Verfügbarkeit: Glutathiontransferase

Glutathiontransferase: molekularbiologische Studien an Enzymen der Klasse pi aus Rind und Schwein ; Expression, Isolierung und Kristallisation der rekombinanten Glutathiontransferase von Schistosoma japonicum (rGTSj26)

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Schäffer, Jörg (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	München Diss.-Verl. NG-Kopierladen 1994
Schlagworte:	Kristallisation Schistosoma japonicum Glutathiontransferasen Genklonierung Isolierung > Chemie Schwein Molekularbiologie Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	196 S. Ill., graph. Darst.
ISBN:	3928536214

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS I 1 EINLEITUNG . . 1 1.1 HISTORISCHES, ALLGEMEINE PHYSIOLOGISCHE, PHARMAKOLOGISCHE UND OEKOLOGISCHE BEDEUTUNG DER GLUTATHIONTRANSFERASEN . 1 1.1.1 HISTORISCHES UND DERZEITIGE WISSENSCHAFTLICHE AKTIVITAETEN UND ZUSAMMENARBEITEN AUF DEM GEBIET DER GHITATHIONTRANSFERASE-FORSCHUNG . 1 1.1.2 ALLGEMEINE PHYSIOLOGISCHE UND PHARMAKOLOGISCHE BEDEUTUNG . 5 1.1.3 GIFTUNGEN DURCH GLUTATHIONTRANSFERASEN . 7 1.1.4 VORKOMMEN, RESISTENZPHAENOMENE, OEKOLOGISCHE BEDEUTUNG . 7 1.1.5 GLUTATHIONTRANSFERASEN UND CARCINOGENESE . 8 1.2 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG, EINTEILUNG UND NOMENKLATUR, PRIMAERSTRUKTUREN, MECHANISMUS . 8 1.2.1 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG, NOMENKLATUR . 8 1.2.2 STRUKTUR UND MECHANISMUS DER GLUTATHIONTRANSFERASEN . 13 12.2.1. MECHANISMUS DER ENZYMATISCHEN KATALYSE - ENZYMKINETISCHE UND SPEKTROSKOPISCHE BEFUNDE. 14 12.2.2 ENZYMOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DES KATALYTISCHEN ZENTRUMS . 15 1.3 MOLEKULARBIOLOGIE DER GLUTATHIONTRANSFERASEN . 17 1.3.1 GENSTRUKTUREN UND GENETISCHER POLYMORPHISMUS BEI SAEUGETIEREN . 17 1.3.1.1 KLASSE A GEN-FAMILIE . 17 1.3.12 KLASSE P GEN-FAMILIE . 18 13.1.3 KLASSE RE GEN-FAMILIE . 18 1.3.2 REGULATION DER ENZYMATISCHEN AKTIVITAET . 1? 1.3.3 HETEROLOGE EXPRESSION REKOMBINANTER GLUTATHIONTRANSFERASEN . 20 1.4 GLUTATHIONTRANSFERASEN VON RIND (BOS TAURUS) UND SCHWEIN (SUS DOMESTICUS). 21 1.5 DER TREMATODE SCHISTOSOMA JAPONICUM ---------------------------------------------- 22 1.5.1 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG . 