Isolierung und Charakterisierung von Hemmstoffen der Thrombocytenaggregation aus Asco- und Basiodiomyceten:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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| Beschreibung: | Kaiserslautern, Univ., Diss., 1993 |
| Beschreibung: | 124 S. Ill., graph. Darst. |
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| adam_text | ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON HEMMSTOFFEN DER
THROMBOCYTENAGGREGATION AUS ASCO- UND BASIODIOMYCETEN. VOM FACHBEREICH
BIOLOGIE DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN ZUR VERLEIHUNG DES AKADEMISCHEN
GRADES DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN GENEHMIGTE DISSERTATION (D 386)
VORGELEGT VON KIRSTEN LORENZEN VORSITZENDER: 1. BERICHTERSTATTER: 2.
BERICHTERSTATTER: PROF. DR. H. HUBER PROF. DR. T. ANKE PROF. DR. J.
CULLUM TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE: 29. OKTOBER 1993
KAISERSLAUTERN 1993 1. EINLEITUNG 1 2. MATERIAL UND METHODEN 12 2.1.
CHEMIKALIEN 12 2.2. MEDIEN UND PUFFER 14 2.2.1. MEDIEN FUER PILZE UND
BAKTERIEN 14 2.2.2. MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 16 2.2.3. PUFFERLOESUNGEN 17
2.3. ORGANISMEN 19 2.3.1. TESTORGANISMEN FUER DIE BIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG 19 2.3.2. ZELLINIEN 20 2.3.3. VERMEHRUNG UND LAGERUNG
VON ZELLINIEN 20 2.3.4. BEARBEITETE BASIDIOMYCETEN- UND
ASCOMYCETENSTAEMME 20 2.4. FERMENTATION VON BASIDIOMYCETEN UND
ASCOMYCETEN 21 2.4.1. FERMENTATION UND GEWINNUNG DER ROHEXTRAKTE FUER DAS
SCREENING 21 2.4.2. SCREENING 21 2.4.3. FERMENTATION DER
PRODUZENTENSTAEMME UND GEWINNUNG DER 22 ROHEXTRAKTE 22 2.4.3.1. PH-WERT
23 2.4.3.2. ENZYMATISCHE BESTIMMUNG DES GLUCOSE- UND MALTOSEGEHALTES 23
2.4.3.3. BESTIMMUNG DES MALTOSEGEHALTS 23 2.4.3.4. MYCELTROCKENGEWICHT
23 2.5. METHODEN ZUR AUFREINIGUNG UND PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN 24
CHARAKTERISIERUNG DER WIRKSTOFFE 24 2.5.1. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 24
2.5.2. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 25 2.5.3. SPEKTROSKOPIE 25 2.6.
BIOLOGISCHE TESTMETHODEN 26 2.6.1. AGGREGATIONSTEST MIT THROMBOCYTEN 26
2.6.1.1. PRAEPARATION VON THROMBOCYTENREICHEM PLASMA AUS RINDERBLUT 26
2.6.1.2. PRAEPARATION VON THROMBOCYTENARMEM PLASMA 26 2.6.1.3.
AGGREGATIONSTEST MIT RINDERTHROMBOCYTEN 26 2.6.1.3.1. SCREENING TEST IN
96-LOCH-MICROTITERPLATTEN 26 2.6.1.3.2. TEST ZUR AGGREGATIONSKINETIK 27
2.6.1.3.3. AGGREGATIONSTEST MIT SERUMFREIEN RINDERTHROMBOCYTEN 27
2.6.1.4. GEWINNUNG VON HUMANEM THROMBOCYTENREICHEM PLASMA 28 2.6.2.
PHOSPHOLIPASE A2 28 2.6.3. FREISETZUNG VON CALCIUM DURCH THROMBOCYTEN 29
2.6.4. WEITERE BIOLOGISCHE TESTMETHODEN 30 2.6.4.1. CYTOTOXIZITAETSTEST
30 2.6.4.2. EINBAU VON RADIOAKTIV-MARKIERTEN VORSTUFEN DER MAKROMOLEKUEL-
SYNTHESE IN SAEUREFAELLBARES MATERIAL VON HL 60 ZELLEN 30 2.6.4.3.
HAEMOLYSETEST 31 2.6.4.4. MUTAGENITAETSTEST NACH AMES 31 2.6.4.5.
