Nachweis residueller Leukämie bei Kindern mit akuter lymphoblastischer Leukämie mittels Polymerase-Ketten-Reaktion:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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WIATTSVENELCHNLS
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1.1.
DIE
AKUTE
LYMPHOBLASTISCHE
LEUKAEMIE
.
6
1.2.
REMISSIONSKONTROLLE
.
6
1.2.1.
ZYTOMORPHOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
6
1.2.2.
ZYTOGENETIK
.
6
1.2.3.
IMMUNOLOGIE
.
7
1.2.4.
SOUTHEM-BLOT-HYBRIDISIERUNG
.
7
1.2.5.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
.
8
1.3.
T-ZELLREZEPTOREN
.
8
1.3.1.
DER
T-ZELLREZEPTOR-6
.
10
2.
PROBLEMSTELLUNG
.
12
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
3.1.
PATIENTENKOLLEKTIV
.
13
3.2.
SYSTEMATIK
DER
EINTEILUNG
DER
AKUTEN
LYMPHATISCHEN
LEUKAEMIEN:
.
15
3.2.1.
ZYTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
15
3.2.2.
FAB-KLASSIFIKATION
.
15
3.2.3.
IMMUNOLOGISCHE
KLASSIFIKATION
.
16
3.3.
MATERIALIEN
.
16
3.3.1.
CHEMIKALIEN
.
16
3.3.2.
RADIOCHEMIKALIEN
.
17
3.3.3.
NUKLEINSAEUREN
.
17
3.3.4.
ENZYME
.
17
3.3.5.
FILME
.
17
3.3.6.
VERSTAERKERFOLIEN
.
18
3.4.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
18
3.4.1.
STANDARDLOESUNGEN
.
18
3.4.2.
LOESUNGEN
ZUR
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
18
3.4.3.
LOESUNGEN
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
.
19
3.4.4.
LOESUNGEN
FUER
DEN
SOUTHERN-BLOT
.
19
3.4.5.
LOESUNGEN
ZUR
HYBRIDISIERUNG
VON
DOT-BLOTS
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
SONDEN
.
19
3.5.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITSTECHNIKEN
.
19
3.5.1.
DNA-ISOLIERUNG
.
19
JNHALTSVERZEICHNIS
3.5.2.
DNA-ISOLIERUNG
AUS
KNOCHENMARKAUSSTRICHEN
.
20
3.5.3.
DNA-RESTRIKTION
.
20
3.5.4.
AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
.
20
3.5.5.
SOUTHERN-BLOT
.
.21
3.5.6.
GEN-SONDEN
.
22
3.5.7.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
GEN-SONDEN
.
22
3.5.8.
HYBRIDISIERUNG
.
22
3.5.9.
AUTORADIOGRAPHIE
.
23
3.5.10.
KONSEKUTIVE
HYBRIDISIERUNG
.
23
3.5.11.
HERSTELLUNG
VON
V81
UND
VOE2-SONDEN
MIT
DER
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
.
23
3.5.12.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION ZUM
NACHWEIS
VON
MRD
.
24
3.5.13.
AMPLIFIKATIONSBEDINGUNGEN
.
26
3.5.14.
PATIENTENSPEZIFISCHE
SONDE
.
27
3.5.15.
AUFARBEITUNG
DER
PATIENTENSPEZIFISCHEN
SONDEN
.
28
3.5.16.
HYBRIDISIERUNG
MIT
PATIENTENSPEZIFISCHEN
SONDEN
.
28
4.
ERGEBNISSE
4.1.
TZR-5-GENREARRANGEMENTS
.
30
4.2.
DIFFERENZIERUNG
DER
T-ZELLREZEPTOR-OE-REKOMBINATIONEN
.
33
4.3.
NACHWEIS
VON
MINIMAL
RESIDUAL
DISEASE
MIT
PCR
.
35
4.3.1.
SPEZIFITAET
DER
HYBRIDISIERUNG
.
35
4.3.2
SENSITIVITAET
DER
HYBRIDISIERUNG
.