22 1.5.2 BILHARZIOSE - SCHISTOSOMA JAPONICUM ALS PARASIT . 23 1.5.3 GLUTATHIONTRANSFERASEN IN HELMINTHEN IM ALLGEMEINEN UND IN SCHISTOSOMATIDAE IM BESONDEREN . 24 1.6 DAS EXPRESSIONSSYSTEM PGEX ------------------------------------------------ 25 1.7 KRISTALLISATION VON GLUTATHIONTRANSFERASEN . 27 2 AUFGABENSTELLUNG UND ZIEL . 28 3 ZUSAMMENFASSUNG . . 29 4 MATERIAL . 4.1 GERAETE. _ _ _ - . 4.2 SUBSTANZEN. -- YY. - - - . 4.2.1 PUFFERSUBSTANZEN, LOESUNGSMITTEL, ORGANIKA, GELE . 4.2.2 MEDIEN, PUFFERLOESUNGEN . 4.2.3 VEKTOREN, OLIGONUKLEOTIDE, PRIMER, MARKER . 4.2.4 PROTEINE . 42.4.1 DNA-MODIFIZIERENDE ENZYME INKL. RESTIKTIONSENDONUKLEASEN, ENZYMKITS . 42.4.2 ANTIKOERPER, SONSTIGE ENZYME . 42.4.3 MARKERPROTEINE . 4.2.5 RADIOCHEMIKALIEN . 4.2.6 FILMMATERIAL, MEMBRANEN, PAPIERE . 4.3 ORGANISMEN . . 4.3.1 PHAGEN/GENBANKEN . 4.3.2 E. CO/I-STAEMME . 4.3.3 KANINCHEN . 4.3.4 HUFTIERE . 31 31 32 32 33 33 34 34 34 34 35 35 36 36 36 36 36 INHALTSVERZEICHNIS II METHODEN. . 37 5.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN . 37 5.1.1 ARBEITEN AN OLIGONUKLEOTIDEN . 38 5.1.1.1 REINIGUNG UND SYNTHESE VON OLIGONUKLEOTIDEN. DO SYNTHESE, REINIGUNG 5.1.1.2 PHOSPHORYLIERUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN . 39 ANSATZ ZUR 5'ENDMARKIENIDG VON OBGONULDEOTIDEN NUT ATP, ANSATZ ZUR PRAEPARATIVEN 5'-OBGONUKLEOTIDPHOSPHORYUERUNG FUER DIE GENSYNLHESE 5.1.2 NUKLEINSAEUREPRAEPARATIONEN . 40 5.1.2.1 ISOLIERUNG EUKARYONTISCHER POLY(A) + RNA . 4U (GESAMT-RNA, POLY(A)RNA AUS GESAMT-RNA) 5.1.2.2 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS E. COLI. . 41 5.1.2.3 ISOLIERUNG VON X-DNA . 41 PEG-FAELLUOG VON X-PHAGEN, GIETCHGEWICHTSZEMNFUGAUON IM CSCL-GRADIENTEN. DNA-EXUAKUON 5.1.2.4 ISOLIERUNG LINEARER DSDNA-FRAGMENTE AUS LMP-AGAROSEGELEN MIT GENECLEANYY . 42 5.1.3 CHARAKTERISIERUNG VON NUKLEINSAEUREPRAEPARATEN . 42 5.1.3.1 SPEKTRALPHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG UND VERGLEICHENDE KONZENTRATIONSABSCHAETZUNG MITTELS AGAROSEGEL-EIEKTROPHORESE. 42 OBGONUKLEOTIDE. DSDNA. RNA 5.1.3.2 NICHTDENATURIERENDE AGAROSEGELE . 43 5.1.3.3 DENATURIERENDE AGAROSEGELE . 44 ALKALISCHE AGAROSEGELE (FUER EINZELSTRINGIGE CDNA), FOCMALDEHYD/FCRNIAMID ' AGAROSEGELE (FUER RNA) 5.1.3.4 NORTHEM-BLOT UND HYBRIDISIERUNG . 