Hormonabhängige Expression retroviraler Gene in einer menschlichen Mammakarzinomzellinie und Entwicklung monoklonaler Antikörper zum Nachweis tumorspezifischer Proteine:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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| Beschreibung: | Frankfurt (Main), Univ., Diss., 1994 |
| Beschreibung: | 211 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
VORWORT
5
1.
EINLEITUNG
8
1.1.
VIRUSAETIOLOGIE
BEI
KARZINOMEN
11
1.2.
AKTIVIERUNG
VON
PROTO-ONKOGENEN
21
1.3.
INAKTIVIERUNG
VON
TUMORSUPPRESSORGENEN
28
1.4.
MEMBRANANTIGENE
ALS
TUMORMARKER
30
1.5.
ONKOFOETALE
ANTIGENE
ALS
TUMORMARKER
33
1.5.1.
ALPHAFETOPROTEIN
35
1.5.2.
KARZINOEMBRYONALES
ANTIGEN
36
1.5.3.
BETA-ONKOFOETALES
ANTIGEN
37
1.5.4.
GAMMA-FETOPROTEIN
37
1.5.5.
FOETALES
SULFOGLYKOPROTEIN
37
2.
THEMA
UND
ABGRENZUNG
DER
ARBEIT
40
3.
MATERIAL
42
3.1.
VERWENDETE
GERAETE
42
3.2.
ARBEITSMATERIALIEN
43
3.3.
CHEMIKALIEN
44
3.3.1.
VERWENDETE
LOESUNGEN
45
3.4.
MAEUSE
45
3.5.
ZELLKULTUREN
46
3.5.1.
ZELLINIEN
46
3.5.1.1.
T47D-ZELLEN
46
3.5.1.2.
P3-X-63-AG8.653
MAUS-MYELOMZELLEN
46
3.5.2.
ZELLKULTURMEDIEN
47
3.5.3.
HILFSREAGENZIEN
UND
ZUSAETZE
ZUR
ZELLKULTIVIERUNG
48
4.
METHODEN
49
4.1.
KULTURBEDINGUNGEN
49
4.1.1.
KULTIVIERUNG
DER
T47D-ZELLEN
49
4.1.1.1.
HORMONSTIMULATION
DER
T47D-ZELLEN
49
4.1.2.
KULTIVIERUNG
DER
P3-X-63-AG8.653-ZELLEN
50
4.1.3.
KULTIVIERUNG
VON
HYBRIDOMAZELLEN
50
4.1.4.
KONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
51
4.1.5.
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
51
4.1.6.
NACHWEIS
VON
MYCOPLASMEN/ACHOLEPLASMEN
51
4.2.
ZENTRIFUGATIONEN
52
4.2.1.
DIFFERENTIELLE
SEDIMENTATION
52
4.2.2.
DICHTEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATION
52
4.3.
PROTEINISOLIERUNG
54
4.3.1.
MEMBRANPROTEINISOLIERUNG
AUS
T47D-ZELLEN
UND
GEWEBE
54
4.4.
QUANTITATIVE
PROTEINBESTIMMUNGEN
56
4.4.1.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
56
4.4.2.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
57
4.4.3.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
ELEKTROLYTLOESUNGEN
58
4.4.4.
DIALYSE
VON
PROBEN
59
4.4.5.
KONZENTRIERUNG
VON
PROBEN
60
4.5.
BESTIMMUNG
DER
DNA-POLYMERASE-AKTIVITAET
61
4.5.1.
LONENPRAEFERENZ
DER
REVERSEN
TRANSKRIPTASE
66
4.6.
PROTEINISOLIERUNGEN
67
4.6.1.
FAELLUNGSMETHODEN
67
4.6.I.I.
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
67
4.7.
ELEKTROPHORETISCHE
ARBEITSMETHODEN
68
4.7.1.
POLYACRYLAMID-ELEKTROPHORESE
(PAGE)
68
4.7.1.1.
NATIVE-POLYACRYLAMID-ELEKTROPHORESE
68
4.7.1.2.
SDS-POLYACRYLAMID-ELEKTROPHORESE
69
4.7.1.3.
MINIGEL
70
4.7.1.4.
POLYACRYLAMID-GRADIENTEN-GEL
70
4.7.2.
ELEKTROELUTION
73
4.7.3.
