Vergleichende Messung der Freisetzung des von Willebrand Faktors aus humanen Nabelschnurvenen-Endothelzellen mittels ELISA und Fluoreszenzmikroskopie:
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1993
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| Beschreibung: | Münster (Westfalen), Univ., Diss., 1993 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
ABKUERZUNGEN
I. EINLEITUNG
1. DIE BLUTGERINNUNG. 1
1.1. DIE PHYSIOLOGISCHE BEDEUTUNG DER PRIMAEREN UND SEKUNDAEREN .
HAEMOSTASE.1
1.2 DAS PLASMATISCHE GERINNUNGSSYSTEM.4
1.2.1 DAS INTRINSISCHE GERINNUNGSSYSTEM.5
1.2.2 DAS EXTRINSISCHE GERINNUNGSSYSTEM.7
1.2.3 DIE GEMEINSAME ENDSTRECKE.8
1.2.4 DIE INHIBITOREN DER PLASMATISCHEN GERINNUNG.9
1.3 DIE FIBRINOLYSE.10
1.3.1 DAS PLASMIN UND SEINE AKTIVATOREN.10
1.3.2 DIE INHIBITION DER FIBRINOLYSE.11
1.4 DIE ROLLD DES GEFAESSWANDENDOTHELS INNERHALB DES GERINNUNGS- UND
FIBRINOLYSESYSTEMS.11
1.4.1 PROKOAGULATORISCHE EIGENSCHAFTEN DES ENDOTHELS.12
1.4.2 ANTIKOAGULATORISCHE EIGENSCHAFTEN DES ENDOTHELS.IS
2. DER VON WILLEBRAND
FAKTOR.20
2.1 BIOSYNTHESE UND STRUKTUR DESVWF.20
2.2 ROLLE DES VON WILLEBRAND FAKTORS IN DER HAEMOSTASE.24
2.2.1 VWF UND PLAETTCHENADHAESION.25
2.2.2 WEITERE BINDUNGSMOEGLICHKEITEN DES VWF.26
2.2.3 DER FAKTOR VIII /VWF-KOMPLEX.27
2.2.4 DAS VON WILLEBRAND-JUERGENS-SYNDROM (VWJS).27
2.3 ANALYSEMETHODEN FUER DEN VWF.28
2.3.1 QUANTITATIVE ANALYSE DES VWF.28
2.3.2 QUALITATIVE ANALYSE DES VWF.29
2.3.3 FUNKTIONELLE TESTE.30
3. ZIEL DER ARBEIT.31
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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II. MATERIAL UND METHODEN
1. ENTWICKLUNG EINES ELISA FUER HUMANEN VON WILLEBRAND FAKTOR.33
1.1 THEORIE UND TESTPRINZIP DES VERWENDETEN ELISA.33
1.2 SCHRITTE DER ENTWICKLUNG DES ELISA.35
1.2.1 ERMITTLUNG DER OPTIMALEN ANTIGEN - UND
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN.35
1.2.2 ERMITTLUNG DER OPTIMALEN SUBSTRATREAKTIONSZEIT.37
1.3 DER ELISA FUER VON WILLEBRAND FAKTOR DER FA. BOEHRINGER.
MANNHEIM.38
1.3.1 TESTPRINZIP DES ELISA.38
1.3.2 REAGENTIEN UND PIPETTIERSCHEMA DES ELISA.39
1.3.3 OPTIMIERUNG DES ELISA.40
2. INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ ZUM NACHWEIS DES VON WILLEBRAND
FAKTORS.41
2.1 TESTPRINZIP DER INDIREKTEN IMMUNFLUORESZENZ.41
2.2 REAGENTIEN UND DURCHFUEHRUNG DER ANFAERBUNG VON KULTIVIERTEN.
HUVEC 41
2.2.1 REAGENTIEN.41
2.2.2 DURCHFUEHRUNG.42
2.3 DIE FLUORESZENZMIKROSKOPIE.43
2.3.1 AUFBAU DER MESSEINRICHTUNG.43
2.3.2 BEDIENUNG UND EINSTELLUNG DER MESSEINRICHTUNG.44
2.3.3 DURCHFUEHRUNG DER MESSUNGEN.45
3. DIE EIEKTOPHORETISCHE DARSTELLUNG DES VON WILLEBRAND FAKTORS.46
3.1 TESTPRINZIP DER ELEKTROPHORESE.46
3.2 DIE SDS-AGAROSEGEL-ELEKTOPHORESE.46
3.2.1 HERSTELLUNG EINES DISKONTINUIERLICHEN SDS-AGAROSE-GELS.47
3 .2.2 GEWINNUNG DER PROBEN FUER DIE ELEKTROPHORESE.48
3.2.3 DURCHFUEHRUNG DES ELEKTROPHORESE-LAUFES.48
3.2.4 ELEKTROBLOTTING DER ELEKTROPHORESEGELE.49
3.2.5 DETEKTIERUNG DER GEBLOTTETEN PROTEINE.51
4. ENDOTHELZELLZUCHT UND PRIPARATION DER STIMULATOREN.52
4.1 DIE ENDOTHELZELLZUCHT.52
4.2 PRAEPARATION DER STIMULATOREN.52
III. ERGEBNISSE
1. ENTWICKLUNG UND OPTIMIERUNG DES ELISA FUER HUMANEN VWF.54
1.1 OPTIMIERUNG DER VERWENDETEN ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN.54
1.2 OPTIMIERUNG DER SUBSTRATREAKTIONSZEIT.57
1.3 UEBERPRUEFUNG DES ELISA MIT HILFE DES KOMMERZIELLEN ELISA DER.
FA. BOEHRINGER MANNHEIM.58
2. MESSUNG DER VWF-FREISETZUNG AUS HUMANEN ENDOTHELZELLEN.
MITTELS ELISA.^.60
2.1 ZEITABHAENGIGE VWF-FREISETZUNG.60
2.2 KONZENTRATIONSABHAENGIGE VWF-FREISETZUNG.63
2.3 HEMMUNG DER THROMBIN-STIMULIERTEN VWF-FREISETZUNG.65
2.4 ELEKTROPHORETISCHE DARSTELLUNG DES VON WILLEBRAND FAKTORS.68
3. ERGEBNISSE DER FLUORESZENZMIKROSKOPISCHEN MESSUNGEN.71
3.1 QUALITATIVE DARSTELLUNG DES VWF IN DEN HUVEC.71
3.2 VERGLEICHENDE MESSUNGEN DER VWF-FREISETZUNG MITTELS ELISA UND
FLUORESZENZMIKROSKOPIE.72
3.2.1 EXTRAZELLULAERE MESSUNG DER VWF-FREISETZUNG MITTELS ELISA.73
3 .2.2 INTRAZELLULAERE MESSUNG DER VWF-FREISETZUNG MITTELS.
FLUORESZENZMIKROSKOPIE.74
IV. DISKUSSION
1. UNTERSUCHUNGEN MIT DEM ELISA .79
2. UNTERSUCHUNGEN MIT DER FLUORESZENZMIKROSKOPIE.84
V. LITERATURVERZEICHNIS.87
DANKSAGUNG.103
LEBENSLAUF.104 |
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