44 RNA-BLOTTIAG. RNA-HYBRIDISIERUNG 5.1.3.5 DNA/DNA-DIREKTHYBRIDISIERUNGEN IN AGAROSEGELEN . 5.1.3.6 DNA-SEQUENZIERUNG . 5.1.4 ENZYMATISCHE MODIFIKATION DOPPELSTRAENGIGER DNA . 5.1.4.1 VERDAU MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN . 5.1.4.2 CDNA-SYNTHESE . BEDINGUNGEN FUER DIE ERSTSTRANGSYNTHESE. BEDINGUNGEN FUER DIE ZWEITSTRANGSYNLHESE. BEDINGUNGEN FUER DEN RNASE VERDAU, PRAEPARATIVE GROEBENFRAKTIONIERUNG VON CDNA 5.1.4.3 HOMOPOLYMERE VERLAENGERUNG VON CDNA. REALDION MIT TERMINALER DESOXYNULDEOUDYLTRANSFERASE, HYBRIDISIERUNG MIT OLIGO-DG-PBR322 5.1.4.4 LIGATION VON DOPPELSTRAENGIGER DNA . 5.1.4.5 RADIOAKTIVE 3'-ENDMARKIERUNG VON DOPPELSTRAENGIGER DNA MIT DNA-POLYMERASE . 5.1.5 TRANSFORMATION VON E. COLI . 5.1.6 ANLEGEN UND DURCHMUSTERUNG EINER PLASMIDISCH KLONIERTEN CDNA-GENBANK . 5.1.6.1 KLONIERUNG . 5.1.OE.2 KOLONIEHYBRIDISIERUNG . 5.1.7 DURCHMUSTERUNG VON XGTLO UND XGTL 1-CDNA-GENBANKEN . 5.1.7.1 DURCHMUSTERUNG MIT OLIGONUKLEOTIDEN . 5.1.7.2 DURCHMUSTERUNG MIT ANTIKOERPERN . 5.2 BIOPHYSIKALISCH-CHEMISCHE METHODEN.YY. . 5.2.1 ROENTGENKRISTALLOGRAPHIE . 5.2.2 ULTRAZENTRIFUGATION . 5.2.3 ELEKTRONENMIKROSKOPIE . 5.2.4 ROENTGENKLEINWINKELSTREUUNG . 45 46 46 46 46 48 49 49 49 .50 50 50 51 .52 .52 52 .52 .52 .53 53 INHALTSVERZEICHNIS UI 5.3 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN . 54 5.3.1 ARBEITEN MIT E. COLI . 54 5.3.1.1 E. COLI-FLUESSIGKULTUREN . 54 5.3.1.2 FENNENTERKULTUR . 55 5.3.1.3 ANLEGEN EINER GLYCERINKULTUR . 55 5.3.1.4 E. CO/I-PLATTENKULTUREN/REPLIKAPLATTENTECHNIK . 55 "BLAU/WEDF-SELEKTION 5.3.1.5 ISOLIERUNG VON EINSCHLUSSKOERPERCHEN . 55 SPHAEROBLASTENPRAPARALION, AUFSCHLUSS DER SPHIROHASTEN, WASCHEN DER EINSCHLUSSKOERPERCHEN 5.3.2 ARBEITEN MIT DEM PHAGEN X . 56 5.3.2.1 KULTIVIERUNG - ALLGEMEINE ARBEITSTECHNIKEN. . 56 S.3.2.2 HERSTELLEN VON PLATTENLYSAT. . 56 5.3.2.3 HERSTELLEN VON PRAEPARATIVEM PHAGENLYSAT. . 57 5.4 IMMUNOLOGISCHE METHODEN . 57 5.4.1 GEWINNUNG UND REINIGUNG VON ANTISERUM . 57 5.4.1.1 GEWINNUNG VON ANTISERUM . 57 IMMUNISIERUNG VON HASEN, GEWINNUNG DES ANTISERUMS 5.4.1.2 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG VON ANTISERUM . 58 HERSTELLUNG CYANBCOMID-AKIIVIERTER SEPHAROSE, HERSTELLUNG DES E. COLI-LYSALS, KOPPLUNG DES CO/I-LYSATS AN CYANBCOMID-AKTIVIERTE SEPHAROSE, AFFIMTIISCHROMAIOGRAPHISCHE REINIGUNG DES ANTISERUMS 5.4.2 MONOKLONALE ANTIKOERPER . 