AGARDIFFUSIONSTEST 32 2.6.4.6. TEST ZUR ERMITTLUNG DER MINIMALEM
INHIBITORISCHEN KONZENTRATION (MIK) FUER VERSCHIEDENE MIKROORGANISMEN 32
2.6.4.7. BIOMIMETRISCHE REAKTION MIT CYSTEIN 33 3. ERGEBNISSE 3 4 3.1.
AGGREGATIONSTEST ZUM AUFFINDEN VON INHIBITOREN 34 3.1.1. IN VITRO
TESTSYSTEM 34 3.1.2. TEST ZUR AGGREGATIONSKINETIK 35 3.1.3.
AGGREGATIONSTEST IN 96-LOCH-MICROTITERPLATTEN 37 3.1.4. WIRKUNG
BEKANNTER PILZMETABOLITE AUF DIE AGGREGATION VON RINDERTHROMBOCYTEN 37
3.2. SCREENING UND AUSWAHL DER PRODUZENTENSTAEMME FUER DIE WEITERE
BEARBEITUNG 39 3.3. HEMMSTOFFE DER THROMBOCYTENAGGREGATION AUS
BASIDIOMYCETEN 40 3.3.1. 5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)-FURANON AUS CALYPTELLA
SPEC. TA 9039 40 3.3.1.1. PRODUKTIONSSTAMM CALYPTELLA SPEC. TA 9039 40
3.3.1.2. FERMENTATION VON CALYPTELLA SPEC. TA 9039 41 3.3.1.3.
ISOLIERUNG VON 5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)-FURANON 43 3.3.1.4.
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 43 3.3.1.4.1. RF-WERTE DER
ISOLIERTEN VERBINDUNG 43 3.3.1.4.2. ANALYTISCHE HPLC 44 3.3.1.4.3.
UVA/IS- UND IR-SPEKTROSKOPIE 45 3.3.1.4.4. NMR-UND MASSENSPEKTROSKOPIE
46 3.3.2. PANUDIAL AUS PANUS SPEC. TA 9096 46 3.3.2.1. PRODUKTIONSSTAMM
PANUS SPEC. TA 9096 46 3.3.2.2. FERMENTATION VON PANUS SPEC. TA 9096 47
3.3.2.3 ISOLIERUNG VON PANUDIAL UND NAEMATOLON 49 3.3.2.4.
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 50 3.3.2.4.1. RF-WERTE DER
ISOLIERTEN VERBINDUNG 50 3.3.2.4.2. ANALYTISCHE HPLC 50 3.3.2.4.3.
UVA/IS- UND IR-SPEKTROSKOPIE 51 3.3.2.4.4. NMR- UND MASSENSPEKTROSKOPIE
52 3.3.3. DIHYDROCOCHLIOCHINON B AUS NEOBULGAHA PURA HA A 4588 53
3.3.3.1. PRODUKTIONSSTAMM NEOBULGARIA PURA HA A 4588 53 3.3.3.2.
FERMENTATION VON NEOBULGARIA PURA HA A 4588 53 3.3.3.3 ISOLIERUNG VON
COCHLIOCHINON B UND DIHYDROCOCHLIOCHINON B 55 3.3.3.4.
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 56 3.3.3.4.1. RF-WERTE DER
ISOLIERTEN VERBINDUNG 56 3.3.3.4.2. ANALYTISCHE HPLC 56 3.3.3.4.3.
UVA/IS-UND IR-SPEKTROSKOPIE 57 3.3.3.4.4. NMR- UND MASSENSPEKTROSKOPIE
58 3.4. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER INHIBITOREN 59 3.4.1.
BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON 5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)- FURANON 59
3.4.1.1. WIRKUNG VON 5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)-FURANON AUF DIE AGGREGATION
VON RINDERTHROMBOCYTEN 59 3.4.1.1.1. COLLAGEN 59 3.4.1.1.2. ADP 60
3.4.1.1.3. THROMBIN 61 3.4.1.2. EINFLUSS VON
5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)-FURANON AUF DIE AGGREGATION VON
HUMANTHROMBOCYTEN 62 3.4.1.2.1. COLLAGEN 62 3.4.1.2.2. ADP 63 3.4.1.2.3.
THROMBIN 64 3.4.1.2.4. ARACHIDONSAEURE 65 3.4.1.2.5. RISTOCETIN 66
3.4.1.2.6. U 46 619 67 3.4.1.3. HEMMUNG DER PHOSPHOLIPASE A2 DURCH
5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)- FURANON 68 3.4.1.4. FREISETZUNG VON CALCIUM AUS
THROMBOCYTEN 70 3.4.1.5. CYTOTOXIZITAETSTEST 70 3.4.1.6. EINBAU VON
14C-MARKIERTEN VORSTUFEN IN MAKROMOLEKUELE VON ZELLEN 71 3.4.1.7.