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
73
4.7.4.
FAERBEMETHODEN
FUER
POLYACRYLAMIDGELE
75
4.7.4.1.
COOMASSIE-FAERBUNG
75
4.7.4.2.
SILBERFAERBUNG
76
4.7.5.
BLOTTEN
VON
PROTEINEN,
DNA
UND
RNA
77
4.7.5.I.
WESTERN-BLOTTING
77
4.7.5.2.
TUSCHEFAERBUNG
79
4.7.6.
IMMUNO-BLOTTING
80
4.8.
ELISA-TEST
82
4.9.
IMMUNOHISTOLOGISCHE
METHODEN
84
4.10.
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
85
4.10.1.
LONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
86
4.10.2.
AFFINITAETS-CHROMATOGRAPHIE
87
4.10.2.1.
PROTEIN-G-SEPHAROSE-CHROMATOGRAPHIE
88
4.10.2.2.
LENTIL-LECTIN-SEPHAROSE-CHROMATOGRAPHIE
89
4.11.
HERSTELLUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
90
4.11.1.
IMMUNISIERUNG
94
4.11.2.
FUSION
VON
MURINEN
B-LYMPHOZYTEN
UND
MURINEN
MYELOMZELLEN
96
4.11.3.
REINIGUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
97
4.11.3.1.
PROTEIN-G-SEPHAROSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
97
4.11.4.
FITC-MARKIERUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
98
5.
ERGEBNISSE
100
5.1.
ISOLIERUNG
VON
RETROVIRALEN
PARTIKELN
AUS
T47D
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
102
5.1.1.
NACHWEIS
EINER
RT-AKTIVITAET
IN
GEREINIGTEN
PAR
TIKELN
AUS
T47D-ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
104
5.1.2.
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
EXOGENER
MATRIZENPRIMER
106
5.1.3.
ENDOGENER
TEST
AUF
POLYMERASE-AKTIVITAET
108
5.1.4.
REINIGUNG
DER
REVERSEN
TRANSKRIPTASE
DURCH
LONEN
AUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
110
5.1.4.1.
BESTIMMUNG
DER
MATRIZENSPEZIFITAET
UND
DER
LONEN
PRAEFERENZ
DER
GEREINIGTEN
RT
113
5.1.5.
HORMONABHAENGIGE
EXPRESSION
DER
REVERSEN
TRANS
117
KRIPTASE
5.2.
MURINE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
ZUM
NACHWEIS
VON
124
TUMORSPEZIFISCHEN
PROTEINEN
IN
HUMANEN
MAMMAKAR
ZINOMEN
5.2.1.
CHARAKTERISIERUNG
EINES
TUMORSPEZIFISCHEN
ANTIGENS
126
IN
HUMANEN
MAMMATUMORZELLEN
DURCH
MAK
H23
5.2.1.1.
-
IMMUNOREAKTION
DES
200KD
PROTEINS
MIT
SEREN
VON
139
PATIENTINNEN
MIT
MAMMAKARZINOM
5.2.2.
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
MURINEN
MONO
141
KLONALEN
ANTIKOERPERS
C7C
GEGEN
RT-AKTIVE
FRAKTIONEN
AUS
HORMONSTIMULIERTEN
T47D-KULTURUEBERSTAENDEN
5.3.
BIOCHEMISCHE
UND
IMMUNOHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCH
154
UNGEN
ZUR
LOKALISIERUNG
DER
IMMUNOSPEZIFISCHEN
PRO
TEINE
IN
MAMMAKARZINOMZELLEN
UND
MENSCHLICHEN
MAMMATUMOREN
5.3.1.
LOKALISIERUNG
DER
IMMUNOSPEZIFISCHEN
PROTEINE
DER
154
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
C7C
UND
H23
BEI
T47D-ZELLEN
DURCH
FITC-MARKIERUNG
5.3.2.
IMMUNOHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LOKALI
158
SIERUNG
DER
IMMUNOSPEZIFISCHEN
PROTEINE
DES
MONO
KLONALEN
ANTIKOERPERS
H23
IN
MENSCHLICHEN
MAMMATUMOREN
6.
DISKUSSION
163
7.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
177
8.
LITERATURVERZEICHNIS
181
9.
VERWENDETE
ABKUERZUNGEN
210
ANHANG
LEBENSLAUF
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG |
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