58 5.4.3 IMMUNFAERBUNG . 59 5.5 PROTEINCHEMISCH-ENZYMOLOGISCHE METHODEN . 59 5.5.1 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION . 59 5.5.1.1 EXTINKTION BEI 280 NM . 60 5.5.1.2 PROTEINBESTINUNUNG NACH BRADFORD. 60 5.5.2 BESTIMMUNG DER ENZYMATISCHEN AKTIVITAET VON GLUTATHIONTRANSFERASE . 61 5.5.2.1 ZUSAMMENSETZUNG DES REAKTIONSGEMISCHS, START DER REAKTION. 61 5.5.2.2 BESTIMMUNG DER ANFANGSGESCHWINDIGKEIT . 61 5.5.2.3 BERECHNUNG DER ENZYMATISCHEN AKTIVITAET. . 62 5.S.2.4 MESSBEREICH, STOERUNGEN/KORREKTUREN . 62 5.5.3 ANALYTISCHE POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE . 63 5.5.3.1 GIESSEN DER GELE . 63 REZEPTUREN, STANDARD-ANSATZ FQT LDS-GELE 5.5.3.2 ELEKTROPHORESE . 65 5.5.4 ISOELEKTROFOKUSSIERUNG . 65 5.5.5 ISOLIERUNG VON GLUTATHIONTRANSFERASE . 66 5.5.5.1 DARSTELLUNG DER AFFINITAETSMATRIZES . 66 5.55.2 ISOLIERUNG VON GLUTATHIONTRANSFERASE AUS RIND UND SCHWEIN. 66 5.S.5.3 ISOLIERUNG REKOMBINANTER GTSJ26 AUS E. COLI . 66 ERZEUGUNG UND ERNTE DER ZEITMASSE, ZELLAUFSCHLUSS, AFFIMTAETSCHROMATOGRAPHIE, DIALYSE 5.5.6 ANALYTISCHE GELPERMEATIONSCHROMATOGRPAHIE . 68 5.5.7 ELEKTROTRANSFER VON PROTEINEN . 68 5.5.8 PROTEINSEQUENZIERUNG . 68 5.5.9 PROTEINKRISTALLISATION . 69 55.9.1 DAMPFDIFFUSIONSMETHODE . 69 55.9.2 MIKRODIALYSE . 70 55.9.3 UMKRISTALLISATION VON PEG . 70 55.9.4 FAKTORIELLE VARIABIENEVALUATION MITTELS MULTIPLER REGRESSIONSANALYSE . 71 55.9.5 KRISTALLISATION REKOMBINANTER GTSJ26 - KRISTALLEMTE . 72 INHALTSVERZEICHNIS IV 6 EXPERIMENTE UND ERGEBNISSE . 73 6.1 SUCHE NACH DER KODIERENDEN DNA FIIR GTBOSN MIT OLIGONUKLEOTIDSONDEN . 73 6.1.1 GESTALTUNG DER SONDENSEQUENZ . 73 6.1.2 SYNTHESE UND REINIGUNG DER OLIGONUKLEOTIDE . 75 6.1.3 MARKIERUNG DER OLIGONUKLEOTIDE MIT [Y 32 P]ATP . 76 6.1.4 VERIFIZIERUNG DER OLIGONUKLEOTIDE MITTELS "NORTHERN-BLOT" . 76 6.1.5 ANLAGE UND DURCHMUSTERUNG EINER PLASMIDISCH KLONIERTEN CDNA-GENBANK AUS RINDERPLAZENTA . 79 6.1.5.1 CDNA-SYNTHESE UND GROESSENFRAKTIONIERUNG . 79 6.1.5.2 KLONIERUNG IN OLIGO(DG) 20 -PBR322. 80 6.1.5.3 DURCHMUSTERUNG DER GENBANK MIT OIIGONUKLEOTID PEP4. 81 6.1.6 DURCHMUSTERUNG EINER XGTLO-CDNA-GENBANK AUS RINDERHERZ . 