HAEMOLYSETEST 71 3.4.1.8. MUTAGENITAETSTEST NACH AMES 72 3.4.1.9. TEST
ZUR ERMITTLUNG DER MINIMALEN INHIBITORISCHEN KONZENTRATION (MIK) BEI
BAKTERIEN UND PILZEN 72 3.4.1.10. BIOMIMETRISCHE REAKTION MIT CYSTEIN 72
3.4.2. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER INHIBITOREN PANUDIAL UND
NAEMATOLON AUS PANUS SPEC. 74 3.4.2.1. WIRKUNG VON PANUDIAL AUF DIE
AGGREGATION VON RINDERTHROMBOCYTEN 74 3.4.2.1.1. COLLAGEN 74 3.4.2.1.2.
ADP 75 3.4.2.1.3. THROMBIN 76 3.4.2.2. EINFLUSS VON PANUDIAL AUF DIE
AGGREGATION VON HUMANTHROMBOCYTEN 77 3.4.2.2.1. COLLAGEN 77 3.4.2.2.2.
ADP 78 3.4.2.2.3. THROMBIN 79 3.4.2.2.3. ARACHIDONSAEURE 80 3.4.2.2.5.
RISTOCETIN 81 3.4.2.2.6. U 46 619 82 3.4.2.3. EINFLUSS VON NAEMATOLON AUF
DIE AGGREGATION VON THROMBOCYTEN 84 3.4.2.4. HEMMUNG DER PHOSPHOLIPASE
A2 DURCH NAEMATOLON UND PANUDIAL 85 3.4.2.5. FREISETZUNG VON CALCIUM AUS
THROMBOCYTEN 86 3.4.2.6. CYTOTOXIZITAETSTEST 86 3.4.2.7. EINBAU VON
14C-MARKIERTEN VORSTUFEN IN MAKROMOLEKUELE VON ZELLEN 86 3.4.2.8.
HAEMOLYSETEST 88 3.4.2.9. MUTAGENITAETSTEST NACH AMES 88 3.4.2.10. TEST
ZUR ERMITTLUNG DER MINIMALEN INHIBITORISCHEN KONZENTRATION (MIK) BEI
BAKTERIEN UND PILZEN 88 3.4.2.11. BIOMIMETRISCHE REAKTION MIT CYSTEIN 90
3.4.3. BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON DIHYDROCOCHLIOCHINON B 90
3.4.3.1. EINFLUSS VON DIHYDROCOCHLIOCHINON B AUF DIE AGGREGATION VON
THROMBOCYTEN 90 3.4.3.2. CYTOTOXIZITAETSTEST 90 3.4.3.3. HAEMOLYSETEST 91
3.4.3.4. MUTAGENITAETSTEST NACH AMES 91 3.4.3.5. AGARDIFFUSIONSTEST (ADT)
MIT VERSCHIEDENEN BAKTERIEN UND PILZEN 91 3.4.3.6. BIOMIMETRISCHE
REAKTION MIT CYSTEIN 92 4. DISKUSSION 93 4.1. TESTSYSTEM 93 4.2
SCREENING 96 4.3. FERMENTATION DER PRODUZENTENSTAEMME 97 4.4.
SIGNALTRANSMISSION DER THROMBOCYTEN BEI DER AGGREGATION 98 4.5.
5-HYDROXY-3-VINYL-2(5H)-FURANON, EIN NEUER HEMMSTOFF DER
THROM-BOCYTENAGGREGATION AUS CALYPTELLA SPEC. 103 4.5.1. HEMMUNG DER
AGGREGATION VON THROMBOCYTEN DURCH HVF 103 4.6. PANUDIAL UND NAEMATOLON
AUS PANUS SPEC. 108 4.6.1. HEMMUNG DER THROMBOCYTENAGGREGATION DURCH
PANUDIAL UND NAEMATOLON 110 4.7. DIHYDROCOCHLIOCHINON B AUS NEOBULGARIA
PURA 111 4.7.1. HEMMUNG DER AGGREGATION VON THROMBOCYTEN DURCH
DIHYDROCOCHLIOCHINON B 112 4.8. WEITERE BIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZU
DEN ISOLIERTEN SUBSTANZEN 113 5. ZUSAMMENFASSUNG 115 6. LITERATUR 116 7.
ANHANG 124
|
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