOL-EXTRAKTION
DER
LIPOPHILEN
SUBSTANZEN
.
29
2.3.4.2
ABTRENNUNG
VON
14
C-PHYTOEN
.
29
2.4
IN-VITRO-CAROTINOIDSYNTHESE
MIT
14
C-PHYTOEN-LIPOSOMEN
.
30
2.4.1
PRAEPARATION
DER
L
4
C-PHYTOEN-LIPOSOMEN
.
30
2.4.2
INKUBATIONSANSAETZE
DES
IN-VITRO-VERSUCHS
.
31
2.5
EXTRAKTION
DER
SYNTHESEPRODUKTE
.
33
2.5.1
CHLOROFORM-METHANOL-EXTRAKTION
DER
LIPOPHILEN
SUBSTANZEN
.
33
2.5.2
TRENNUNG
DER
NEUTRALEN
UND
SAUREN
CAROTINOIDE
.
34
2.6
MESSUNG
VON
RADIOAKTIVITAET
PER
SZINTILLATIONSZAEHLER
.
34
3
SYNTHESE
DER
UNGESAETTIGTEREN
CAROTINOIDE
IM
IN-VIVO-VERSUCH
.
35
3.1
INDUKTION
UND
SYNTHESE
DER
ENZYME
MIT
ANSCHLIESSENDER
FARB
STOFFSYNTHESE
.
35
3.2
EXTRAKTION
DER
FARBSTOFFE
.
36
3.2.1
METHANOL-ACETON-EXTRAKTION
.
36
3.2.2
TRENNUNG
DER
NEUTRALEN
UND
SAUREN
CAROTINOIDE
.
37
-
6
-
3.3
ALUMINIUMOXID-SAEULENCHROMATOGRAPHIE
DER
NEUTRALEN
CAROTINOIDE
37
3.4
CELLULOSE-SAEULENCHROMATOGRAPHIE
DER
SAUREN
CAROTINOIDE
.
38
4
ANALYSE
DER
SYNTHESEPRODUKTE
AUS
DEN
IN-VITRO
UND
IN-VIVO-VER
SUCHEN
.
39
4.1
PHOTOMETRISCHE
ERFASSUNG
VON
ABSORPTIONSSPEKTREN
.
39
4.2
MENGENBESTIMMUNG
NICHTRADIOAKTIVER
CAROTINOIDE
.
39
4.2.1
MULTIKOMPONENTENANALYSE
DES
GEMISCHES
AUS
NEUTRALEN
CAROTI
NOIDEN
.
39
4.2.2
PHOTOMETRISCHE
ERFASSUNG
EINZELNER
CAROTINOIDE
.
39
4.2.3
BERECHNUNG
DER
EINZELNEN
CAROTINOIDMENGEN
.
40
4.3
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
VON
CAROTINOIDGEMI
SCHEN
.
41
4.3.1
AUFTRENNUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
CAROTINOIDEN
.
41
4.3.2
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
EINZELNER
RADIOAKTIVER
CAROTINOIDE
.
42
4.3.3
BESTIMMUNG
DES
VERHAELTNISSES
VON
15
CIS
UND
ALL-TRANS-PHY
TOEN
.
43
III
ERGEBNISSE
.
45
1
LIPIDABHAENGIGKEIT
DER
CAROTINOIDSYNTHETISIERENDEN
ENZYME
IM
IN
VITRO-VERSUCH
.
45
1.1
ZUSAMMENSETZUNG
DES
LIPIDGEMISCHES
AUS
NEUROSPORA
CRASSA
.
45
1.2
EINFLUSS
EXOGENER
LIPIDE
AUS
NEUROSPORA
CRASSA
.
46
1.3
ZUSAMMENSETZUNG
DER
VERWENDETEN
LIPIDGEMISCHE
AUS
GLYCINE
TNAX
.
49
1.4
TEST
VON
LIPIDGEMISCHEN
AUS
GLYCINE
MAX
.
51
2
ZEITABHAENGIGKEIT
DER
CAROTINOIDSYNTHESE
IM
IN-VITRO-VERSUCH
.
53
3
VERSUCHE
ZUR
ERHALTUNG
DER
CYCLASEAKTIVITAET
IM
IN-VITRO-VERSUCH.
56
3.1
TEST
VON
NICHT
EINGEFRORENEM
MEMBRANPROTEIN
.
56
3.2
TEST
VON
MEMBRANPROTEIN
AUS
SCHWAECHER
BLAULICHTINDUZIERTEM
PILZMYZEL
.
58
4
UNTERSUCHUNG
DER
AN
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
BETEILIGTEN
DEHY
DROGENASEREAKTIONEN
.
59
4.1
DAS
SUBSTRAT
DER
PHYTOENDEHYDROGENASE
.
59
4.1.1
BESTIMMUNG
DES
VERHAELTNISSES
VON
15-CIS
UND
ALL
TRANS
PHY
TOEN
.
60
4.1.2
HEMMUNG
DER
PHYTOENDEHYDROGENASE
DURCH
DIPHENYLAMIN
.
60
-
7
-
4.2
DEHYDRIERUNGSSCHRITTE
BEI
DER
PHYTOENMETABOLISIERUNG
.
62
4.2.1
HEMMUNG
DER
DEHYDROGENASEREAKTIONEN
IM
IN-VIVO-VERSUCH
DURCH
DIPHENYLAMIN
.
62
4.2.2
HEMMUNG
DER
DEHYDROGENASEREAKTIONEN
IM
IN-VITRO-VERSUCH
DURCH
DIPHENYLAMIN
.
64
5
UNTERSUCHUNG
DER
AN
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
BETEILIGTEN
CYCLA
SEREAKTIONEN
.
68
5.1
HEMMUNG
DER
CYCLASEAKTIVITAET
IM
IN-VIVO-VERSUCH
DURCH
NICO
TIN
.
68
5.2
UNTERSUCHUNG
DES
NEUROSPORAXANTHINS
.
70
IV
DISKUSSION
.
74
ABHAENGIGKEIT
DER
CAROTINOIDSYNTHETISIERENDEN
ENZYME
VON
DER
EXO
GENEN
LIPIDMENGE
UND
-ZUSAMMENSETZUNG
.
75
ABHAENGIGKEIT
DER
CAROTINOIDSYNTHESE
VON
DER
INKUBATIONSZEIT
.
79
AKTIVITAET
DER
CYCLASE
UND
DER
OXIDASE
IM
IN-VITRO-VERSUCH
.
80
DEHYDROGENASEREAKTIONEN
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
.
82
CYCLASEREAKTIONEN
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
.
86
NEUROSPORAXANTHIN
ALS
ENDPRODUKT
DER
CAROTINOIDBIOSYNTHESE
BEI
N.
CRASSA
.
87
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
89
VI
LITERATUR
.
92
DANKSAGUNGEN
.
103
LEBENSLAUF
105 |
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