81 6.1.6.1 DURCHMUSTERUNG DER GENBANK MIT PEP4 UND VERIFIZIERUNG ERHALTENER KLONE MIT PEP2 . 82 6.1.6.2 UMKLONIERUNG IN PUC18 UND SEQUENZIERUNG. 85 6.1.6.3 ANALYTISCHER SEQUENZVERGLEICH . 86 6.2 SUCHE NACH DER KODIERENDEN DNA FUER GTBOSTR UND GTSUSIT MIT ANTIKOERPERN IN XGTLL-CDNA-GENBANKEN . 87 6.2.1 ISOLIERUNG VON GLUTATHIONTRANSFERASE AUS RINDERPLAZENTA, RINDERHERZ, RINDERLEBER UND SCHWEINELUNGE . 87 6.2.2 ERZEUGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ANTISEREN . 89 6.2.2.1 CHARAKTERISIERUNG DES POLYKLONALEN ANTI-GTBOSTT-ANTISERUMS AUS KANINCHEN. 89 6.2.2.2 CHARAKTERISIERUNG DER MONOKLONALEN ANTIGTBOSRC-ANTIKOERPER . 92 6.2.2.3 DURCHMUSTERUNG VON RINDERGEWEBEN MIT POLYKLONALEM ANTI-GTBOSTT-ANTISERUM . 94 6.2.4 DURCHMUSTERUNG VON XGTLL-CDNA-GENBANKENAUS RINDERPLAZENTA UND SCHWEINELUNGE MIT POLYKLONALEM ANTI-GTBOSIT-ANTISERUM . 95 6.2.4.1 CHARAKTERISIERUNG DER GENBANKEN UND POSITIVKONTROLLE DES SELEKTIONSVERFAHRENS.95 6.2.4.2 DURCHMUSTERUNG DER XGTL 1-CDNA-GENBANKEN AUS RINDERPLAZENTA UND SCHWEINELUNGE . 96 6.3 SYNTHESE DER KODIERENDEN DNA FIIR GLUTATHIONTRANSFERASE DER KLASSE 7T AUS SCHWEIN . 97 6.3.1 KLONIERUNGSSTRATEGIE UND GESTALTUNG DER NUKLEOTIDSEQUENZ . 97 6.3.2 SYNTHESE UND REINIGUNG DER OLIGONUKLEOTIDE . 103 6.3.3 LIGATION UND KLONIERUNG . 103 6.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE STUDIEN AN RGTSJ26 . 105 6.4.1 OPTIMIERUNG DER EXPRESSION VON RGTSJ26 IN E. CO!I-DH5A - OPTIMIERUNG DER PROTEINAUSBEUTE . 105 6.4.1.1 OPTIMIERUNG DER KULTRUDAUER . 105 6.4.1.2 OPTIMIERUNG DES INDUKTIONSZEITPUNKTES . 106 6.4.1.3 OPTIMIERUNG DER ANIMPFDICHTE . 106 6.4.1.4 OPTIMIERUNG DER INDUKTORKONZENTRATION (IPTG). 107 6.4.1.5 OPTIMIERUNG DER INKUBATIONSTEMPERATUR . 107 6.4.1.6 EINFLUSS VON AMPICILLIN . 108 6.4.1.7 AUFSCHLUSSVERFAHREN UND AUFSCHLUSSPUFFER . 108 6.4.1.8 UEBERTRAGUNG AUF EINE 8L-FENNENTERKULTUR . 108 6.4.2 VERSUCHE ZUR DARSTELLUNG DER N-TERMINALEN DOMAENE DER RGTSJ26 . 109 6.4.2.1 DARSTELLUNG DER KODIERENDEN DNA . 110 OLIGOAUKLECTIDISOTIERUNG - ERZEUGUNG DES OLIGONUKLECTIDLINKERS, DARSTELLUNG DES 4515-BP-FRAGMENTS OE.4.2.2 EXPRESSIONSSTUDIEN . 113 INHALTSVERZEICHNIS V 6.5 BIOCHEMISCH-ENZYMOLOGISCHE STUDIEN AN RGTSJ26 . 117 6.5.1 ISOLIERUNG VON REKOMBINANT EXPRIMIERTER RGTSJ26 AUS E. COLI - ANREICHERUNGSTABELLE . 