36
4.3.3.
NACHWEISGRENZE
RESIDUELLER
LEUKAEMIE
BEI
DEN
EINZELNEN
PATIENTEN
.
38
4.4.
ERSTERKRANKUNGSPATIENTEN
.
38
4.4.1.
VERGLEICH
DER
ZYTOLOGISCHEN
UND
MOLEKULARGENETISCHEN
BEFUNDE
.
38
4.4.2.
VERLAUFSBEOBACHTUNG
BEI
ERSTERKRANKUNGSPATIENTEN
.
39
4
5.
REZIDIVPATIENTEN
.
42
4.5.1.
VERGLEICH
DER
ZYTOLOGISCHEN
UND
MOLEKULARGENETISCHEN
BEFUNDE
.
42
4.5.2.
KRANKHEITSVERLAEUFE
DER
REZIDIVPATIENTEN
.
44
4.6.
UNTERSUCHUNG
DER
MAGNETGEBUNDENEN
FRAKTIONEN
.
47
4.7.
REMISSIONSKONTROLLE
VOR
KMT
.
47
S.
DISKUSSION
TEIL
1
5.1.
METHODISCHE
ASPEKTE
.
49
5.1.1.
BESTIMMUNG
DER
SPEZIFITAET
DER
HYBRIDISIERUNG
MIT
PATIENTENSPEZIFISCHEN
SONDEN
.
49
_
INHALTSVTNTTEM*
5.1.2.
SENSITIVITAET
DES
NACHWEISE*
RESIDUDLER
LEUKAEMIE
.
50
5.2.
TZR-6-GENREKOMBINATIONEN
.
51
5.2.1
TZR-S-GENREARRANGEMENTS
BEI
KINDERN
MIT
ALL
.
51
5.2.2.
GENSEGMENTBETEILIGUNG
BEI
TZR-6-REARRANGEMENTS
.
53
5.2.3'.
TZR-8-REKOMBINATION
UND
IMMUNOLOGISCHE
TYPISIERUNG
.
53
5.2.4
VERGLEICH
DER
REKOMBINATIONEN
BEI
ERSTERKRANKUNG
UND
REZIDIV
.
54
5.3.
NACHWEIS
VON
MRD
BEI
LEUKAEMIEPATIENTEN
.
55
5.3.1.
PERSISTIEREN
VON
LEUKAEMIEZELLEN
AM
ANFANG
DER
THERAPIE
.
55
5.3.2
NACHWEIS
VON
MRD
BEI
PATIENTEN
MIT
LANGER
REMISSIONSDAUER
.
57
5.4.
NACHWEIS
RESIDUDLER
LEUKAEMIE
BEI
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
.
58
5.4.1.
EFFIZIENZ
DES
IN
VITRO-PURGING
DES
ZUR
REINFIISION
BESTIMMTEN
KNOCHENMARKS
.
58
5.4.2.
EVALUIERUNG
DES
REMISSIONSSTATUS
VOR
UND
NACH
KMT
.
59
5.4.3.
URSPRUNGSORT
DER
REZIDIVE
NACH
KMT
.
61
TEIL
II
5.5.
MOEGLICHKEITEN
UND
GRENZEN
DER
PCR-UNTERSUCHUNG
AUF
MRD
.
62
5.5.1.
DIFFERENZIERUNG
VON
LEUKAEMIEZELLEN
UND
REGENERIERENDEM
KNOCHENMARK
.
62
5.5.2.
ZIELE
DER
UNTERSUCHUNG
AUF
MRD
.
62
5.5.3.
FRUEHERKENNUNG
EINES
REZIDIVS
DURCH
PCR-UNTERSUCHUNGEN
.
64
5.5.4.
FALSCH
POSITIVE
BEFUNDE
.
65
5.5.6.
FALSCH
NEGATIVE
BEFUNDE
.
66
5.5.7.
SCHLUSSFOLGERUNG
.
67
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
69
7.
LITERATUR
.
71
8.
ANHANG
.
80 |
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