Sicherheitsaspekte der Gentechnologie: Verwandtschaft und Variabilität der Genome des Cryptophlebia leucotreta Granulosevirus und des Cydia pomonella Granulosevirus
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
CHEMIKALIEN
UND
LABORMATERIALIEN
9
2.2
VLRUS-GENOTYPEN
10
2.3
PLASMIDE
UND
BAKTERIENSTAEMME
11
2.4
STERILISATIONSVERFAHREN
11
2.5
MEDIEN
UND
ZUSAETZE
11
2.6
RESTRIKTIONSVERDAU
UND
GELELEKTROPHORESE
VON
NUKLEINSAEUREN
11
2.7
REINIGUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
GELEN
12
2.7.1
PHENOLISIERUNG
UND
ETOH-FAELLUNG
VON
DNA
12
2.7.2
GLASMILCH-REINIGUNG
13
2.7.3
BIOTRAP
13
2.8
KONZENTRATLONS-UND
REINHEITSBESTIMMUNG
DER
DNA
13
2.9
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
14
2.9.1
VEKTOR
UND
INSERTVORBEREITUNG
14
2.9.2
KOMPETENTE
ZELLEN
UND
TRANSFORMATION
14
2.10
DNA-PRAEPARATLONEN
16
2.10.1
MINLPRAEPARATION
VON
PLASMLD-DNA
16
2.10.2
PLASMIDPRAEPARATION
FUER
SEQUENZIERUNG
16
2.10.3
MIDLPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
17
2.10.4
PRAEPARATION
VON
VIRUS-DNA
18
2.10.5
PRAEPARATION
GENOMISCHER
INSEKTEN-DNA
AUS
LARVEN
18
2.11
DNA-TRANSFER
AUF
NYLONMEMBRAN
19
2.11.1
SOUTHERN-BLOT
19
2.11.2
KOLONIE-BLOT
20
2.11.3
DOT-BLOT
20
2.12
DNA-HYBRIDISIERUNG
21
2.12.1
NICHT-RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
21
2.12.2
HYBRIDISIERUNG
UND
DETEKTION
22
2.13
SYNTHESE
UND
PRAEPARATION
VON
OLLGONUKLEOTLDEN
23
2.14
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
25
2.14.1
HERSTELLUNG
VON
UNIDIREKTLONALEN
DELETIONSKLONEN
25
2.14.2
SEQUENZIERREAKTION
27
2.14.3
ELEKTROPHORESE
UND
FIXIERUNG
28
2.15
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
29
2.16
COMPUTERAUSWERTUNG
30
3.
ERGEBNISSE
31
3.1
KONSTRUKTION
EINER
RESTRIKTIONSKARTE
VON
CIGV
31
3,1.1
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
VON
CIGV-CV3
31
3.1.2
ORIENTIERUNG
DER
RESTRIKTIONSKARTE
VON
CIGV-CV3
46
3.1.3
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
VON
CIGV-CV4
49
3.1.4
IDENTIFIZIERUNG
REPETITIVER
SEQUENZEN
IN
CIGV-CV3
53
3.2
VERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN
CIGV
UND
CPGV
54
3.2.1
SEMI-QUANTITATIVE
DOT-BLOT-HYBRIDLSLERUNG
ZWISCHEN
CIGV
UND
CPGV-DNA
54
3.2.2
LOKALISIERUNG
HOMOLOGER
GENOMREGIONEN
56
3.2.3
SEQUENZIERUNG
KONSERVIERTER
GENOMREGIONEN
BEI
CIGV-CV3
60
3.2.3.1
SEQUENZANALYSE
DES
GRANULIN-GENS
60
3.2.3.2
SEQUENZANALYSE
DER
GENOMREGION
DES
DNA-BINDUNGS-PROTEINS
66
3.3
REKOMBINATIONSSTUDIEN
VON
CIGV
UND
CPGV
DURCH
KOINFEKTION
VON
C.
LEUCOTRETA
74
3.3.1
ISOLIERUNG
VON
GENOTYPEN
DURCH
RN-V/VO-KLONIERUNG
74
3.3.2
PCR-SCREENING
NACH
CIGV/CPGV-REKOMBLNANTEN
IM
GRANULIN-GEN
77
3.4
CHARAKTERISIERUNG
VERAENDERTER
CIGV
UND
CPGV-GENOTYPEN
84
3.4.1
RESTRIKTIONSANALYSE
VOM
CIGV-MCI3
84
3.4.2
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
DER
VERAENDERTEN
CPGV
GENOTYPEN
MCP5,
MCP4
UND
MCP10
85
3.4.3
CHARAKTERISIERUNG
VON
MCP5
87
3.4.3.1
HERKUNFT
DER
INSERTION
VON
MCP5
87
3.4.3.2
SUBKLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
DER
INSERTION
TCI4.7
90
3.4,3.3
SEQUENZANALYSE
VON
TCI4.7
UND
DES
INTEGRATIONSORTES
92
3.4.4
CHARAKTERISIERUNG
VON
MCP4
100
3.4.4.1
SUBKLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
DER
INSERTION
VON
MCP4
100
3.4.4.2
BESTIMMUNG
DER
HERKUNFT
DER
INSERTION
VON
MCP4
103
3.4.4.3
SEQUENZANALYSE
DER
INSERTION
TCP3.2
104
3.4.5
HOMOLOGIEN
VON
TCI4.7
UND
TCP3.2
ZU
INVERTEBRATEN-T
RANSPOSONS
110
4.
DISKUSSION
116
4.1
RESTRIKTIONSKARTIERUNG
VON
CIGV
116
4.2
VERWANDTSCHAFT
ZWISCHEN
CIGV
UND
CPGV
118
4.3
REKOMBINATIONSSTUDIEN
ZWISCHEN
CIGV
UND
CPGV
126
4.4
TRANSPOSONINTEGRATION
IN
DIE
GENOME
VON
CIGV
UND
CPGV
128
4.5
SCHLU
SSFOLGERUNGEN
139
5.
ZUSAMMENFASSUNG
142
6.
LITERATUR
145 |
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