117 6.5.2 AGGREGATEN VON RGTSJ26 . 119 6.5.2.1 CHARAKTERISIERUNG DER AGGREGATIONSKINETIK DURCH TRUEBUNGSMESSUNG. 120 6.5.22 AGGREGATANALYSE MITTELS GELFILTRATION . 122 . 6.5.3 ENZYMOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG - BINDUNGSSTUDIEN UND SUBSTRATSPEZIFITAET . 124 6.5.3.1 FLUORESZENZTITRATION MIT HEMATIN . 125 6.5.3.2 BILDUNG DES MEISENHEIMER-KOMPLEXES MIT TNB UND GSH. 125 OE.5.3.3 ZWEITSUBSTRATSPEZIFITAETEN - EINFLUSS DER ABGANGSGRUPPE . 129 6.5.4 ISOELEKTROFOKUSSIERUNG . 130 6.6 BIOPHYSIKALISCH-CHEMISCHE STUDIEN AN RGTSJ26 . 131 6.6.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM AGGREGATIONSSTATUS DER RGTSJ26 . 131 6.6.1.1 AGGREGATANALYSE MITTELS ROENTGENKLEINWINKELSTREUUNG . 131 6.6.1.2 AGGREGATANALYSE MITTELS ELEKTRONENMIKROSKOPIE . 132 6.6.1.3 AGGREGATANALYSE MITTELS ANALYTISCHER ULTRAZENTRIFUGATION . 132 6.6.2 KRISTALLOGRAPHIE AN RGTSJ26 . 133 6.6.2.1 KRISTALLISATION VON RGTSJ26 . 133 EINSALZEFFCKTE BEI RGTSJ26, LOESLICHKEIT VON RGTSJ26 IN AMMONIUMSULFADOESUNGEN, KNSTALHSAUONSEXPERUNENTE MITTELS MIKRO-DIALYSE, KNSTALLISAUEOASEXPENMENTE NUT AMXNOMUM SULFAT, KRISULLISAUONSEXPENMENTE MIT PEG - KNSULLISATIONSOPTINUERUNG UND VERIFIZIERUNG DER KNSTALUSATIODSPARUDETER MITTELS MULTIPLER LINEARER REGRESSIOOSANALYSE, DER OPTIMIERTE KXISUIIISATIONSANSATZ - DER ERNTEPUFLER 6.6.2.2 KRISTALLOGRAPHISCHE CHARAKTERISIERUNG VON KRISTALLEN DER RGTSJ26 . 145 AEUSSERE MORPHOLOGIE, BESTIMMUNG DER RAUMGRUPPE, DER ZELLKONSTANTEN UND DES STREUVERMOEGENS 6.62.3 STUDIEN ZUR ENZYMATISCHEN FUNKTIONALITAET VON KRISTALLINER RGTSJ26 . 147 7 DISKUSSION . U9 7.1 SUCHE NACH DER KODIERENDEN CDNA FUER GLUTATHIONTRANSFERASE DER KLASSETT VON RIND UNDSCHWEININCDNA-GENBANKEN . 149 7.1.1 DURCHMUSTERUNG VON PLASMIDISCH KLONIERTEN UND X.GTLO-CDNA-GENBANKEN MIT OLIGONUKLEOTIDEN . 151 7.1.1.1 GESTALTUNG UND SPEZIFITAET DER OLIGONUKLEOTIDSONDEN . 151 7.1.1.2 GUETE DER VERWENDETEN GENBANKEN. 151 BEURTEILUNG DER SELBSTANGELEGTEN PLASMIDISCH KLONIERTEN GENBANK, BEURTEILUNG DER KOMMERZIELL ERHAELTLICHEN XGTLO-CDNA-GENBANK AUS RINDERHERZ 7.1.1.3 DURCHMUSTERUNG EINER XGTLO-CDNAGENBANK AUS RINDERHERZ . 153 7.1.2 SUCHE NACH DER KODIERENDEN DNA FUER GLUTATHIONTRANSFERASE DER KLASSE N AUS RIND (GTBOSTT) UND SCHWEIN (GT SUSK ) MIT ANTIKOERPERN IN XGTL 1-CDNA-EXPRESSIONSGENBANKEN . 