Strukturuntersuchungen am Oberflächenprotein des Archaebakteriums Methanoplanus limicola mit Hilfe von Elektronenmikroskopie:
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1993
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| Beschreibung: | München, Technische Univ., Diss., 1993 |
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INHALTSVERZEICHNI
S SEITE
ZUSAMMENFASSUNG 1
A GLEITUNG 3
B. METHODEN 7
1. ISOLATION UND REINIGUNG DES OBERFLAECHENPROTEINS 7
2. PROTEINCHEMISCHE METHODEN G
2.1. PROBENAUFARBEITUNG 8
2.1.1. ENTSALZUNG G
2.1.2. PROBENEINENGUNG 8
2.2. POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORCSE (PAGE) 9
2.3. FAERBUNG DER POLYACRYLAMIDGELE 9
2.4. AMINOSAEUREANALYSE (ASA) 10
2.4.1. NINHYDRINASA 10
2.4.2. ORTHOPHTHALDIALDEHYD (OPA) ASA . 10
3. ZUCKERANALYTIK 11
3.1. CHEMISCHE DEGLYCOSYLIERUNG 11
3.2. ZUCKERBESTIMMUNG 11
3.2.1. BESTIMMUNG DER NEUTRALZUCKER ALS ALDITOLACTATE 11
3.2.2. BESTIMMUNG DER AMINOZUCKER ALS
NINHYDRINDERIVATE 12
3.3. QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER NEUTRALZUCKER 12
4. PRAEPARATIONSMETHODEN FUER DIE ELEKTRONENMIKROSKOPISCHEN UNTERSUCHUNGEN
13
4.1. NEGATIVKONTRASTIERUNG 14
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4.2. GEFRIERBRUCH UND GEFRIERAETZUNG 15
4.2.1. KIYOFIXIERUNG
15
4.2.2. VAKUUMSUBLIMATION 15
4.3. GEFRIERTROCKNUNG LG
4.4. KRYOPRAEPARATION IN AUROTHIOGLUKOSE LG
*
4.5. ULTRADUENNSCHNITT-TECHNIK 19
4.5.1. GEFRIERSUBSTITUTION 19
4.5.2. EINBETTUNG IN KUNSTSTOFF 20
4.5.3. POLYMERISATION 21
4.5.4. DUENNSCHNITTE UND KONTRASTIERUNG 21
5. TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE 22
5.1. GERAET UND FILMMATERIAL 23
5.2. AUFNAHMEN UNTER NIEDERDOSISBEDINGUNGEN 24
5.3. SPOTSCAN-TECHNIK 25
5.4. AUFZEICHNUNG VON KIPPSERIEN 28
5.5. OPTISCHE DIFFRAKTOMETRIE 28
6. DAS RASTERTUNNELMIKROSKOP - 9
6.1. THEORETISCHE GRUNDLAGEN 29
6.2. PRAEPARATION FUER DAS RASTERTUNNELMIKROSKOP , ^
31
6.3. MESSUNGEN 32
7. BILDVERARBEITUNG 33
7.1. DIGITALISIERUNG 33
7.2. KORREKTUR DER KONTRASTUEBERTRAGUNGSFUNKTION 33
7.3. KORRELATIONSMITTELUNG 35
7.4. KORRESPONDENZANALYSE 3G
DREIDIMENSIONALE REKONSTRUKION
7.5.
38
C. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 41
1
. ANORDNUNG DES OBERFLAECHENPROTEINES VON M. LIMICOLA
41
1.1. ULTRADUENNSCHNITT UND GEFRIERBRUCH-UNTERSUCHUNGEN 41
1.2. GEFRIERAETZUNG UND RELIEFREKONSTRUKTION DES OBERFLAECHENPROTEINS 43
2. PROTEINCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DES OBERFLAECHENPROTEINS 47
2.1. APPARENTES MOLEKULARGEWICHT DES GLYKOSYLIERTEN UND
DEGLYKOSYLIERTEN OBERFLAECHENPROTEINS 47
2.2. AMINOSAEUREANALYSE 49
2.3. ANALYSE DER ASSOZIIERTEN ZUCKER 51
2.3.1. ZUCKERBESTIMMUNG ' 51
2.3.2. QUANTIFIZIERUNG DER NEUTRALZUCKER 52
3. ABBILDUNG DES OBERFLAECHENPROTEINS MIT NEGATIVKONTRASTIERUNG 53
3.1. KORRELATIONSMITTELUNG DER INNEN-UND AUSSENSEITE DES S-LAYERS 53
3.2. EINFLUSS DER TRITON-BEHANDLUNG 55
4. GEFRIERTROCKNUNG UND BEDAMPFUNG 63
4.1. VERGLEICH VON PRAEPARATIONSMETHODEN MIT UND OHNE VAKUUMTRANSFER 63
4.2. ROTATIONSBEDAFIAPFUNG UND SYMMETRIEBESTIMMUNG DES ISOLIERTEN,
GEFRIERGETROCKNETEN S-LAYERS 65
4.3. SCHRAEGBESCHATTUNG UND RELIEFREKONSTRUKTION VON ISOLIERTEN,
GEFRIERGETROCKNETEN S-LAYEM 73
5. ERGEBNISSE DER UNTERSUCHUNGEN MIT DEM RASTERTUNNELMIKROSKOP 79
5.1. DICKENBESTIMMUNG DES S-LAYERS DURCH MESSUNGEN MIT DEM
RASTERTUNNELMIKROSKOP 79
6. DREIDIMENSIONALE REKONSTRUKTION DES NEGATIV-KONTRASTIERTEN
SURFACE-LAYERS 83
STRUKTUR DES S-LAYERS VON
M. LIMICOLA IN PROJEKTION MIT 0.8 NM AUFLOESUNG 90
7.1. PRAEPARATION FUER DIE KRYOELEKTRONENMIKROSKOPIE 90
7
.
7.1.1. OPTIMIERUNG DES EINBETTUNGSMEDIUMS
7.1.2. DAS DRIFT-PROBLEM
7.2. PROJEKTIONS-STRUKTUR DES IN AUROTHIOGLUKOSE EINGEBETTETEN S-LAYERS
ABKUERZUNGEN
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