Isolierung und Charakterisierung von Aktin aus Kressewurzeln und Herstellung monoklonaler Anti-Aktin-Antikörper:
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1993
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Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1993 (Nicht für den Austausch) |
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
2 MATERIAL UND METHODEN
2.1 PFLANZENMATERIAL
2.2 PFLANZENANZUCHT
2.3 PRAEPARATION LOESLICHER PROTEINE
2.4 PROTEINBESTIMMUNG
2.5 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
2.5.1 STAMMLOESUNGEN DER ELEKTROPHORESE
2.5.2 HERSTELLUNG DER GELE
2.5.3 PROBENVORBEREITUNG UND PROTEINAUFTRENNUNG
2.5.4 SILBERFAERBUNG
2.6 BLOT-VERFAHREN
2.6.1 WESTEM-BLOT
2.6.2 ' DOT-BLOT
2.7 IMMUNOBLOT
2.8 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG (IEF)
2.9 DNASE I- SEPHAROSE SAEULE
2.10 ELUTIONSVERFAHREN DER DNASE I- AFFINITAETSCHROMATO
GRAPHIE
2.11 AKTIN-INTAKTHEITSBESTIMMUNG
2.12 EINENGEN DER PROBEN
2.13 MONOKLONALE ANTIKOERPER (MAK)
2.13.1 IMMUNISIERUNGSSCHEMA
2.13.2 BLUTSEREN
2.13.3 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR
2.13.4 ZELLZAHLBESTIMMUNG
2.13.5 GEWINNUNG VON MAUS-PERITONEAL-MAKROPHAGEN
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.13.6 MYELOMZELLEN
2.13.7 FUSION
2.13.8 KULTIVIERUNG
2.13.9 EINFRIEREN UND AUFTAUEN
2.14 SCREENING
2.14.1 SUBKLASSENTEST
2.14.2 ELISA
2.14.3 IMMUNMARKIERUNG
2.15 KLONIERUNG
2.16 IMMUNFLUORESZENZ
2.16.1 KRESSEWURZELN
2.16.2 CHARA AUSTRALIS
2.16.2.1 ANTIKOERPERMARKIERUNGEN
2.16.2.2 RHODAMINYL-PHALLOIDIN I (RLP-I) MARKIERUNGEN
2.17 ZUSAMMENFASSUNG DER VERWENDETEN ANTIKOERPER
3 ERGEBNISSE
3.1 IMMUNBIOCHEMISCHER NACHWEIS VON AKTIN
3.1.1 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE UND
IMMUNOBLOT
3.1.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG UND IMMUNOBLOT
3.1.3 ZUSAMMENFASSUNG
3.2 ANREICHERUNG UND REINIGUNG VON AKTIN
3.2.1 ELUTIONSVERFAHREN
3.2.1.1 TESTLAUF DER DNASE I-SEPHAROSE SAEULE
3.2.1.2 AKTINELUTION DURCH ZUGABE VON 2 M HARNSTOFF
3.2.1.3 AKTINELUTION DURCH ZUGABE VON 2 MM EGTA
3.2.2 ZUSAMMENFASSUNG
3.3 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER EGTA-FRAKTION
3.3.1 IMMUNMARKIERUNG
3.3.2 ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG
3.3.3 AKTIN-INTAKTHEIT
3.3.4 ZUSAMMENFASSUNG
3.4 GEWINNUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER 50
3.4.1 EINENGEN DER PROBEN 51
3.4.2 IMMUNISIERUNGSVERLAUF 52
3.4.2.1 ELISA 52
3.4.2.2 IMMUNOBLOT 53
3.4.2.3 ZUSAMMENFASSUNG 54
3.4.3 CHARAKTERISIERUNG NEU GEWONNENER ANTIKOERPER 54
3.4.3.1 SUBKLASSENTEST 55
3.4.3.2 DIVERSE NEUE ANTIKOERPER 56
3.4.3.3 IMMUNGLOBULIN 2AKOF1 ^ 58
3.4.3.4 IMMUNGLOBULIN AKOE10 59
3.4.3.5 IMMUNGLOBULIN CRAB 63
3.4.3.6 IMMUNGLOBULIN CRA 66
3.5 IMMUNFLUORESZENZDARSTELLUNGEN MIT KAEUFLICHEN ANTI- 70
AKTIN-ANTIKOERPEM UND RHODAMINYL-PHALLOIDIN
3.6 ZUSAMMENFASSUNG 74
4 DISKUSSION 75
4.1
YY
REINIGUNG VON AKTIN DER KRESSEWURZEL 75
4.2 IMMUNOGENITAET DES ANTIGENS 79
4.3 BIOCHEMISCHE UND CYTOLOGISCHE NACHWEISVERFAHREN VON 82
AKTIN
4.4 CHARAKTERISIERUNG DER GEWONNENEN ANTIKOERPER 85
4.5 ANTI-AKTIN-BINDUNGSPROTEIN-ANTIKOERPER (CRAB) 87
4.6 ANTI-AKTIN-ANTIKOERPER (CRA) 89
4.7 ZUSAMMENFASSENDE BEWERTUNG UND AUSBLICK 93
5 ZUSAMMENFASSUNG 95
6 ABKUERZUNGEN 98
7 LITERATURVERZEICHNIS 100 |
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