155 7.1.2.1 SPEZIFITAET UND ANTIKOERPERTITER DES ANTI-GTBOSN-ANTISERUMS . 155 7.1.2.3 DURCHMUSTERUNG EINER XGTL 1-EXPRESSIONS-CDNA-GENBANK AUS RINDERPLAZENTA UND EINER XGTLL-EXPRESSIONS-C DNA-GEN BANK AUS SCHWETNELUNGE MIT ANTI-GTBOSRR-ANTISERUM. 156 7.1.3 ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION UND VERGLEICH DER ERGEBNISSE MIT BEFUNDEN ANDERER AUTOREN . 156 7.2 SYNTHESEDER KODIERENDEN DNA FUER GLUTATHIONTRANSFERASE DFF MASSETT AUS SCHWEIN. .158 7.2.1 GESTALTUNG DER NUKLEOTIDSEQUENZ . 158 72.1.1 EINFUEHRUNG VON KLONIERUNGSSCHNITTSTELLEN . 158 72.1.2 VETMEIDUNG VON STEM/LOOP-STRUKTUREN . 159 72.1.3 EINFUEHRUNG SINGULAERER SCHNITTSTELLEN . 160 72.1.4 BERUECKSICHTIGUNG VON CODONPRAEFERENZEN . 160 7.2.2 SYNTHESE DER SUBKLONE . 160 INHALTSVERZEICHNIS - - 7.3 UNTERSUCHUNGEN AN REKOMBINANTER GLUTATHIONTRANSFERASE VON SCHISTOSOMA JAPONICUM (RGTSJ26) . 161 7.3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE STUDIEN . 161 7.3.1.1 OPTIMIERUNG DER PROTEINEXPRESSION VON RGTSJ26 . 161 7.3.1.2 DARSTELLUNG UND EXPRESSION DER KODIERENDEN NUKLEOTIDSEQUENZ DER N-TENNINALEN DOMAENE VON TGTSJ26 . 162 7.3.2 BIOCHEMISCHE UND ENZYMOLOGISCHE STUDIEN . 162 7.3.2.1 AUFREINIGUNG DES PROTEINS . 163 7.3.2.2 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG . 163 MOLEKULARGEWICHT, ISOELEKTRISCHER PUNKT 73.2.3 BINDUNGSSTUDIEN UND ENZYMKINEUSCBE UNTERSUCHUNGEN. 164 BINDUNG VON HEMATM, BILDUNG DES MEISENHEIMERKOMPLEXES AUS TNB, GSH UND RGTSJ26, EINFLUSS DER ABGANGSGRUPPE 7.3.3 BIOPHYSIKALISCH-CHEMISCHE STUDIEN . 166 7.3.3.1 LOESLICHKEITSUNTERSUCHUNGEN . 166 EINSALZ UND AUSSALZVERHALTEN, FAELLUNG MIT PEG ALS KNSTALLISATIOUSINITITAUON, DIE REVERSIBLE OXIDATIVE AGGREGATEN 7.3.3.2 KRISTALLOGRAPHISCHE CHARAKTERISIERUNG . 169 KRISTALLISATION VON RGTSJ26 - STUFENWEISE MULTIPLE LINEARE REGRESSION ZUR BEURTEILUNG DES EINFLUSSES DER KNSTALLISATIONSPARAMETER AUF DIE KRISTALLQUALITAT: AUSTISCHE BEWERTUNG. ROENTGENKNSTALLOGRAPHISCHE ANALYSE KRISTALLINER RGTSJ26, BILDUNG DES MEISENHEIMERKOMPLEXES AUS KRISTALLINER RGTSJ26, GSH UND TNB 733.3 ROENTGENKLEINWINKELSTREUUNG . 173 AUSBLICK . . 175 LITERATUR . 176 ANHANG . 191 LEBENSLAUF
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