Zur Molekularbiologie von Komponenten des Ubiquitin-Systems in Chlamydomonas reinhardtii:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1993
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| adam_text | ZUR MOLEKULARBIOLOGIE VON KOMPONENTEN DES UBIQUITIN-SYSTEMS IN
CHLAMYDOMONAS REINHARDTII VON DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER
TECHNISCHEN UNIVERSITAET CAROLO-WILHELMINA ZU BRAUNSCHWEIG ZUR ERLANGUNG
DES GRADES EINES DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.)
GENEHMIGTE D I S S E R T A T I O N VON JAN VON KAMPEN AUS CUXHAVEN III
INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1 2. MATERIAL UND METHODEN 7 2.1
ANZUCHT DER ALGEN 7 2.1.1 SYNCHRONISATION DER ALGEN 8 2.2
STRESSAPPLIKATIONEN 8 2.3 ISOLIERUNG VON DNA AUS C. REINHARDTII 8 2.4
RNA-ISOLIERUNG 9 ISOLIERUNG VON PLASMIDEN AUS REKOMBINANTEN E.
COLI-ZELLEN 11 ISOLIERUNG VON PLASMIDEN IN KLEINEM MASSSTAB (MINIPREP) 11
AUFREINIGUNG GROESSERER MENGEN AN PLASMIDEN (MAXIOREP) 11 AUFREINIGUNG VON
PLASMID-DNA MITTELS POLYETHYLENGLYCOL 12 PRAEPARATION VON PLASMIDEN DURCH
CSCL-DICHTEGRADIENTEN- ZENTRIFUGATION 13 QUANTIFIZIERUNG VON DNA 13
RESTRIKTION VON REKOMBINANTEN PLASMIDEN 14 ELUTION VON DNA AUS
AGAROSE-GELEN 15 ELUTION VON DNA AUS AGAROSE-GELEN MIT NA-45 MEMBRANEN
15 ELUTION VON DNA AUS AGAROSE-GELEN MITTELS GLASMILCH 15
SOUTHERN-ANALYTIK 16 RESTRIKTION GENOMISCHER DNA 16 GELELEKTROPHORESE
VON GENOMISCHER DNA 17 SOUTHERN-TRANSFER 17 SOUTHERN-HYBRIDISIERUNA 18
HERSTELLUNG VON [A 32 P]-CTP MARKIERTEN DNA-SONDEN 19 !V 2.9
NORTHERN-ANALYTIK 20 2.9.1 GELELEKTROPHORESE VON RNA 20 2.9.2
NORTHERN-TRANSFER UND -HYBRIDISIERUNG 21 2.10 SCREENING EINER
CDNA-SSIBLIOTHEK 22 2.10.1 PRIMAERES SCREENING DER CDNA-SSIBLIOTHEK 22
2.10.2 SEKUNDAERES UND TERTIAERES SCREENING DER CDNA-SSIBLIOTHEK 23 2.11
ISOLIERUNG VON DNA AUS BAKTERIOPHAGEN 24 2.12 SUBKLONIERUNG DER
PHAGEN-DNA IN PLASMIDE 25 2.12.1 HERSTELLUNG KOMPETENTER E. COLI-ZELLEN
25 2.12.2 LINEARISIERUNG UND DEPHOSPHORYLIERUNG DES PLASMID-VEKTORS 26
2.12.3 LIGATION DER CDNA-INSERTS IN PLASMIDE 28 2.12.4 TRANSFORMATION
KOMPETENTER E. COLI-ZELLEN 29 2.12.5 HERSTELLUNG VON E.
COLI-STAMMKULTUREN 29 2.13 SEQUENZIERUNG VON DNA 30 2.13.1 ISOLIERUNG
VON SSDNA 30 2.13.2 ISOLIERUNG VON DSDNA ZUR SEQUENZIERUNG 31 2.13.3
ALKALISCHE DENATURIERUNG VON DSDNA 31 2.13.4 SEAUENZIEREN NACH DER
DIDEOXY-KETTENTERMINATIONSMETHODE 31 2.13.4.1 SEQUENZIEREN MIT DER
TAQ-POLYMERASE 32 2.13.4.2 SEQUENZIEREN MIT SEAUENASE 33 2.13.5
SEAUENZIERGELE 35 2.13.6 EXONUKLEASE-VERDAU 36 2.14 DOKUMENTATION DER
ERGEBNISSE 40 2.15 VERWENDETE CHEMIKALIEN 40 3. ERGEBNISSE 41 3.1
UNTERSUCHUNGEN GENOMISCHER DNA AUS C. REINHARDTII MIT DEN SONDEN UBC2.
UBC3 UND UBM 41 UNTERSUCHUNG VON DNA AUS SPERMATOZOPSIS SIMILIS MIT DER
SONDE UBM 45 NORTHERN-ANALYTIK WAEHREND DES SYNCHRONEN WACHSTUMS VON C.
REINHARDTII 47 RNA-ANALYTIK MIT UBM NACH UNTERSCHIEDLICHEN STRESS-
INKUBATIONEN 50 ARBEITEN MIT EINER C. REINHARDTII CDNA-BIBLIOTHEK 55
BESTIMMUNG DES TITERWERTES DER CDNA-BIBLIOTHEK IN LAMBDA NM1149 55
PRIMAERES SCREENING DER CDNA-BIBLIOTHEK 55 AUFREINIGUNG DER POSITIVEN
KLONE DUCH SEKUNDAERES UND TERTIAERES SCREENING 55 UMKLONIERUNG DER
PHAGEN-INSERT-DNA IN PLASMIDE 56 SOUTHERN-ANALYTIK MIT REKOMBINANTEN
PLASMIDEN 57 EXONUKLEASE-VERDAU VON KLON 6 59 SEAUENZIERUNG DES
DNA-FRAGMENTES MIT HOMOLOGIE ZU UBC3 AUS HEFE 59 UNTERSUCHUNG VON RNA
UND DNA AUS CHLAMYDOMONAS REINHARDTII MIT DEN INSERTS DER PLASMIDE CBLP2
UND PVK5 63 UNTERSUCHUNG GENOMISCHER DNA AUS C. REINHARDTII MIT CBLP2
UND PVK5 63 NORTHERN-ANALYTIK MIT CBLP2 65 DIE TRANSKRIPTION VON CBLO2
NACH INKUBATION UNTER UNTERSCHIEDLICHEN STRESSBEDINGUNGEN 69 DIE
CBLO2-EXPRESSION BEI EINER TEMOERATURSENSITVEN C. REINHARDTII-MUTANTE 71
DIE EXPRESSION VON MRNAS FUER CBLP UND CBLP2 WAEHREND DES SYNCHRONEN
WACHSTUMS VON C. REINHARDTII 73 NORTHERN-ANALYSEN MIT PVK5 75 DIE
EXPRESSION VON DVK5 UNTER UNTERSCHIEDLICHEN STRESS- BEDINGUNGEN 75 DIE
TRANSKRIPTION VON GENEN FUER PVK5 UND UBIQUITIN BEI EINER
TEMPERATURSENSITIVEN C. REINHARDTII-MUTANTE 77
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