Untersuchungen zur Signalübertragung in menschlichen T-Lymphozyten: Beteiligung von p56lck, einer Proteintyrosinkinase aus der src-Familie
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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1.
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
INHALTSVERZEICHNIS
1
2.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
4
3.
EINLEITUNG
6
3.1.
DIE
T-ZELLE
7
3.1.1.
DIE
T-ZELLREZEPTOREN
8
3.1.2.
AKTIVIERUNG
DER
T-ZELLE
10
3.2.
BEZIEHUNGEN
ZWISCHEN
PROTEINTYROSINKINASEN
DER
SRC-FAMILIE
UND
T-ZELLREZEPTOREN
13
3.3.
DIE
SRC-FAMILIE
13
3.3.1.
DIE
MITGLIEDER
DER
SRC-FAMILIE
IN
T-LYMPHOZYTEN
16
3.3.1.1.
DIE
P561CK
PROTEINTYROSINKINASE
16
3.3.1.2.
DIE
PSQFY
11
PROTEINTYROSINKINASE
18
3.3.1.3.
DIE
P62
C
'
Y
ES
PROTEINTYROSINKINASE
19
4.
ZIELE
DER
ARBEIT
20
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
21
5.1.
MATERIAL
21
5.2.
METHODEN
24
5.2.1.
ISOLIERUNG
UND
KULTUR
VON
MENSCHLICHEN
T-LYMPHOZYTEN
24
5.2.11.
ISOLIERUNG
VON
MENSCHLICHEN
T-LYMPHOZYTEN
24
5.2.1.2.
KULTIVIERUNG
VON
MENSCHLICHEN
T-LYMPHOZYTEN
25
5.2.1.3.
STIMULATION
VON
MENSCHLICHEN
T-LYMPHOZYTEN
26
5.2.2.
HERSTELLUNG
DER
T-ZELLEXTRAKTE
UND
FRAKTIONIERUNG
27
5.2.2.1
HERSTELLUNG
DER
T-ZELLEXTRAKTE
27
5.2
2.2.
ISOLIERUNG
DER
T-ZELLFRAKTIONEN
28
5.2.3.
NACHWEIS
DER
TYROSINKINASEAKTIVITAET
29
5
2
3.1.
NACHWEIS
DER
P561CK
KINASEAKTIVITAET
29
5.2.3
2
MESSUNG
DER
PTK-AKTIVITAET
MIT
DEM
PROTEIN-A-SEPHAROSESYSTEM
30
5
2
4.
WESTEMBLOTVERFAHREN
32
5.2
5.
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
34
5.2.6.
IDENTIFIKATION
DER
PHOSPHOAMINOSAEUREN
35
5.2.7.
IMMUNOPRAEZIPITATION
VON
32P-MARKIERTEM
P56
'
C
^
36
5
2.8.
PARTIELLE
VG-PROTEOLYSE
37
5.2.9.
PROTEINBESTIMMUNG
37
5.2.10
REINIGUNG
VON
P561CK
AUS
ISOLIERTEN
T-LYMPHOZYTEN
38
5.210.1.
ISOLIERUNG
VON
T-LYMPHOZYTEN
38
5
2
10.2.
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
38
5
2
10.3
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
39
5.2.11.
CHARAKTERISIERUNG
DER
GEREINIGTEN
P56'
C
K
40
5.2.11.1.
IDENTIFIZIERUNG
VON
P561
C
K
40
5
2.11.2.
BESTIMMUNG
DER
ENZYMATISCHEN
AKTIVITAET
41
6.
ERGEBNISSE
42
6.1.
AKTIVIERUNG
EINES
MITGLIEDS
DER
SRC-FAMILIE
IN
STIMULIERTEN
T-LYMPHOZYTEN
42
6.1.1.
LYMPHOZYTENKULTUR
42
6
1.2.
STIMULATION
DER
T-LYMPHOZYTEN
MIT
PHYTOHAEMAGGLUTININ
43
6.1.3.
STIMULATION
DER
T-LYMPHOZYTEN
MIT
ANTI-CD4-ANTIKOERPER
52
6.1.4.
STIMULATION
DER
T-LYMPHOZYTEN
MIT
DEM
PHORBOLESTER
TPA
58
6.1.5.
IMMUNPRAEZIPITATION
DER
PROTEINTYROSINKINASE
63
6.1.5.1
BESTIMMUNG
DES
PEPTIDMUSTERS
NACH
VG-PROTEOLYSE
65
6.2.
REINIGUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
PSOELCK
PROTEINTYROSINKINASE
AUS
MENSCHLICHEN
T-LYMPHOZYTEN
67
6.2.1.
PARTIELLE
REINIGUNG
DER
P56'
C
K
PROTEINTYROSINKINASE
67
6.2.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
P561CK
AUS
T-LYMPHOZYTEN
75
7.
DISKUSSION
82
7.1.
STIMULATION
DER
T-LYMPHOZYTEN
84
7.1.1.
STIMULATION
DER
T-LYMPHOZYTEN
MIT
PHYTOHAEMAGGLUTININ
84
7.1.2
STIMULATION
MIT
ANTI-CD4-ANTIKOERPER
87
7.1.3.
STIMULATION
VON
T-LYMPHOZYTEN
MIT
DEM
PHORBOLESTER
TPA
89
7.2.
IDENTIFIZIERUNG
DER
PROTEINTYROSINKINASEN
DURCH
IMMUNPRAEZIPITATION
92
7.3.
REINIGUNG
DER
PSOELCK
PROTEINTYROSINKINASE
93
7.4.
CHARAKTERISIERUNG
DER
P56'
C
K
PROTEINTYROSINKINASE
94
8.
LITERATUR
96
9.
ZUSAMMENFASSUNG
112
10.
ABSTRACT
114
11.
ANHANG
116 |
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